(별표 1) 검사용 시료 처리방법

1. 시료 처리 방법

검사용 시료는 살아있는 상태로 운반되어야 하며, 시료의 채취 장소, 시료수, 채취 당시의 상태(사망/빈사) 등을 자세히 기술하여 시료에 부착하여야 한다.

2. 정밀검사 시료의 처리 방법

PCR 검사를 위한 시료는 검사용과 보관용으로 구분하여 확보한다. 검사용 시료는 항목별 검사 방법에서 권장하는 대로 pooling하고, 보관용 시료는 확정진단을 위하여 가능한 한 주요 장기별로 최대한 확보해 두는 것이 좋다. PCR 검사를 위하여 pooling한 시료(50마리의 경우 3〜5개의 E-tube)는 균질화 한 후 각각 4등분(1차검사용, 재검사용, 확정진단요청용, 검증용)하여 아래의 모식도에 따라 분석한다.

방 법	모식도
시료가 50마리일 경우 PCR 분석을 위해 3〜5개의 E-tube에 10〜15마리씩 pooling한다 (A, B, C, D, E).	A B C D E
각각의 E-tube에 들어있는 조직을 균질화한후 4등분한다. 즉 총 15〜20개의 E-tube를 만든다 (A-1～4/ B-1～4/ C-1～4/ D-1～4/ E-1～4).	A-1～4 B-1～4 C-1～4 D-1～4 E-1～4
A-1, B-1, C-1, D-1, E-1 tube의 시료에서 template를 추출한다 (TA-1, TB-1, TC-1, TD-1, TE-1).	A-1 B-1 C-1 D-1 E-1
각각의 template에 대해 PCR을 3반복으로 실시한다 (TA-1-1～ 3/ TB-1-1～3/ TC-1-1～3, TD-1-1～3/ TE-1-1～3).	TA-1-1～3 TB-1-1～3 TC-1-1～3 TD-1-1～3 TE-1-1～3

3. 정밀검사 결과에 따른 조치 사항

PCR 검사 결과 수산동물전염병의 감염이 의심될 경우, 재검사용 조직에서 한번 더 template를 추출해 동일한 방법으로 PCR (재검사)을 실시한다. 재검사에서도 동일한 결과가 나올 경우, 국립수산과학원 수산생물방역과로 확정진단을 요청하고 이때 1차검사와 재검사에서 확보한 DNA 시료와 확정진단용 조직을 함께 송부한다.