[별표4] 유전독성시험

① 시험종류

1. 원칙적으로 모든 시험물질에 대하여 최소한 아래 각호의 유전독성시험을   실시하여야 한다. 상기 규정에도 불구하고 시험물질의 특성 및 시험의 실시목적 등을 고려하여 필요하다고 인정되는 경우에는 OECD 유전독성시험기준에서 정한 그 밖의 유전독성시험으로 대체하거나 추가적으로 실시할 수 있다. 이 경우 본 기준에 언급되지 아니한 시험에 대하여는 OECD 유전독성시험 기준에 준한다[주32].

가. 박테리아를 이용한 복귀돌연변이 시험

나. 포유류 배양세포를 이용한 체외 염색체이상 시험 또는 마우스 림포마 tk 시험

다. 설치류 조혈세포를 이용한 체내 소핵시험

② 복귀돌연변이시험

1. 박테리아를 이용한 복귀돌연변이 시험은 다음과 같이 한다.

가. 최소한 아래 5개의 균주

(1) Salmonella typhimurium TA98

(2) Salmonella typhimurium TA100

(3) Salmonella typhimurium TA1535

(4) Salmonella typhimurium TA1537 또는 TA97 또는 TA97a

(5) Salmonella typhimurium TA102 또는 E. Coli WP2 uvrA 또는 E. Coli WP2 uvrA(pKM101)를 사용한다

나. 시험방법

(1) 용량단계는 5단계 이상을 설정하며 최고용량은 시험물질의 특성에 따라  선정한다[주33].

매 용량마다 3매 이상의 플레이트를 사용한다.

(2) S9 mix를 첨가한 대사활성화법을 병행하여 수행한다[주34].

(3) 대조군은 대사활성계의 유, 무에 관계없이 동시에 실시한 균주-특이적 양성 및 음성 (용매 또는 담체) 대조물질을 포함한다[주35].

다. 결과의 판정

대사활성계 존재 유, 무에 관계없이 최소 1개 균주에서 평판 당 복귀된 집  락수에 있어서 1개 이상의 농도에서 재현성 있는 증가를 나타낼 때 양성으  로 판정한다. 또한, 음성 결과에 대해서는 필요에 따라 재현성을 확인한다.

③ 체외염색체이상시험

1. 포유류 배양세포를 이용한 체외 염색체이상 시험은 다음과 같이 한다.

가. 세포주

사람 또는 포유동물의 초대 또는 계대배양세포를 사용한다.

나. 시험방법

(1) 시험물질의 최고용량은 시험물질의 특성에 따라 선정한다[주36]. 용량     단계는 3단계 이상을 설정한다.

(2) S9mix등 적절한 대사활성화법을 병행한다.

(3) 염색체 표본은 시험물질 처리 후 적절한 시기에 제작한다[주37].

(4) 염색체이상의 검색은 농도당 200개의 분열중기상에 대하여 염색체의 구조이상 및 숫적이상을 가진 세포의 출현빈도를 구한다[주38].

(5) 대조군은 대사활성계의 유, 무에 관계없이 적합한 양성과 음성 (용매 또  는 담체) 대조군들을 포함한다. 양성대조군은 알려진 염색체이상 유발   물질을 사용해야 한다.

다. 결과의 판정

염색체이상을 가진 분열중기상의 수가 통계학적으로 유의성있게 용량의존   적으로 증가하거나, 하나 이상의 용량단계에서 재현성있게 양성반응을 나   타낼 경우를 양성으로 한다.

④ 체외 마우스 림포마 TK 시험

1. 포유류의 배양세포를 이용한 체외 마우스 림포마 TK 시험은 다음과 같이 한다.

가. 세포주

마우스 림포마 L5178Y 세포를 이용한다.

나. 시험방법

(1) 적절한 대사활성화법을 병행하여 행한다.

(2) 4단계 이상의 용량단계를 설정하며 시험물질의 최고용량은 시험물질의  특성에 따라 선정한다[주39].

(3) 대조군은 대사활성계의 유, 무에 관계없이 적합한 양성과 음성(용매 또  는 담체) 대조군들을 포함한다. 양성대조군은 알려진 염색체 및 유전자  손상 유발 물질을 사용한다.

(4) 시험물질의 처리는 3～4시간으로 하며 24시간까지 연장할 수 있다.

(5) 유발변이의 표현형발현을 위하여 최적에 가까운 발현기간을 부여한다.

다. 결과의 판정

돌연변이 발생빈도가 통계학적으로 유의성 있게 용량의존적으로 증가하거나, 적어도 하나 이상의 용량단계에서 재현성 있게 양성반응을 나타내는 경우를 양성으로 한다.

⑤ 체내 소핵시험

1. 설치류 조혈세포를 이용한 체내 소핵 시험은 다음과 같이 한다.

가. 시험동물

(1) 마우스나 그 밖의 설치류를 사용한다.

(2) 수컷과 암컷 사이에 독성 및 대사에 차이가 없다면 1군당 성숙한 수컷  5마리를 사용한다. 성 특이 시험물질의 경우는 그에 적합한 성의 동   물을 이용한다.

나. 시험방법

(1) 용량단계는 3단계 이상으로 하며 시험물질의 최고용량은 시험물질의 특  성에 따라 선정한다[주40].

(2) 투여경로는 원칙적으로 복강투여 또는 임상적용경로로 한다[주41].

투여회수는 1회 투여를 원칙으로 하며 필요에 따라 24시간 간격으로 2          회 이상 연속 투여한다.

(3) 대조군은 병행실시한 양성과 음성(용매/담체) 대조군을 포함한다[주42].

(4) 시험물질 투여 후 적절한 시기에 도살하여 골수도말표본을 만든다[주43]. 원칙적으로 개체 당 2,000개의 다염성적혈구에 대해서 소핵의 유무를 검색한다. 동시에 전적혈구에 대한 다염성적혈구의 출현빈도를 구한다.

다. 결과의 판정

소핵을 가진 다염성적혈구의 수가 통계학적으로 유의성있게 용량의존적으로 증가하거나, 하나 이상의 용량단계에서 재현성있게 양성반응을 나타낼 경우를 양성으로 한다.

⑥ 독성동태시험

유전독성시험 중 독성동태시험은 다음과 같이 적용할 수 있다.

생체내(in vivo) 유전독성시험에서 음성의 결과가 나온 경우, 사용된 시험종에서의 전신적 노출을 증명하거나 지표 조직에서의 노출의 특성을 확인하는 것이 바람직하다.