[별표12] 복합제의 제제별 독성시험

① 경구투여제의 독성시험

1. 단회투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 72시간이상

다. 투여방법 : 경구투여

라. 복합제의 유효성분 모두가 경구투여시, 문헌 등에 의한 LD50값 등으로 보아 저독성(LD50이 2g/kg 이상인 경우)이라 판단되는 경우에는 그 유효성분 및 복합제의 시험을 생략할 수 있다.

2. 1개월 반복투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 1개월 이상

다. 투여량 : 용량단계는 적어도 3단계의 시험물질 투여군으로 하고, 최대내성용량 및 무해용량 등을 포함하여 용량반응관계가 나타날 수 있도록 설정한다.

라. 투여방법 : 경구투여

마. 복합제의 유효성분 모두가 경구투여시 문헌 등에 의한 LD50값 등으로 보아 저독성(LD50이 2g/kg 이상인 경우)이라 판단되는 경우에는 그 유효성분 및 복합제의 시험을 생략할 수 있다.

바. 복합제의 단회투여독성 시험결과 및 약리작용 등으로 보아 1개월 반복투여독성시험을 생략할 수 있다.

3. 3개월이상 반복투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 3개월 이상

다. 투여방법 : 경구투여

라. 복합제의 반복투여독성과 각 유효성분의 반복투여독성시험결과가 독성학적으로 차이가 없다고 추정되는 경우에는 3개월이상 반복투여독성시험을 생략할 수 있다.

마. 연용 가능성이 전혀 없는 복합제에 대해서는 3개월이상 반복투여독성시험을 생략할 수 있다.

② 주사제의 독성시험

1. 단회투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 72시간 이상

다. 투여방법 : 원칙적으로 임상적용 경로

라. 사람에 적응하는 방법이 정맥주사인 복합제에서 정맥주사시 정확한 LD50값을 구하기 어려운 경우 그 유효성분 및 복합제의 시험을 생략할 수 있다.

마. 복합제의 유효성분 모두가 정맥주사시 문헌 등에 의한 LD50값 등으로 보아 저독성이라 판단되는 경우에는 그 유효성분 및 복합제의 시험을 생략할 수 있다.

2. 1개월 반복투여독성시험 : 투여방법은 임상적용 경로로 하며 기타 사항은 경구투여제의 시험방법에 준한다.

가. 사람에 적응하는 방법이 근육주사인 경우 피하주사방법으로 대체할 수 있으며, 정맥주사인 경우 복강내 주사방법으로 대체할 수 있다.

3. 3개월이상 반복투여독성시험 : 투여방법은 임상적용 경로로 하며 기타 사항은 경구투여제의 시험방법에 준한다.

가. 사람에 적응하는 방법이 근육주사인 경우 피하주사방법으로 대체할 수 있으며, 정맥주사인 경우 복강내 주사방법으로 대체할 수 있다.

③ 수액제의 독성시험

1. 단회투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 72시간

다. 투여방법 : 정맥주사

라. 시험약제 : 수액 및 대조수액

마. 대조수액은 원칙적으로 다음의 것을 사용한다.

(1) 당 제 제 : 대응하는 농도의 포도당 주사액

(2) 혈장증량제 : 기존의 것으로서 화학적으로 유사하고 널리 사용되는 제제

(3) 전해질제제 : 링겔액

(4) 아미노산제제 : 기존의 것으로서 가장 유사하고 널리 사용되는 제제

바. 상기 각 항이 조합된 제제의 경우에는 유효성분에 해당하는 대조수액을 각각 당해 제제의 농도에 대응하도록 혼합 제조한 것을 사용하여야 한다.

사. 독성이 낮아서 LD50값을 구하는 것이 곤란한 제제의 경우는 200g/㎏을 투여한 경우에서의 독성소견을 제시한다.

2. 1개월 반복투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 1개월 이상

다. 투여방법 : 정맥주사 또는 점적정주

라. 시험약제 : 수액 및 대조수액

마. 투여량 : 수액제의 단회투여독성시험에 따라서 적의 투여 가능한 양으로 한다.

바. 대조수액은 원칙적으로 다음의 것을 사용한다.

(1) 당제제 : 대응하는 농도의 포도당 주사액

(2) 혈장증량제 : 기존의 것으로서 화학적으로 유사하고 널리 사용되는 제제

(3) 전해질제제 : 링겔액

(4) 아미노산제제 : 기존의 것으로서 가장 유사하고 널리 사용되는 제제

사. 상기 각 항이 조합된 제제의 경우에는 유효성분에 해당하는 대조수액을 각각 당해 제제의 농도에 대응하도록 혼합 제조한 것을 사용하여야 한다.

아. 상기 투여량으로 변화가 없을 경우에는 최대 안전량으로 시험한다.

3. 3개월 이상 반복투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 3개월 이상

다. 투여방법 : 정맥주사 또는 점적정주

라. 투여량 : 1개월 반복투여독성의 투여량과 같음

마. 1개월 반복투여독성시험에서 차이가 없다고 추정된 경우에는 3개월이상반복투여독성시험을 생략할 수 있다.

④ 외용제의 독성시험

1. 단회투여독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 72시간 이상

다. 투여방법 : 피하주사

라. 복합제의 유효성분 중 모두가 피부적용시, 문헌 등에 의한 LD50값 등으로 보아 저독성이라고 판단되는 경우에는 그 유효성분 및 복합제의 시험을 생략할 수 있다.

2. 1개월 반복투여경피독성시험

가. 동물의 종류 : 1종 이상

나. 관찰기간 : 1개월 이상

다. 시험약제의 농도 : 복합제 및 복합제의 유효성분의 농도를 사람에게 적용하는 농도의 약 5배에 해당하는 양으로 조제한다.

3. 점막자극시험

가. 동물의 종류 : 토끼

나. 투여방법 : 점안

다. 점막자극시험을 필요로 하는 외용제는 사람에 적용하는 방법이 점막에 사용하는 것 또는 점막에 사용될 가능성이 있는 것으로 한다.

라. 점막에 대한 자극성을 알기 쉬운 시험방법이 이 방법보다 우수한 것이 있을 경우 그 방법에 따라서 시험할 수 있다.

[주1]

약물동태학적자료는 시험물질 및 시험종류별로 다르기는 하나, 보통 혈장(또는 전혈 또는 혈청)에서 시험물질 및 그 대사체의 농도를 적절한 시점에 측정하여 산출한다. 그러나, 시험물질에 따라서 혈장외의 다른 생체시료(예 : 뇨 또는 장기조직 등)에서 측정하는 것이 적절할 수 있다. 독성동태시험에서 노출도를 평가하는데 가장 일반적으로 사용되는 약물동태학적 지표는 혈장(또는 전혈 또는 혈청)으로부터 산출한 혈중농도-시간반응곡선하면적(AUC), 최고혈장농도(Cmax), 최고혈장농도에 도달하는 시간(Tmax) 및 특정시간에서의 혈장농도(Ctime)이다. 시험물질에 따라서 혈장단백과 결합하지 않은 시험물질의 농도에 근거하여 노출도를 산출하는 것이 바람직할 수도 있다. 또한 생체이용율, 생체내반감기, 혈장단백과 결합하지 않은 시험물질의 비율, 체내분포용적등이 독성동태시험결과를 해석하는데 유용할 수도 있다. 이러한 약물동태학적지표와 생체시료 채취시간은 시험물질과 시험목적에 따라 적절하게 선택되어야 한다.

[주2]

독성동태시험의 2차적 목적은 독성시험에서 얻어진 노출 자료와 독성학적 소견과의 상관성을 규명하여 임상사용시의 안전성을 적절히 평가하며, 독성시험에서 동물종의 선택과 투여계획 설정 근거를 제공할 뿐 아니라 다음 독성시험 계획 수립시 정보를 제공하는 것이다.

[주3]

비설치류는 독성증상을 명확하게 관찰할 수 있는 용량도 가능함.

[주4]

단기사용(1주 이내) 또는 생명을 위협하는 질환치료를 목적으로 하는 생물공학의약품의 경우, 2주 반복투여독성시험을 수행할 수 있다.

[주5]

비설치류에 있어서는 9개월의 반복투여독성시험을 고려한다.

[주6]

시험물질이 고도의 체내축적성, 비가역적인 독성의 발현, 투여기간의 장기화에 의해 현저히 독성이 증가하는 특성을 가진 경우

[주7]

과학적 유연성 : 이 기준은 강제 규칙이 아니며 최종적인 것이라기 보다는 출발점이다. 이 기준은 연구자가 시험물질이나 기술수준에 관한 이용 가능한 정보에 따라 시험계획을 강구할 수 있는 기본적 근거가 된다. 이 기준에는 몇 가지 대체시험방법이 언급되어 있으나 방법을 탐구하거나 고안해 낼 수 있는 것도 있다. 시험계획을 고안하는 중요한 목적은 생식․발생에 대한 독성의 징후를 밝혀내는 것이다. 시험방법 및 기술적인 진행과정의 세세한 부분들은 본문에서 제외했다. 어떤 실험실에서는 적절한 기술이 다른 실험실에는 적절하지 않을 수도 있으므로 그러한 결정은 연구자들의 재량으로 맡기는 것이 옳다.

[주8]

시기에 관한 결정 : 이 기준에서는 교미가 밤사이에 이루어졌더라도 질정검사에서 정자가 확인되거나 질전이 확인된 날을 임신 0일로 한다. 다른 언급이 없으면 랫드, 마우스, 토끼의 착상시기는 임신 6-7일이고, 경구개가 폐쇄되는 시기는 임신 15-18일로 추정한다. 다른 방법도 마찬가지로 인정되나 보고서에 반드시 명시하여야 한다. 또한 투여기간에 공백이 없도록 다른 시험에서도 시기를 일치시켜야 한다. 일련의 시험에서 투여기간은 적어도 하루정도 중복이 되도록 기간을 설정하는 것이 바람직하다. 교미일은 태자 및 신생자에 관한 수치에 영향을 주기 때문에 정확성을 기해야 한다. 차세대에 대해서도 비슷한 방법으로, 특별한 언급이 없는 한 신생자가 태어난 날을 출산 후 또는 수유 0일로 산정한다. 그러나, 특이하게 분만이 지연되거나 분만시간이 연장될 경우 교배 후 시간을 참조하는 것이 유익할 것이다.

[주9]

일차시험 및 추가시험 : 정도의 차이는 있으나 모든 일차시험(기준에 근거한 시험)은 그 성질상 집약된 최종 반응결과를 나타낸 것이다. 즉 어느 하나의 지표에서 보인 영향에는 몇 개의 다른 원인이 있을 수 있다. 예로서 출생시 한배새끼수 감소의 원인은 배란율(황체수)의 감소, 착상전 흡수의 증가, 착상 후 흡수의 증가 또는 출생 직후의 사망증가가 원인일 수 있다. 또한 이러한 사망은 초기에 유발된 기형에 기인할 수 있으며, 이러한 기형은 그 후에 따르는 이차적인 변화에 의해 관찰할 수 없게 되었을 수도 있다. 특히 대조군에서 낮은 빈도로 발생하는 자연발생적 영향에 대해서는, 약물투여에 의한 것과 자연적으로 발생하는 것의 구별은 다른 종류의 영향과 연관성을 고려하여 판단한다. 독성물질은 보통 한가지 이상의 영향을 용량의존적으로 유발한다. 예를 들면, 태자사망의 증가와 경도의 형태적 변화의 발생률 증가는 기형 유발과 거의 일정하게 연관이 있다. 어떤 지표에 대한 영향이 밝혀지면, 그와 연관된 항목에 대하여 추가시험을 고려하지 않으면 안된다. 즉, 그 물질의 독성의 본질, 범위 및 기원을 명확히 밝혀야 한다. 추가시험에서는 사람의 위험성 평가에 이용되는 용량반응관계를 확인하여야 한다. 이것은 일차시험에서 투여에 의한 변화와 자연발생적 변화를 구별하기 위해 용량의존성 여부를 조사하는 것과는 다르다

[주10]

예비시험 : 생식․발생독성시험들을 계획하고 시작할 때, 보통 단회투여독성 및 1개월 이상 반복투여독성시험에서 얻은 정보를 활용할 수 있다.  이러한 정보로부터 생식․발생독성시험의 시험물질 투여량을 설정하는 것이 충분히 가능한 것으로 생각된다. 예비시험을 충분히 실시한 경우 그 결과는 본시험 용량설정에 대한 과학적 근거의 일부가 된다. 이러한 시험은 원칙적으로 GLP 기준에 관계없이 제출되어야 한다. 이로써 동물의 불필요한 사용을 피할 수 있게 된다.

[주11]

동물 종과 계통의 선택 : 생식․발생독성시험을 위한 동물 종과 계통을 선택하는데 있어서 적절한 동물모델 선정에 주의를 기울여야 한다. 다른 독성시험에서 사용한 동물과 같은 종 및 계통을 선택할 경우 부가적인 예비시험을 실시하는 것을 피할 수도 있다. 만약 선택된 동물 종이 사람의 모델로서 적절하다는 것이 독성동태자료나 약리 및 독성 자료에 의해 밝혀질 수 있다면 단일종의 시험만으로도 충분하다. 제2의 동물 종을 사용하더라도 사람과 유사성을 나타내지 않는다면 그 동물 종을 사용하는 의미가 거의 없다. 시험물질, 시험계획, 그리고 결과의 해석과 연관지어서 동물 종(계통)의 장․단점을 고려해야 한다. 모든 동물 종에는 나름대로 장점이 있다. 랫드, 그 다음으로 마우스가 일반적인 목적에 좋은 모델이다. 토끼는 배․태자독성시험을 제외한 다른 생식․발생독성시험에서나 반복투여독성시험에서 “비설치류”로서는 경시되어 온 경향이 있으나 수태능시험 특히 수컷의 생식능시험에는 유용한 모델동물로서의 특성을 갖고 있다. 토끼나 개(반복투여독성시험에서 제2의 동물 종으로 자주 사용됨)는 모두 고통을 주는 기술(전기자극 사정)을 사용치 않고도 정액 시료를 쉽게 얻을 수 있다. 같은 개체에서 시간에 따른 정액분석이 가능하다. 그 외 대부분의 다른 종은 일반적 목적의 모델동물로서는 좋지 않으나 매우 특수한 목적의 시험에는 유용할 수 있다. 모든 동물 종은 다음과 같은 단점을 갖고 있다.

가. 랫드 : 성호르몬에 대해 민감하다. 프로락틴이 임신성립과 초기 임신유지에 주요한 호르몬이기 때문에 프로락틴 분비에 영향을 주는 도파민 작용약에 대하여는 부적절하다. 임신말기에 비스테로이드성 항염증제에 대해 감수성이 높다.

나. 마우스 : 대사속도가 빠르다. 스트레스에 대하여 감수성이 높다.  태자기형이 무리지어 일어나는 것이(모든 종에서 일어나지만) 특징이다. 태자의 크기가 작다.

다. 토끼 : 종종 독성동태시험이나 독성시험의 자료가 충분치 않다. 일부 항생물질과 소화관 장애에 대한 감수성이 높다. 일반증상의 해석이 쉽지 않다.

라. 기니픽 : 종종 독성동태시험자료나 독성시험의 자료가 충분치 않다. 일부 항생물질과 소화관 장애에 대한 감수성이 높다. 임신기간이 길다. 배경자료가 충분치 않다.

마. 집돼지 또는 미니 돼지 : 배경자료의 변동이 크고 기형발현이 높다. 다량의 시험물질이 필요하다. 사육설비에 비용이 소요된다. 배경자료가 충분치 않다.

바. 페렛(Ferrets) : 적절한 관리시스템이 없으면 계절성 번식을 한다(번식 성공률이 사람/동물 사이의 관계에 매우 의존적이다). 배경자료가 충분치 않다.

사. 햄스터 : 정맥내 투여가 불가능하지는 않으나 매우 어렵다. 투여한 약물을 볼주머니에 저장할 가능성이 있다. 성질이 공격적이고 소화관장애에 대하여 감수성이 높다. 많은 약물에 대하여 민감한 최기형 유발 반응을 보인다. 태자의 크기가 작다.

아. 개 : 계절성 번식을 한다. 근친교배에 의한 폐해가 나타나기 쉽다. 배경자료가 불충분하다.

자. 영장류 : 다른 동물 종과 마찬가지로 사람과 독성동태자료가 다를 수 있다. 배경자료가 불충분하다. 종종 위해성을 검출하기에 충분한 수의 동물사용이 쉽지 않다. 장애를 검출하는 것을 목적으로 하는 시험보다는 생식․발생독성이 알려진 물질의 특성을 검사하는 목적의 시험에 적합하다.

[주12]

전동물(whole animal) 이외의 시험계의 사용 : 전동물을 사용하는 것 이외에 여러 시험계가 개발되어 예비시험(예비검색 또는 우선순위 결정시험)과 추가시험에 이용되고 있다. 화학구조 또는 약효가 유사한 화학물질을 예비적으로 검색하기 위해서는 적어도 한물질 이상에 대하여는 동물시험에서의 결과를 아는 것이 필수적이다(추정에 의하여 효과가 예측됨). 이러한 시험계획으로 보다 높은 단계의 시험을 위한 시험물질을 선택할 수 있다. 추가시험 또는 물질의 특성을 알아보기 위해서는 전동물 시험이 아닌 다른 시험계를 이용하여 상세한 발생과정에 대한 연구가 가능하다. 예를 들면, 독성의 기전연구, 농도-반응 관계의 확인, 감수성이 높은 시기의 선택, 또는 특정 대사체의 영향을 검출하는 것 등이다.

[주13]

용량설정 : 반복투여독성시험과 비슷한 용량을 생식․발생독성시험에서 사용함으로써 전신성 일반독성과 관련지어 수태능에 대한 영향의 해석이 가능하다. 고용량투여군 모체에서 어느 정도의 약한 독성이 유발되는 것이 바람직하다. 시험물질의 종류에 따라 반복투여독성시험이나 생식․발생독성의 예비시험으로부터 고용량을 설정하는 경우 그 규정요소는 다음과 같다.

가. 체중증가의 억제

나. 체중증가의 항진, 특히 항상성 기전의 변화와 관련되는 경우

다. 특이적 표적장기 독성

라. 혈액학적 검사, 혈액생화학적 검사

마. 과도한 약리반응. 뚜렷한 임상반응(예 : 진정, 경련)을 수반하거나 수반하지 않는 것도 있다.

사. 투여경로와 관련이 있는 시험물질 또는 처방의 물리화학적 성상에 의하여 실제 투여 가능한 용량은 한계가 있다. 보통 1g/kg/day가 적당한 한계용량이다.

아. 독성동태시험은 저독성 시험물질의 최고용량을 결정하는데 유용하다. 그러나 투여량을 증가시켜도 혈장중 또는 조직내 약물농도가 증가하지 않을 때에는 용량을 증가시키는 것이 의미가 없다.

자. 예비시험에서 배․태자 사망률의 현저한 증가

[주14]

용량-반응 관계의 결정 : 생식․발생독성시험에서 변이가 많은 경우 자연발생적인 것인지 투약에 의한 영향인지를 구별하기가 어려우므로 용량의존성 여부가 투약에 의한 영향 가능성을 결정하는 중요한 수단이 된다. 생식․발생독성시험에서는 용량-반응 기울기가 급경사를 이루므로, 용량사이 간격이 넓은 것은 권장되지 않는다. 어떤 관찰된 효과에 대해 한 시험에서 용량-반응관계를 검토하는 경우, 최소한 세용량 이상의 용량군과 적절한 대조군을 두는 것이 권장된다. 용량-반응관계가 의심스러우면 네번째 용량군을 두어 용량간격이 너무 차이가 나지 않도록 한다. 이러한 계획으로 생식․발생독성에 대한 "무독성량"을 찾아내야 한다. 무독성량을 구하지 못한 경우, 보다 상세한 연구와 추가시험을 하여야 한다.

[주15]

다른 투여경로에 의한 노출 : 어떠한 투여경로가 신체에 큰 부담을 주는 것을 혈중농도-시간반응곡선하면적(AUC)등으로 보여줄 수 있다면 이보다 작은 신체부담을 주는 경로 혹은 현실적으로 어려운 경로(예 : 흡입)를 연구할 이유가 거의 없다. 새로운 투여경로를 적용하는 시험을 계획하기 전에 기존의 독성동태자료를 이용하여 그 시험의 필요성을 검토하여야 한다.

[주16]

임신동물에서의 독성동태시험 : 임신, 수유동물에 대한 독성동태연구는 급격한 생리적 변화 때문에 문제를 일으킬 수 있다. 이러한 문제를 해결하기 위하여 2상 혹은 3상 연구를 고려하는 것이 최선이다. 시험을 계획할 때 독성동태 자료(종종 비임신 동물에서의 자료)는 시험동물 종의 일반적 적합성에 대한 전반적 정보를 제공하며 연구방법의 결정과 용량설정에 참고가 된다. 시험 중에 독성동태연구를 수행하게 되면 약물투여량의 적정성을 확인하거나 예측되는 동태패턴으로부터 벗어난 것을 입증할 수 있다.

[주17]

다른 대체안의 선택예 : 2g/㎏에서 사망예가 없고 1g/㎏에서 반복투여에 의하여 아무런 독성이 없는 물질에 있어서는 대조군, 2개의 시험군(0.5와 1.0g/㎏)이면 이세대시험으로서 충분한 것으로 생각된다. 그러나 동물 종의 선택이 적절했느냐와 시험물질이 효과가 있는 약물이냐에 대한 문제가 발생할 수 있다.  일생에 한번, 단회투여되는 약물(예 : 진단약, 수술용 의약품)은 투여기간에 관계없이 임상치료용량의 두배 이상을 반복투여하는 것은 곤란할 수 있으며, 이런 경우에는 기간을 단축시켜 고용량을 투여하는 것이 적절하다. 암컷에 대해서는 사람에서의 노출을 고려할 때 기관형성기 이후에 노출시킬 필요는 거의 없다. 도파민 작용약 혹은 혈중 프로락틴 수준을 저하시키는 약물의 경우 생식․발생독성시험에 랫드는 적절하지 않고 토끼가 적절할 수 있으나 많이 사용되지 않고 있다. 반복투여에 의해 혈장 중 독성동태에 변화가 나타나는 약물은, 배․태자발생시험에서 배․태자발달에 대한 위해 가능성이 충분히 평가되지 않을 수 있다. 이러한 경우 수태능 및 초기배 발생시험에서 암컷의 투여기간을 임신 17일까지 연장시키는 것이 바람직하다. 시험 말기 부검에서 수태능과 배자․태자발생에 미치는 영향을 같이 평가할 수 있다.

[주18]

교배전 투여 : 수컷의 교배전 투여기간의 단축은 종래 교배전 장기간 투여하도록 요구했던 수태능에 관한 시험계획에서 정자형성 과정에 대한 기초적 연구자료의 축적과 재평가에 근거한 것이다. 즉 수컷의 생식에만 선택적으로 영향을 주는 약물은 드물고 정자형성에 영향을 주는 화학물질은 대부분 감수분열 이후의 과정에 영향을 미쳐 고환의 무게에 영향을 미친다. 암컷과의 교배는 정자형성에 미치는 영향을 검출하는데 감도가 낮은 방법이다. 고환의 병리조직검사는 정자형성에 미치는 영향을 검출하는 가장 감도가 높은 방법이다. 수컷 생식기관의 적절한 병리조직검사(예: 부잉액에 고정, 파라핀포매, 고환의 2내지 4㎛ 횡단절편, 부고환 종단절편, PAS 및 헤마톡실린 염색)는 정자형성에 미치는 영향을 검출하기 위한 직접적인 검사방법이다. 정자검사(정자수, 정자운동성, 정자형태)는 다른 방법에 의해 얻은 지식을 확인하고 다시 한번 영향을 특징짓기 위하여 이용 가능한 검사이다. 정자검사에는 정관 또는 부고환 미부에서 채취한 시료를 사용하는 것이 보다 적절하다. 정자형성(및 암컷의 생식기관)에 미치는 영향에 관한 정보는 반복투여독성시험 또는 생식․발생독성시험에서 얻어질 수 있다.  수컷 생식기관의 병리조직검사 및 정자검사에 의해 검출되지 않는 수컷 생식에 미치는 영향을 찾아내기 위하여는 교배전 4주간 투여 후 암컷과 교배하는 방법이 그 이상 장기간 투여 후 암컷과 교배시키는 방법과 비교하여 같은 정도로 유효하다는 것이 밝혀졌다. 경우에 따라서는 2주간 투여가 허용될 수도 있다. 그러나 교배전 투여를 2주간 하는 경우에는 그 타당성이 충분히 납득될 수 있도록 설명이 필요하다. 수태능시험의 검색범위를 넓게 실시하지 않으면 안된다는 것을 시사하는 자료가 인정되는 경우에는 보다 상세히 해당되는 영향의 특징을 명확히 하기 위한 적절한 시험이 계획되어야 한다.

[주19]

동물수 : 과거 및 기존의 기준, 그리고 이 기준에서도 각 군당 동물수에 대한 과학적 근거는 거의 없다. 동물수는 시험관리 전반에 지장을 초래하지 않고 취급할 수 있는 최대시험규모에 의해서 결정된다. 이는 동물의 구입․사육비용이 많이 들수록 동물수가 작아진다는 사실에 의해 알 수 있다. 이상적으로는 모든 종에 대하여 최소한 같은 규모의 동물수가 요구되어야 하며, 영장류등 사용빈도가 낮은 동물 종에서는 동물수를 보다 많이 하는 경우도 있다. 또한 필요한 동물수는 그 군에서 영향이 나타날 것으로 예상되는지의 여부에 따라 결정하는 것도 명확하다. 높은 빈도로 영향이 검출되는 것에 대해서는 적은 수의 동물만 필요하며, 영향이 없는 것을 추정하기 위해 필요한 동물수는 검토되는 지표를 고려하여야 하는데, 대조군에서의 발현율(희귀 사건) 또는 중앙주변에의 분산경향(계량치적 혹은 계량치적 변수)을 고려하여 동물수를 정해야 한다. “출생자에 대한 투여”[별표 23]을 볼 것. 희귀사건(기형, 유산, 총태자의 손실 등)을 제외한 모든 경우에, 설치류와 토끼에서 16내지 20 한배새끼에 대한 평가로 연구간에 일관성을 얻을 수 있다. 각 군당 16 한배새끼 이하에서는 연구간 결과에 일관성이 없으며, 군당 20내지 24 한배새끼 이상에서도 일관성과 정확성이 크게 높아지지는 않는다.  이러한 동물수는 평가와 관계가 된다. 만약 다른 평가를 위해 투여군을 나누어야 하는 경우에는 시험시작 시점에서 동물수가 배가 되어야 한다. 마찬가지로 2세대 번식시험에서도 F1 세대의 최종평가에 16내지 20 한배새끼가 필요하다. 자연감소가 있으므로 시험을 시작할 때의 F0 세대의 수가 더 커야 한다.

[주20] 교배

교배비율 : 암․수 모두에 투여할 때 또는 암․수동물에 대해 같은 목적으로 연구할 때 교배비율은 1:1이 좋다. 그 이유는 임신성공률이 높고 분석오류를 피할 수 있으며 결과 해석에 가장 안전하기 때문이다.

교배기간과 방법 : 대부분의 연구기관에서는 2 내지 3주간의 교배기간을 두며, 질전 확인 혹은 질정 검사에서 양성인 암컷은 격리시켜 놓거나 또는 그대로 동거시키기도 한다. 대부분의 랫드는 동거한지 5일 이내에 교미하게(동거 후 첫 발정주기에) 되나 일부 암컷은 위임신이 된다. 위임신 암컷을 수컷과 약 20일 정도 두면 발정주기가 다시 시작되고 임신할 수 있게 된다.

[주21]  최종도태

암컷 : 암컷에서 착상기에 투여를 중지한 경우에는 일반적으로 임신 13 내지 15일에 부검하는 것이 수태능 또는 생식기능의 영향평가(예 : 착상과 흡수자리 구분)에 적당하다. 일반적으로, 수태능시험에서 후기 배자손실, 태자사망과 형태적 이상에 대한 정보를 얻고자 임신 20/21일에 부검하는 것은 유해작용의 검출에 필요하지 않을 수 있다.

수컷 : 교배결과가 나올 때까지 수컷 부검을 연기하는 것이 바람직하다. 수컷 부검을 연기하여도 교배결과가 모호할 때에는 수태능 혹은 불임을 확인하기 위해 비투여 암컷과 교배시킬 수 있다. 수태능 및 초기배 발생시험의 일부로서 투여된 수컷은 투여가 교배기간 이후 부검시까지 계속된다면 수컷 생식계에 대한 독성 평가에 사용될 수 있다.

[주22]

관찰 : 투여기간 중 임신 암컷의 체중을 매일 측정하여 유용한 정보를 얻을 수 있다. 의약품에 대하여는 임신을 제외한 기간(교배전, 교배기간, 수유기간)에도 주 2회 이상 체중을 측정하는 것이 바람직하다. 임신이 의심되는 랫드 또는 마우스(토끼는 제외)의 자궁을 황화암모늄으로 염색하여 착상 후 초기 배자사망을 확인한다.

[주23]

출생자에 대한 투여 : 이 기준은 의약품에 대한 기존 기준에서 유래된 것이므로 이유기에서 성적 성숙에 이르기까지의 전과정에 걸쳐 노출시키지 못하며 생식수명의 단축가능성도 다루지 못한다. 어린이와 청소년에게 사용될 수 있는 의약품등의 유해작용을 검출하기 위해서는 특정 일령의 출생자에게 직접 투여하는 특수시험(사례별로 시험계획을 세우는 것)이 고려되어야 한다.

[주24]

출생 전․후 발생 및 모체기능시험 : 출생 전․후 발생 및 모체기능시험을 두 가지 시험, 즉 배자발생기간에 노출하는 시험과 태자기간, 출산 및 수유기간에 노출하는 시험으로 각각 분리한다면 두시험 모두에서 출생자의 출생 후 평가가 요구된다.

[주25]

F1-동물 : 이 기준에서는 생식기능의 평가에 이용할 F1개체를 이용하여 행동 및 다른 기능시험을 실시할 수 있으므로 이유 후에 한배새끼 당 암․수 각 1수의 F1 동물을 관찰하는 것이 권장된다. 이럴 경우 각 개체 간에 다른 시험에서 나타난 결과와의 연관성을 서로 참고할 수 있다. 그러나 실험실에 따라 행동평가와 생식기능평가에 다른 쌍의 동물을 이용하고 있다. 각 실험실에 따라 어느 방법이 적합한지는 적용되는 시험조합과 이용할 수 있는 설비 등에 따라 다르다.

[주26]

한배새끼수의 조정 : 생식․발생독성시험에서 한배새끼수의 조정여부에 대하여는 아직 논란중이다. 연구자는 반드시 한배새끼수의 조정여부를 설명하여야 한다.

[주27]

신체발달, 감각기능, 반사 및 행동 : 신체발달의 가장 중요한 지표는 체중이다. 개안, 이개개전, 피모발달, 절치맹출 등 이유 전 발달지표는 출산자의 체중과 상관성이 높다. 적어도 임신기간이 유의적인 차이를 보이는 경우에는 체중은 출생 후 시간보다도 교미 후 시간경과에 관련된다. 정향반사, 청각반사, 공중낙하 정향반사 및 빛에 대한 반사등도 마찬가지로 신체발달에 관련된다. 이유 후 발달지표로서 권장되는 항목은 암컷의 질개구와 수컷의 귀두와 포피와의 분리가 있다. 수컷의 귀두와 포피와의 분리는 테스토스테론의 증가와 관련이 있고 정소하강과는 관련이 없다. 이러한 지표들은 성적 성숙이 시작되었음을 보여주며, 대조군과의 차이가 특이적인 것인지 또는 일반적 성장과 관련이 있는 것인지를 명확히 하기 위해 성적 성숙기의 체중을 기록하는 것이 권장된다. 현재까지 기능검사는 거의 행동검사에 방향이 맞추어져 왔고 많은 노력이 경주되었지만 권장되는 특정한 시험방법은 인정되지 않는다. 연구자들이 감각기능, 운동기능, 학습 및 기억에 미치는 영향을 평가할 수 있는 방법을 찾아내는 노력이 필요하다.

[주28]

태자의 개체식별 및 평가 : 이상형태를 검출하기 위하여 한 개체에 대한 여러 다른 검사(예를 들어, 체중, 외부검사, 내장 및 골격검사)의 결과를 모두 관련지을 수 있어야 한다. 대조군 및 고용량군의 골격 및 내장 기형검사에서 의미 있는 차이가 관찰되지 않을 경우 중용량 및 저용량군 태자의 관찰이 필요치 않을 수도 있다. 그러나 미래의 검사 가능성에 대비해 고정표본을 보관하는 것이 바람직하다. 고정하지 않은 표본을 미세절개방법으로 관찰한 경우, 고정된 태자표본과 비교하는 것은 곤란하다.

[주29]

통계분석에서 가장 중요한 부분은 서로 다른 변수간의 상관성 검토와 자료의 분포를 명확히 하는데 있다(기술통계). 이 검토에 의해 군 간의 비교방법이 결정된다. 생식․발생독성시험에서 얻은 각종 지표는 보통 정규분포를 따르지 않고, 계량치로 보이는 것부터 극단적 분류까지 다양하다. 추측통계학(통계학적인 유의성을 결정하는 방법)을 사용할 때는 태자나 신생자가 아닌 번식쌍(교미쌍)이나 한배새끼가 비교의 기본 단위로서 사용되어야 한다. 사용된 검정에 대해서는 그 타당성을 설명하여야 한다.

추측통계 : "유의성" 검정(추측통계학)은 결과해석에 있어서 보조수단으로 사용될 뿐이다. 결과의 해석은 생물학적 타당성에 근거하여야 한다. 단순히 "통계적 유의성"이 없기 때문에 대조군과의 차이를 생물학적으로 의의가 없다고 하는 것은 좋지 않다. 또한 "통계적 유의차"가 있기 때문에 생물학적으로 의의가 있다고 생각하는 것도 현명하지 않다. 특히 낮은 빈도로 일어나며 한 쪽으로만 치우쳐 분포하는 사건들(배자사망, 기형)에서는 시험의 통계적 검출력이 낮은 것을 유의하여야 한다. 사용하는 지표의 신뢰구간은 영향의 크기 등이 범위에 있는가를 나타내는 것이다. 통계방법을 사용하는 경우 비교하는 표본단위를 고려하여야 한다. 즉, 개개의 수태산물로서가 아니라 모체(한배새끼)를, 암․수 모두에 투여하였을 때에는 교미쌍을, 2 세대연구에서는 친세대의 교미쌍을 표본단위로 하는 것이 고려된다.

[주 29-1]

자료를 제시할 때에는 시험에 이용된 모든 동물의 시험자료를 설명할 수 있도록 명확하고 간결한 방법으로 각각의 수치를 표시하여 보고서를 작성한다. 시험 시작부터 끝까지 모든 동물개체의 이력을 추적할 수 있도록 총괄하여, 각 개체값 등이 군별 총괄치에 기여하고 있는 바를 쉽게 추정할 수 있게 하여야 한다. 군별 총괄치는 오류를 피하기 위하여 생물학적으로 모순이 없는 형식으로 또는 변수의 분포를 반영하는 형식으로 표시한다. 체중, 사료섭취량, 한배새끼 수 등 개체별 결과표는 간결하고, 가능한 계산된 수치보다는 절대적인 수치로 구성이 되어야 한다. 불필요한 중복은 피하여야 한다. 일반증상, 육안적 해부소견, 이상 등과 같은 출현빈도가 낮은 관찰항목들을 표로 만들려면 양성소견을 나타내는 (소수의) 개체를 한데 모아 기재하는 것이 바람직하다. 특히 형태적 변화(태자기형) 같은 자료를 표시하는 경우 일차 표를 만드는데 이상태자를 갖는 모동물과, 그 한배새끼 중에서 이상이 있는 태자를 명기하고, 이상태자에서 관찰된 모든 변화를 제시하여야 한다. 필요에 따라 위의 표에 근거하여 변화의 유형별로 표를 작성한다.

[주 29-2]

생식․발생독성에 사용되는 용어는 다음 각 호와 같다.

1. 생식․발생독성은 성숙동물의 생식능력에 미치는 영향 이외에 다음을 포함한다.

가. 발생독성 : 동물이 성숙될 때까지 유발된 장애. 즉 배자 또는 태자기에 유발 또는 발현된 장애 및 출생 후에 유발되거나 발현된 장애가 포함된다.

나. 배자독성, 태자독성, 배・태자독성 : 출생 전 노출의 결과로서 수태산물에 나타나는 장애로서 형태이상, 기능이상 및 그러한 영향이 출생 후에 발현되는 것이 포함된다. "배자독성" 또는 "태자독성"과 같은 용어는 장애가 검출되는 시기에 상관없이 유발된 시점/시기에 관계가 있다.

2. 일, 이, 삼세대 연구 : 시험물질에 직접 노출된 동물의 세대수에 의하여 정의된다. 예로서 일세대시험에서는 F0 세대의 직접 노출과 F1세대의 간접 노출(모체를 통한)이 있으며, 시험은 보통 F1세대의 이유기에 끝난다. 농약이나 공업용 화학물질에 대하여 이용되는 이세대시험에서는 F0세대의 직접노출, F1세대의 간접 및 직접 노출, F2세대의 간접적인 노출이 이루어진다. 삼세대시험도 같은 방법에 의해 정의된다.

3. 신체부하 : 물질의 투여에 의해 생기는 개체의 체내에서 약물의 노출량 즉, 원약물이나 대사물의 분포와 축적을 고려하는 것이 포함된다.

[주30]

여유동물군 : 독성시험계획에 포함되는 군으로 본시험동물과 동일한 조건으로 사육, 처치되나 주로 독성동태시험에 사용된다.

[주31]

배․태자 콤파트먼트로의 물질의 이행을 고려하는 것도 중요하나 실제로 태자의 노출은 별개의 시험에서 주로 평가되는 지표이며, 태반통과성으로서 표시하므로 유의하여야 한다.

[주32]

시험물질의 특성 및 시험의 실시목적 등을 고려하여 필요하다고 인정되는 경우에 대체하거나 추가적으로 실시할 수 있는 OECD 유전독성시험은 다음과 같다.

1. 포유동물 골수세포 염색체이상시험

2. 포유동물 세포를 이용한 체외 유전자 돌연변이시험

3. 초파리를 이용한 반성열성치사시험

4. 설치류를 이용한 우성치사시험

5. 포유동물세포를 이용한 체외 자매염색분체교환시험

6. Saccharomyces cerevisiae를 이용한 유전자 돌연변이시험

7. Saccharomyces cerevisiae를 이용한 유사분열 재조합시험

8. 포유동물세포를 이용한 체외 DNA 손상, 수복, 부정기 DNA 합성시험

9. 포유동물 정원세포의 염색체 이상 시험

10. 마우스 스포트 시험

11. 마우스를 이용한 유전성전좌시험

12. 포유동물 간세포를 이용한 체내 부정기 DNA 합성시험,

[주33]

1. 비독성 시험물질은 원칙적으로 5mg/plate 또는 5㎕/plate

2. 세포독성 시험물질은 복귀돌연변이체의 수 감소, 기본 성장균층의 무형성 또는 감소를 나타내는 세포독성 농도

3. 난용성 시험물질은 시험 조건하에서 육안으로 시험물질 침전이 관찰되고 계수를 방해하지 않는 농도

[주34]

S9은 랫드에 적절한 약물대사 효소계의 유도체를 투여한 후 간장으로부터 조제하며, 이 S9에 보효소 등을 넣은 S9 mix를 이용한다.

[주35]

대사활성계를 이용하는 경우, 양성대조 표준물질들은 사용되는 세균 균주의 종류에 기초해서 선택한다.

[주36]

1. 비독성 시험물질은 5㎕/ml, 5mg/ml 또는 10mM 상당의 농도

2. 세포독성 시험물질은 집약적 세포 단층의 정도, 세포 수 또는 유사분열 지표에서의 50% 이상의 감소를 나타내는 농도

3. 난용성 시험물질은 시험 조건하에서 육안으로 시험물질 침전이 관찰되고 계수를 방해하지 않는 농도

[주37]

직접법 및 대사활성화법의 경우 시험물질 처리 시간을 3～6시간으로 하고 다시 정상배지에서 배양하여 시험물질 처리 후 1.5 정상세포주기 경과시기에 제작한다.

[주38]

구조이상에 대하여는 염색분체 및 염색체에 나타나는 구조이상의 종류를 명기한다.

[주39]

1. 비독성 시험물질은 5mg/ml 또는 10mM 상당의 농도

2. 세포독성 시험물질의 최고농도는 용량설정시험 결과로부터 80%이상의 세포독성을 나타내는 농도

3. 난용성 시험물질은 시험 조건하에서 육안으로 시험물질 침전이 관찰되고 계수를 방해하지 않는 농도

[주40]

1. 더 높은 처리용량이 치사를 예상하게 하는 독성의 징후를 나타내는 용량

2. 골수 혹은 말초혈액에서 전체 적혈구 가운데 미성숙 적혈구의 비율 감소를 나타내는 용량

3. 호르몬과 유사분열인자 같이 낮은 비독성 용량에 특이적인 생물학적 활성을 지닌 물질은 처리용량 설정기준에서 제외하고, 사례별 근거로 평가

[주41]

경구투여는 보통 강제투여로 하고 다른 노출경로는 과학적으로 인정되는 경우 수용할 수 있다.

[주42]

대조군의 동물들은 처리군의 동물들과 동등한 방식으로 다루어져야 한다. 양성대조군은 노출량에서 기본값 이상으로 증가할 것으로 예상되는 생체내(in vivo) 소핵이 형성되어야 한다.

[주43]

표본은 시험물질 투여 후 특정의 시간(18-72시간)에 행하는 방법이 일반적이나 경시적으로 수회 행할 수 있다.

[주44]

해당 시험물질의 특성과 임상적용법 등에서 타당한 사유가 인정되면 본 시험의 생략이 가능하다. 고분자나 단백질이 결합한다고 생각되는 시험물질에 대하여는 시험물질의 중합성 및 단백결합 정도를 고려하여야 한다. 또한 유사시험물질에서 특별한 항원성 및 여기에 기인한다고 의심되는 부작용이 있는 경우 교차 항원성의 가능성을 고려하여야 한다.

[주45]

원칙적으로 본 시험 실시방법에 따라서 시험을 실시하여야 하나 세부사항에 있어서 시험의 본질에 영향을 주지 않는 한도 내에서 조정이 가능하며, 동일한 목적의 다른 시험법이 실시 가능한 경우에는 다른 시험법의 적용도 가능하다.

[주46]

감작하는 시험물질의 양은 원칙적으로 최대 임상용량 이상을 저용량으로 하고 고용량은 저용량의 수배 량을 투여하며, 필요시 적당한 다른 용량의 추가도 무방하다.

[주47]

가. 시험물질의 분자량에 따라 일반 의약품과 고분자 물질로 분류하여 시험을 실시한다. 일반 의약품의 경우 약물 단독 및 혈청알부민과 같은 거대분자와 결합된 형태로 시험을 실시하며, 고분자 물질은 그 자체로 시험을 실시한다.

나. 대조물질로는 원칙적으로 생리식염수를 사용하며, 양성대조물질은 시험물질이 일반 의약품인 경우 aminoantipyrine 혹은 penicillin 등과 같은 저분자 물질을 사용하거나 이종단백을 사용하고, 고분자 물질의 경우는 이종단백을 사용한다.

다. 면역보조제로는 주로 Freund's Complete Adjuvant(FCA)를 사용하나, 경우에 따라서 alum 등 다른 면역 보조제를 사용할 수도 있다.

[주48]

용매는 원칙적으로 생리식염수를 사용하며 시험물질이 비수용성인 경우 여러가지 용해보조제를 사용하여 가능한 한 고농도의 수용액의 형태로 투여한다.

[주49]

아나필락시스 쇼크 반응시험 판정기준

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1. 불안(Restlessness)

2. 기모(Piloerection)

3. 진전(Tremor)

4. 코를 문지르거나 핥음(Rubbing or licking nose)

5. 재채기(Sneezing)

6. 기침(Coughing)

7. 과호흡(Hyperpnea)

8. 배뇨(Urination)

9. 배변(Evacuation)

10. 유루(Lacrimation)

11. 호흡곤란(Dyspnea)

12. 찍찍거리는 소리(Rhonchus)

13. 청색증(Cyanosis)

14. 보행불안(Staggering gait)

15. 도약(Jumping)

16. 헐떡거리고 몸부림침(Gasping and writhing)

17. 경련(Convulsion)

18. 횡와(Side position)

19. Cheyne-Stokes 호흡(Cheyne-Stokes respiration)

20. 사망(Death)

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[-] Asymptomatic : 무증상

[±] Mild : 1-4의 증상

[+] Moderate : 1-10의 증상

[++] Severe : 1-19의 증상

[+++] Death : 사망

[주50]

본 시험법은 시험물질의 피부 감작성 여부를 시험하는 방법 중 가장 널리 사용되고 있는 maximization 시험법으로써 이 외에도 아래 열거된 시험법에 의한 실시가 가능하며 이 경우 각각의 판정기준에 따라 평가한다.

가. Adjuvant and Patch 시험법

나. Buehler 시험법

다. Draize 시험법

라. Freund's Complete Adjuvant 시험법

마. Open Epicutaneous 시험법

바. Optimization 시험법

사. Split Adjuvant 시험법

[주51]

시험물질이 수용성일 경우 수용액으로 만든 후 FCA와 유화시키며 시험물질이 불용성이거나 지용성일 경우 먼저 FCA에 현탁시킨 후 적정절한 용매와 유화시킨다.  양성대조군에는 기지의 감작성 물질을 투여한다. 1차 감작시 시험물질의 농도는 부분적 괴사나 전신독성을 나타내지 않는 농도이어야 한다. 일반적으로 피내주사에는 0.1ml의 용량이 사용된다.

[주52]

피부자극시험을 통해 2차 감작 및 야기시의 시험물질 농도를 결정하되 2차 감작시에는 가벼운 염증을 유발하는 농도, 야기시에는 무자극 최대농도를 사용한다. 시험물질이 무자극성일 경우, 시험물질의 침투를 용이하게 하기 위해 2차 감작 24시간 전 바세린을 이용하여 만든 10% 라우릴 황산나트륨을 도포한다.

일반적으로 2차 감작시 0.2ml 또는 0.2g의 용량이 사용되고 야기시 0.1ml 또는 0.1g의 용량이 사용된다.

[주53]

피부반응 평가기준

점 수	증 상
0 1 2 3	무반응 홍반이 적용부위에 흩어져 나타남 홍반이 적용부위 전체에 나타남 전체적으로 강한 홍반 및 부종이 나타남

[주54]

피부감작성 평가기준

감작율(%)	등 급	분 류
0-8 9-28 29-64 65-80 81-100	Ⅰ Ⅱ Ⅲ Ⅳ Ⅳ	매우약함 약 함 보 통 강 함 매우강함

[주55]

이 경우 일반 독성시험 자료에 원칙적으로 혈액검사자료 및 면역장기의 무게를 포함한 병리조직학적 자료가 포함되어야 한다.

[주56]

각 시험항목은 원칙적으로 생체내(in vivo)시험으로 수행하여야 하고, 동일한 목적의 다른 시험법이 실시 가능한 경우에는 다른 시험법의 적용도 가능하며, 해당 의약품의 특성과 임상적용법 등에서 타당한 사유가 인정되면 본 시험의 생략이 가능하다.

[주57]

발암성시험에서의 최고용량은 이 기준에서 사용하고 있는 최대내성용량 외에도 ICH 기준에서 제시하고 있는 다음과 같은 방법을 근거로 설정할 수 있다 ; 1) 약물동태학적 지표 : 설치류에서 시험물질 또는 대사체의 AUC가 사람혈장 중 AUC의 25배가 되는 용량, 2) 약동력학적 작용 : 선택한 용량 이상에서 나타날 수 있는 약동력학적 반응과 동일한 반응이 나타나고, 시험의 신뢰성을 방해하는 생리적 또는 항상성의 장애를 일으키지 않는 용량, 3) 흡수가 포화되는 양 : 전신이용률시험에서 측정된 흡수의 포화량, 4) 투여가능 최대량, 5) 기타 지표 : ICH 기준에서 특별히 정의하지 않은 기타 지표.

[주58]

1종의 중단기 생체내 설치류 시험, 장기 발암성 시험 혹은 유전독성시험의 소견이나 그 밖의 시험 성적을 통해 그 의약품이 명확히 사람에게 발암성을 갖는 것이 나타났을 경우에는 제2의 발암성 시험은 반드시 요구되지는 않는다.

[주59]

1. 일반적으로 이 시험은 사람에게 외삽되고 사람에 대한 위해도 평가에 응용할 수 있다고 생각되는 발암기전을 근거로 해야 한다. 이것은 장기발암성시험을 보완하면서 발암성시험에서 얻을 수 없는 새로운 정보를 가져오는 것이어야 한다.

또 동물 수, 동물 애호나 발암성시험에서의 전체적인 경제성에 대해서도 고려되어야 한다. 이 기준을 만족하는 대표적인 시험방법은 다음과 같다.

가. 설치류를 사용한 개시-촉진 모델 : 간 발암성 물질을 검색하기 위한 랫드의 개시-촉진 모델은 initiator를 투여 후 시험물질을 수 주간 투여한다. 또한 다장기 발암모델은 최대 5종류의 initiator를 투여하고 다음으로 시험물질을 수 개월간 투여한다.

나. p53+/- 결손 모델, Tg․AC 모델, TgHras2 모델,  XPA결손 모델 등 형질전환 마우스 시험

다. 신생아 설치류 발암 모델

2. 중간기 생체내 설치류 시험계의 선택 상 고려해야 할 점

시험계는 발암성에 관한 종합평가에 유용한 정보를 얻을 수 있도록 그 시험에서 이용되는 시험물질에 대한 약력학이나 사람과의 노출 차이 등의 정보 혹은 그 밖의 관련 정보 등 과학적 근거의 중요성을 고려하여 선택하여야 한다. 시험법의 선택 이유는 기록으로 남겨야 하며, 선택된 시험법의 장단점에 대한 과학적인 고찰도 포함해야 한다.

[주60]

(국소내성시험 예시)

1. 시험동물 : 토끼

2. 대조군 : 양성대조군, 음성대조군

3. 투여방법

가. 우측 귀정맥 : 시험물질 또는 양성대조군

나. 좌측 귀정맥 : 음성대조군

4. 투여기간 : 8일간 1일 2회

5. 측정항목

가. 육안소견

나. 조직병리소견