(별표 5) 바이러스성출혈성패혈증 (Viral haemorrhagic septicaemia, VHS) 정밀검사법

가) 병원체 : Viral haemorrhagic septicaemia virus (VHSV)

나) 임상증상

(1) 외부증상

- 체색흑화, 안구돌출, 빈혈, 지느러미 기저부․아가미․눈․피부 및 복부 출혈

(2) 해부학적 증상

- 신장 변색, 간 빈혈, 체표․근육조직․내부장기의 점상출혈

(3) 병리조직학적 증상

- 세포질 내에 공포형성, 핵농축, 핵융해, 임파구 침윤

다) 정밀검사

(1) 시료 : 세포배양 상층액 또는 감염조직 (비장, 두신, 심장, 뇌)

(2) PCR primer sets

	PCR primers	Product size
VN Forward※	5'-ATGGAAGGAGGAATTCGTGAAGCG-3'	505bp
VN Reverse	5'-GCGGTGAAGTGCTGCAGTTCCC-3'

※ Reverse transcription : VN Forward primer 사용

(3) PCR conditions

- Two step RT-PCR (reverse transcription → PCR amplication) 실시

	PCR condition	Cycles
Two-step RT-PCR	42°C for 30min, 94°C for 5min, 4°C for 3min (RT)	1
	94°C for 2min 94°C for 30s, 55°C for 30s, 68°C for 60s 68°C for 7min	1 35 1

라) 확정진단

(1) 염기서열분석 : PCR 산물의 염기서열분석을 통해 VHSV 임을 확인

(2) 결과판정 : VHSV 염기서열과 일치하면 양성으로 판정