[별표 5]

제조방법 작성요령(제14조 관련)

1. 작성서식 및 항목별 기재요령

아래의 서식을 참고하여 작성한다.

공정 번호	공정 명칭1)	원료(시약․용매 등)2)	공정과정3)	비고4)
1	균주의 배양	a. 균주: 명칭 b. 배지: 명칭(양) c. 첨가제: 명칭(양)	a를 b에 접종하고 c를 첨가하여 ○주간 ○℃에서 배양한다. (배양size, 회수량 등)	원료의 기원5) 공정검사 제조자명칭, 소재지
2	원액 제조	d. 공정1의 균주 e. 첨가제 명칭(양) f. 용매 명칭(양)		원료의 기원 공정검사 보관조건6)
	최종원액 제조			공정검사 보관조건
	충전			직접 용기․포장 재질
	포장			직접포장용기 및 마개 갈색유리바이알(대한민국약전) 고무마개(대한민국약전) PE(대한민국약전)

1) 공정명칭은 종균주 배양, 원료수집, 세포채취 또는 유전자조작 등으로부터 시작하여 단위공정이 누락되지 않도록 구체적으로 기재한다.

2) 각 공정별로 투입․사용되는 모든 원료(시약, 용매 등)의 목적, 명칭, 사용량 등을 기재한다.

3) 공정과정은 공정 주요내용, 주요조건, 생산규모 등을 구체적으로 기재한다.

4) 비고에는 1), 2), 3)이외에 이 규정에 따라 기재하도록 정한 내용을 기재한다.

5) 원료는 해당 공정에 사용되는 주요 원료(시약, 용매 등)를 의미하며 이러한 원료의 기원으로 세포 또는 균주의 유래, 사용 숙주 및 벡터계의 종류, 구조유전자 획득방법, 배지의 명칭 등을 구체적으로 기재한다. 아울러 효능․효과를 직․간접적으로 발현한다고 기대되는 원료(예: 인터페론 감마 등)의 경우에는 제조원(소재지 포함)을 표기한다.  필요한 경우 별첨으로 구분하여 작성한다.

6) 제조단위가 구분되는 경우와 공정 중 생산된 반제품을 보관하는 경우 반드시 보관용기, 보관조건, 저장기간을 기재한다.

7) 직접 용기에 충전하는 공정의「비고」란에는 직접 용기․포장의 재질을 기재하여야 하며 마지막 공정의「공정명칭」은 “포장”으로 기재한다.

2. 작성 예시(참고자료)

<백신제제류>

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
1	종균주 배양	a.균주: ☆☆ b.세포: △△ c.세포배양배지: ○○ d.바이러스배양배지: ◎◎ e.용제: □□□( mL)	b를 c에 접종하여 37℃ & 5% CO2 배양기에서 ○일간 배양하고 a를 배양한 세포에 접종, 배양하고 세포를 수확한다. 수확된 세포를 원심분리하고 저장배지로 재부유시킨 후 Freeze-thaw을 통해 바이러스를 유리시키고, 원심분리 또는 멤브레인필러를 통해 ○mL 씩을 분주하여 종균주를 만든다(배양크기, 회수량)	a균주, b세포의 기원 c, d 배지의 조성 종균주 보관조건 제조자 명칭(소재지)
2	상용균주 배양	f.균주: 공정1의 종균 b.세포: △△ c.세포배양배지: ○○ d.바이러스배양배지: ◎◎ e.용제: □□□( mL)	○mL의 f를 이용하여 공정 1의 과정과 동일하게 제조하여 상용균주를 만든다(배양크기, 회수량)	상용균주 보관조건 제조자 명칭(소재지)
3	종세포주 배양	g.세포: ☆☆ h.배지: ○○ i.세포분리용매: △△ j.용제: □□( mL)	g를 h에 접종하여 37℃, 5% CO2배양기에서 ○일간 배양하고 i용액으로 세포를 분리, 원심분리 후 침전된 세포만을 세포저장배지로 재현탁 시키고 세포농도를 ○%로 맞추어 ○mL씩을 cryogenic vial에 넣어 보관한다.(배양크기, 회수량)	a 세포주의 기원 h 배지의 조성 종세포주 보관조건 제조자명칭(소재지)
4	상용세포주 배양	k.세포: 공정3의 종세포 h.배지: ○○ i.세포분리용매: △△ j.용제: □□( mL)	k를 공정 3의 과정과 동일하게 처리하여 상용세포주를 ○mL씩을 cryogenic vial에 넣어 보관한다.(배양크기, 회수량)	상용세포주 보관조건 제조자명칭(소재지)
5	원액 제조	l.균주: 공정2의 상용균주 m.세포: 공정4의 상용세포 c.세포배양배지: ○○ d.바이러스배양배지: ◎◎ e.용제: □□□( mL)	l과 m을 이용하여 공정1과 동일한 공정을 거쳐 원액을 얻는다(배양크기, 회수량)	원액 보관조건 제조자 명칭(소재지)

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
6	정제	n.주성분: 공정5의 원액	n을 초원심분리, ○○칼럼을 통해 정제한다.
7	바이러스 불활화	o.주성분: 공정6의 원액 p.불활화제: □□□	p를 최종농도 □%가 되도록 o를 교반하면서 첨가한 다음 ○℃, ○시간동안 교반한다.
8	정제2	q.주성분: 공정7의 원액	n을 초원심분리, ○○칼럼을 통해 정제한다.
9	흡착	r.주성분: 공정8의 원액 s.흡착제: ○○	r을 s와 혼합하여 교반하면서 흡착시킨다.
10	최종원액 제조	t.주성분: 공정9의 원액 u.희석액: ○○ v.보존제: △△ w.안정제: □□	t를 u와 혼합하여 최종함량이 ○㎍/㎖가 되도록 희석하고 v, w를 첨가하여 ○℃, ○시간 교반하여 최종원액을 얻는다.(제조크기, 제조량)	최종원액 보관조건
11	충진	x.주성분: 공정10의 최종원액	x를 바이알에 분병하여 고무전으로 타전한다.	용기:보로실리케이트 마개: 클로로 부칠 rubber
12	동결건조	y.주성분: 공정11의 바이알	y를 동결건조시킨 후 완전 타전하고 캡핑한다.
13	포장	z.공정12의 바이알 a.첨부물: 주사용수 mL	z ○개와 a ○개를 함께 포장한다.	직접포장용기 및 마개 갈색유리바이알(대한민국약전) 고무마개(대한민국약전) PE(대한민국약전)

※ 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.

<혈장분획제제>

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
1	원료수집	a.주성분: 신선동결혈장 b.용제: ○○( mL)	a를 ○분을 모아 혈장백을 개봉하여 수집 탱크에 pooling한다.(pooling크기)	원료(혈장) 기원 제조소 명칭(소재지)
2	에탄올분획○	c.주성분: 공정1의 혈장 d.용매: 에탄올 e.완충제: ○○○	c에 ○% d와 e를 첨가하여 pH, ○시간동안 냉에탄올 분획법으로 분획하고 여과하여 침전물을 분리한다.	제조소 명칭(소재지)
3	에탄올분획○	f.주성분: 공정2의 여액 d.용매: 에탄올 e.완충제: ○○○	f에 ○% d와 e를 첨가하여 pH, ○시간동안 냉에탄올 분획법으로 분획하고 여과하여 침전물을 분리한다.	분획침전물 보관조건 제조소 명칭(소재지)
4	용해	g.주성분: 공정3의 침전물 h.등장화제: ○○○ i.용제: ○○○	g를 ○%의 h가 함유된 i를 첨가하여 ○시간동안 교반한다.	원료의 기원
5	여과	j.성분: 공정4의 원액	j를 칼럼을 통해 여과시킨다.
6	농축	k.주성분: 공정5의 원액 h.등장화제: ○○○ i.용제: ○○○	k를 ○○기준으로 농축시킨다.
7	정제	l.주성분: 공정6의 원액 m.정제 농축제: ○○○ n.pH조정제: ○○	l에 m, n을 첨가하여 정제하고 원획분을 회수한다.	원획분 보관조건
8	최종원액 제조	o.주성분: 공정7의 원획분 p.등장화제: ○○○ q.부형제: ○○○ r.안정제: ○○○ s.용제: ○○○	o에 p～s를 첨가하여 ○% 농도의 최종원액을 제조한다.	최종원액 보관조건
9	여과	t.주성분: 공정8의 최종원액	t를 제균여과한다.	공정검사 항목(방법)
10	충전	u.주성분: 공정9의 최종원액	u를 정해진 양만큼 바이알에 충전한다.	용기: 보로실리케이트 마개: 클로로 부칠 rubber
11	바이러스 불활화	v.주성분: 공정10의 바이알	v를 ○℃에서 ○시간 저온 열처리한다.
12	포장	w.공정11의 바이알	w를 ○개 단위로 박스포장한다.	직접포장용기 및 마개 갈색유리바이알(대한민국약전) 고무마개(대한민국약전) PE(대한민국약전)

※ 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.

<유전자재조합의약품ㆍ세포배양의약품>

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
1	마스터 세포은행의 제조	a.숙주: □□□세포 b.벡터: ××× c.사용배지: ○○○	b를 이용하여 a를 형질전환시켜 생산세포를 만들어 c에 접종한 다음 37±1℃, ○시간동안 배양하여 마스터 생산세포주를 얻는다(배양크기).	원료의 기원 제조자 명칭(소재지)
2	제조용 세포은행의 제조	d.주성분: 공정2의 생산세포 c.사용배지: ○○○	1바이알의 생산세포 d를 c에 접종하여 37±1℃, ○시간동안 배양하여 제조용 생산세포주를 얻는다(배양크기).	제조자 명칭(소재지)
3	종배양	e.주성분: 공정3의 생산세포 c.사용배지: ○○○	1바이알의 생산세포 e를 c에 접종하여 37±1℃, ○시간동안 배양한다(배양크기).
4	본배양	f.주성분: 공정4의 세포 g.사용배지: ○○○	f를 g에 접종하여 37±1℃, ○시간동안 배양한다(배양크기).
5	회수	h.주성분: 공정5의 배양액 i.안정제: ○○○ j.등장화제: ○○○	h를 연속 원심분리하여 세포배양액과 세포를 분리한다. 이 세포배양액에 i, j를 가한다.
6	정제 1 (정제 공정명)	k.주성분: 공정6 세포배양액 l.고정상: ○○○ m.완충액: m.1. 평형완충액: ○○○ m.2. 용리완충액: ○○○	l(소수성 수지)을 충전한 칼럼을 m.1로 평형시키고, k를 흡착시킨 뒤 m.2를 이용하여 ○○를 분리한다.
7	정제 2 (정제 공정명)	n.주성분: 공정7의 ○○○ o.고정상: ○○○ p.완충액: p.1. 평형완충액: ○○○ p.2. 용리완충액: ○○○	o(음이온 교환수지)를 충전한 칼럼을 p.1로 평형시키고, n을 흡착시킨뒤 p.2를 이용하여 ○○를 분리한다.
8	정제 3 (정제 공정명)	q.주성분: 공정8의 ○○○ r.고정상: ○○○ s.완충액: ○○○	q를 농축하고 s로 교환한 후 r(크기배제 수지)에 통과시켜 ○○를 분리한다.
9	원액의 제조	t.주성분: 공정9의 ○○○	t를 0.22㎛ 무균필터로 여과하여 원액을 제조한다. 이 원액은 2~8℃에서 ○일간 보관 가능하다.	제조자 명칭(소재지)
10	최종원액의 제조	u.주성분: 공정10의 원액 v.pH 조정제: ○○○ w.부형제: ○○○	u에 v, w를 가하여 pH를 ○.○로 조정하고 0.22㎛ 무균필터로 여과한다.	최종원액 보관조건 제조자 명칭(소재지)
11	충전 및 동결건조	x.주성분: 공정11의 최종원액	x를 정해진 양만큼 바이알에 충전한 후 동결 건조한다.	용기: 유리바이알, 보로실리케이트 (대한민국약전) 마개: 클로로부칠 rubber 제조자 명칭(소재지)
12	라벨 및 포장	y.주성분: 공정12의 바이알 z.첨부물: 주사용수 a'.첨부물: 주사침	y를 z, a'와 함께 10개 단위로 종이박스 포장한다.	제조자 명칭(소재지)

※ 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.

공정 번호	공정 명칭	원료․시약 등	공정과정	비고
1	세포채취	a.주성분: ○○조직 b.용매: ○○완충용액	a를 ○○○로부터 채취하여 b에 담아 제조실로 운반한다.	제조자 명칭(소재지) 원료의 기원 공정 검사 항목(방법) (공여자 스크리닝, 조직타이핑 검사 등)
2	세포의 수집 및 동결	c.주성분: 공정1의 조직 d.세척액: ○○ e.분리효소: ○○ 또는 ○○ 기기 f.동결보존액: ○○	c를 제조실내에서 d를 이용하여 ○차례 세척한 뒤, e를 ○%로 처리하고 원심분리하여 ○○세포를 수집한다. 수집된 세포는 f에 현탁하여 동결보관한다.	제조자 명칭(소재지) 동결세포 보관조건 및 보관기간
3	해동 및 일차배양	g.주성분: 공정2의 세포 h.세척액: ○○ i.사용배지: ○○ j.성장인자: ○○ k.싸이토카인: ○○ l.혈장: ○○ m.항생제: ○○ n.배양용기: ○○플라스크 o.분리효소: ○○	g를 ○℃에서 해동한 뒤, h를 첨가하여 ○차례 세척 및 원심분리한다. i와 j～m(최종처리농도)이 들어있는 ○개의 n에 ○개의 세포로 접종하여 37℃, 5%CO2배양기에서 ○주간 배양한다. ○～○일에 한번 씩 배지를 교환하면서 n의 배양면을 ○% 채울 때까지 배양한다.(증식세포수) 배양후 o를 ○%로 처리하여 n에서 분리한 뒤 원심분리하여 세포를 수집한다.	원료의 기원 (반추동물 유래 원료명 ; 원산국, 사용부위)
4	이차배양	p.주성분: 공정3 세포 i.사용배지: ○○ j.성장인자: ○○ k.싸이토카인: ○○ l.혈장: ○○ m.항생제: ○○ q.배양용기: ○○ 플라스크 o.분리효소: ○○	p를 i와 j～m(최종처리농도)이 들어있는 ○개의 q에 ○:○의 비율로 계대하여 배양면을 ○% 채울 때까지 배양한다. ○～○일에 한번 씩 배지를 교환하면서 q의 배양면을 ○% 채울 때까지 배양한다.(계대수, 최종증식세포수)
5	세포의 수집	r.주성분: 공정4 세포 h.세척액: ○○ o.분리효소: ○○	r을 h로 ○회 세척한 후 o를 ○%로 처리하여 q에서 분리한 뒤 원심분리하여 세포를 수집한다.
6	충전	s.주성분: 공정5의 세포 t.등장화제: ○○○ u.보존제: ○○○	s에 t와 u를 첨가하여 ○ml로 충진한다.(생산수량)	직접포장용기 및 마개 갈색유리바이알(대한민국약전) 고무마개(대한민국약전) PE(대한민국약전)
7	라벨 및 포장	v.주성분: 공정6의 바이알 w.첨부물: 주사침	v를 w와 같이 ○개 단위로 포장한다.	제조자 명칭(소재지)

<세포치료제>

※ 원료․시약란에 사용하는 시약의 조성(시약원액의 농도를 포함)을 함께 기재하여야 하며, 소요시간을 포함하여 최종 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.

<유전자치료제류 - 벡터 이용 제제>

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
1	종세포주 제조	a. 균주(세포)주 : □□□세포 b. 벡터 : ×××벡터 c. 사용배지 : ○○○배지	b △ng을 사용하여 a △㎕에 형질전환한 후, c에서 37℃, △시간 배양한 다음 세포를 수확하여 종세포주를 얻는다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 원료의 기원 - 종세포주 특성분석자료
2	생산세포주 은행제조 (MCB, WCB)	d. 세포주 : 공정1의 종세포 e. 사용배지 : ○○○배지	d △바이알을 e에 접종하여 37℃, △시간 배양한 다음 세포를 배양하여 생산세포주 은행을 얻는다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 세포은행 특성분석자료
3	종배양	f. 주성분 : 생산세포주의 제조용세포은행 g. 사용배지 : ○○○배지	f △바이알을 g에 접종하여 37℃, △시간 동안 배양한다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 배양 크기
4	본배양	h. 주성분 : 공정3의 세포 i. 사용배지 : ○○○배지	h를 i에 접종하여 37℃, △시간 동안 배양한다(배양크기).	- 배양 크기
5	균체분리	j. 주성분 : 공정4의 세포	j가 포함된 배양액을 원심분리하여 생세포를 회수한다.
6	세포용해	k. 주성분 : 공정5의 세포 l.용해제 : ○○○ m. 중화용액 : □□□	l을 처리하여 k를 용해하고 m을 첨가하여 용해반응을 중화시킨다.
7	정화/농축	n. 주성분 : 공정6의 현탁액 o. 사용필터 : ××	n을 원심분리한 후 o에 통과시켜 세포 파편을 제거한다.
8	침전	p. 주성분 : 공정7의 여과액 q. 침전제 : ○○○	p로부터 ○○제거(단백질, 숙주 DNA)를 위하여 q를 처리하여 △분간 침전시킨 후 원심분리하여 상등액을 제거한다.
9	정제1	r. 주성분 : 공정8의 침전물 s. 등장화제 : △△△ t. 완충액 : ○○○	r을 ××레진을 사용한 음이온크로마토그래피를 사용하여 s를 흘려주어 ○○제거하고 t로 교환한다.
10	정제2	u. 주성분 : 공정9의 ○○○ v. 등장화제 : △△△ w. 완충액 : ○○○	u를 ××레진을 사용한 흡착크로마토그래피를 사용하여v를 흘려주어 ○○을 제거하고 w로 교환한다.
11	정제3	x. 주성분 : 공정10의 ○○○ y. 등장화제 : △△△	x를 ××레진을 사용한 이온교환막 크로마토그래피를 사용하여 y를 흘려주어 ○○를 제거하고 용리한다.
12	원액제조	z. 주성분 : 공정11의 ○○○ aa. 완충액 : ○○○	z를 농축시키기 위해 에탄올을 첨가하여 원심분리한 후 aa로 용해한다.	- 원액 보관조건
13	최종원액제조	ab. 주성분 : 공정12의 원액 ac. pH 조정제 : △△△ ad. 부형제 : ×××	ab를 ac, ad에 가하여 pH를 조정하고 △㎛ 필터로 여과하여 제균 한다.	- 최종원액 보관조건
14	충전	ae. 주성분 : 공정13의 최종원액	ae를 바이알에 △씩 분주하여 마개를 씌운다.	- 용기 및 마개
15	포장	af. 주성분 : 공정14의 바이알	af에 label을 부착한 후 △개 단위로 종이박스에 포장한다.	- 포장 후 보관조건

※ 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.

<유전자치료제류 - 세포이용 제제>

공정 번호	공정 명칭	원료ㆍ시약ㆍ용매 등	공정과정	비고
1	세포채취 및 수집	a. 주성분 : ○○조직 또는 말초혈액 등 b. 세척액 : ××× c. 분리효소 또는 □□기기	a를 ☆☆으로부터 수집하여 b를 이용하여 세척한 후 c를 이용하여 세포를 분리한다.	- 제조자 명칭 및 소재지 - 원료의 기원 - 공정 검사 항목(방법) (공여자 스크리닝, 조직타이핑 검사 등)
2	종세포주 제조 (바이러스 감염등)	d. 세포주 : 공정1의 세포 e. 사용배지 : ○○○배지 f. 벡터 : ×××벡터	d를 e에 접종하여 37℃, △일간 배양한 다음 세포에 f를 감염시켜 △일간 배양 후 수확하여 종세포주를 얻는다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 원료의 기원 - 종세포주 특성분석자료
3	생산세포주 은행제조 (MCB, WCB)	g. 세포주 : 공정2의 종세포 h. 사용배지 : ○○○배지	g △바이알을 h에 접종하여 37℃, △시간 배양한 다음 세포를 배양하여 세포주은행을 얻는다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 세포은행 특성분석자료
4	배양	i. 주성분 : 공정3의 제조용세포은행 j. 사용배지 : ○○○배지	i △바이알을 j에 접종하여 37℃, △시간 동안 배양한다(배양크기).	- 제조자 명칭 및 소재지 - 배양 크기
5	계대배양	k. 주성분 : 공정4의 세포 l. 사용배지 : ○○○배지	k를 l에 접종하여 37℃, △시간 동안 배양한다(배양크기).	- 배양 크기
6	세포수집	m. 주성분 : 공정5의 세포 n. 세척액 : ☆☆☆ o. 효소 : ×××	n을 사용하여 m를 세척한 후 o을 처리하여 세포를 떼어내어 원심분리 한다.
7	원액제조	p. 주성분 : 공정6의 세포 q. 현탁용액 : ☆☆☆	q △㎖을 p에 처리하여 세포를 현탁한다.	- 원액 보관조건
8	최종원액제조	r. 주성분 : 공정8의 원액 s. 등장화제 : ××× t. 보존제 : ○○○	세포수가 △/㎖이 되도록 r에 s, t를 처리한다.	- 최종원액 보관조건
9	충전	u. 주성분 : 공정9의 최종원액	u를 바이알에 △씩 분주하여 마개를 씌운다.	- 용기 및 마개
10	포장	v.주성분 : 공정10의 바이알	v에 label을 부착한 후 △개 단위로 종이박스에 포장한다.	- 포장 후 보관조건

※ 단위공정별로 수행되는 공정검사에 대한 주요검사항목 및 검사방법은 비고란에 기재한다.