(별표 2) 잉어허피스바이러스병 (Koi herpesvirus disease, KHVD) 정밀검사법

가) 병원체 : Koi herpesvirus (KHV)

나) 임상증상

(1) 외부증상

- 평형상실, 피부퇴색, 발적, 피부지느러미 기저부 출혈, 지느러미 부식

(2) 해부학적 증상

- 아가미 1차 새변의 부식, 2차 새변의 융합, 1/2차 새변의 곤봉화

- 신장 또는 간 비대 및 점상 또는 국소출혈

(3) 병리조직학적 증상

- 아가미 조직의 염증 및 괴사, 아가미 상피세포 및 백혈구의 현저한 핵 비대화, 반지모양의 크로마틴, 옅은 호산성의 핵 내 봉입체

- 신장․비장․췌장․간․뇌․장․구강 상피의 염증 및 괴사, 핵내 봉입체

다) 정밀검사

(1) 시료 : 감염 조직 (아가미, 신장, 비장)

(2) PCR primer sets : protocol 1 & 2 모두 실시

- Protocol 1 : Bercovier TK primers 사용

- Protocol 2 : Gray Sph primers (Yuasa modification) 사용

		PCR primers	Product size
Protocol 1	TK Forward	5'-GGGTTACCTGTACGAG-3'	409bp
	TK Reverse	5'-CACCCAGTAGATTATGC-3'
Protocol 2	Forward	5'-GACACCACATCTGCAAGGAG-3'	292bp
	Reverse	5'-GACACATGTTACAATGGTCGC-3'

(3) PCR conditions

	PCR condition	Cycles
Protocol 1	94°C for 5min 94°C for 1min, 55°C for 1min, 72°C for 1min 72°C for 10min	1 40 1
Protocol 2	94°C for 30s 94°C for 30s, 63°C for 30s, 72°C for 30s 72°C for 10min	1 40 1

라) 확정진단

(1) 염기서열분석 : PCR 산물의 염기서열 분석을 통해 KHV 임을 확인

(2) 결과판정 : KHV 염기서열과 일치하면 양성으로 판정