(별표 6) 유행성궤양증후군 (Epizootic ulcerative syndrome, EUS)

정밀검사법

가) 병원체 :  Aphanomyces invadans, Aphanomyces piscicida

나) 임상증상

(1) 외부증상

- 식욕저하, 체색 흑화, 체표에 붉은 반점이나 큰 궤양성 병변 발생

(2) 해부학적 증상

- 체표, 두부, 아가미 덮개, 미부에 붉은 점이 관찰되며 발병 후기에는   크고 붉거나 회색, 갈색의 궤양이 관찰

다) 정밀검사

(1) 시료 : 궤양병소 또는 붉은 반점 증상의 체표 근육

(2) GP Agar 배양 : 무증상 또는 붉은 반점 증상의 체표 근육 절취 및 접종

(3) PCR법 : 궤양병소의 균사 채취

a) PCR primer sets

		PCR primers	Product size
Protocol 1	Ainvad-2F	5'-TCATTGTGAGTGAAACGGTG-3'	234 bp
	Ainvad-ITSR1	5'-GGCTAAGGTTTCAGTATGTAG-3'
Protocol 2	ITS11	5'-GCCGAAGTTTCGCAAGAAAC-3'	550 bp
	ITS23	5'-CGTATAGACACAAGCACACCA-3'

b) PCR conditions

	PCR condition	Cycles
Protocol 1	95°C for 2 min 95°C for 30 s, 56°C for 45 s, 72°C for 2.5 min 72°C for 5 min	1 35 1
Protocol 2	94°C for 5 min 94°C for 30 s, 65°C for 30 s, 72°C for 1 min 72°C for 5 min	1 35 1

라) 확정진단

(1) 균사 형성 : GP Agar에 균사 형성시 PCR법으로 2차 확인

(1) 염기서열분석 : 염기서열분석을 통해 A.invadans 또는 A.piscicida임을 확인

(2) 결과판정 :  A.invadans 또는 A.piscicida 염기서열과 일치하면 양성으로 판정