[별표8]

훈증 소독 시험의 방법

1. 해충 감수성 시험

1.1. 공시충 선정

1.1.1. 식물의 공시충은 자주 발견이 되는 해충을 대상으로 선정하되, 검역병해충 등과 같이 사육 또는 확보가 어려운 경우는 유사한 해충을 대상으로 공시충을 선정할 수 있다.

1.1.2. 해충의 감수성 시험은 모든 태에 대한 시험을 원칙으로 하되, 기주식물에 감염 가능성이 없는 태인 경우에는 제외할 수 있다.

1.1.3. 소독처리 대상 해충이 여러 종인 경우에는 내성이 큰 순으로 2～3종을 선정하여 시험할 수 있다.

1.1.4. 국내 분포하지 않은 외국종일 경우에는 그 종과 유사한 국내 종으로 대체하여 시험할 수 있다.

1.1.5. 시험에 사용하는 공시충은 사육한 것을 원칙으로 한다. 다만, 사육이 어려운 경우에는 채집하여 사용할 수 있으나 각각의 공시충은 균일해야 한다.

1.2. 소독처리

1.2.1. 감수성시험은 살충율이 20～100%가 나타나도록 아래 예시와 같이 다양한  처리(5처리구 이상)를 하여야 한다.

1.2.2. 처리구별로 2반복이상 실시하고, 반복구당 공시충수는 50마리 정도로 하되 반복구당 해충수가 적은 경우에는 반복수를 늘린다. 공시충이 투입 시는 쉽게 탈수될 수 있으므로 적은 양의 먹이를 같이 넣어줄 수 있다.

1.2.3. 처리구별 수착 및 침투 등을 고려, 용적율을 같게 하여야 하며, 공시약제가 공시충에 직접 닿지 않도록 투약하여야 한다.

1.2.4. 소독처리시험 온도와 공시충 사육온도의 차이가 많은 경우, 공시충의 잘 적응할 수 있도록 소독시험 24시간 전부터는 소독처리시험과 같은 온도조건에서 사육하여야 한다.

1.2.5. 훈증소독시험 시 가스농도 측정은 농도시간적(CT적)이 산출될 수 있도록 적정 간격으로 측정한다.

1.2.6. 소독완료 후 잔존가스를 1시간이상 배기하여야 한다. 또한 공시충은 살충율 조사가 끝날 때까지는 생육에 적합한 온․습도로 유지 보관하여야 한다.

1.2.7. 솔수염하늘소 감수성시험 소독처리 예시는 다음과 같다.

항목	재료 및 방법
공시충	솔수염하늘소
태	알, 유충, 번데기
공시충조건	알은 거름종이에 산란시켜 페트리디쉬에 보습제로 솜과 함께 처리, 유충 및 번데기는 페트리디쉬 1개에 1마리씩 공시
해충 수	처리구당 약100개
처리구(농도)	0, 20 25, 30, 35, 40, 45, 50g/㎥
훈증상	데시케이터 훈증상(8리터)
훈증장비	압력계, 가스농도측정기, 가스채취장치, 환풍장치
투약방법	약간 감압된 상태에서 정량의 가스를 주입
가스농도측정	GC(TCD)
가스농도측정 간격	훈증 후 15분, 1, 3, 6, 24시간
온도측정장치	자동온도기록계
온도측정간격	10분간격
배기시간	1시간(100리터/분)
훈증후 보관	20℃, 70% 상대습도
조사기간	30일
살충율 결정	현미경하에서 관찰된 알 부화율, 유충 살충율 등

1.3. 살충율 조사

1.3.1. 훈증처리 된 공시충의 사멸여부는 현미경 등으로 조사한다.

1.3.2. 현미경 등으로 확인이 안 되는 알은 부화시키고 번데기는 성충으로 우화시켜 확인할 수 있다.

1.3.3. 일부 공시약제는 경시적인 살충력이 있거나, 가역반응을 나타내는 경우가 있으므로 소독완료 후 공시충을 일정기간(3～7일)을 두면서 살충여부를 조사하여야 한다.

1.4. 데이터 분석

1.4.1. 살충데이터는 각 처리구별 사충수/공시충수를 기초로 프로빗 분석법(Probit analysis) 등을 이용, 통계분석을 하여 LC50, LC99값을 산출하므로서 감수성 정도를 비교, 감수성이 적은 태 또는 종을 밝혀야 한다. 다만, 처리시간이 살충 효과에 영향이 큰 훈증제(인화수소, 이산화탄소 등)의 경우는 LT50 및 LT99값을 산출하여 분석할 수 있다.

1.4.2. 처리구마다 농도시간(CT)적을 구하여, 적용대상 해충을 완전 살충할 수 있는 농도 및 시간을 산출한다.

2. 수착 및 침투성 시험

피 훈증물의 용적율, 포장재 등에 따라 훈증약제의 수착 및 침투에 차이가 있어 살충효과가 다를 수 있으므로, 다양한 용적율 또는 포장상태에서의 수착 및 침투성 시험을 실시하여야 한다.

2.1 수착 시험

2.1.1. 포장한 상태에서의 수착시험은 가능한 내용적이 0.5㎥이상의 훈증상에서 실시한다.

2.1.2. 용적률은 일반적으로 가스농도에 직접적인 영향을 미치므로 2～3가지(10, 30, 50%)로 달리하여 처리하며, 온도․습도 등 처리조건 등이 가스농도에 영향을 미친다면 이 역시 2～3가지로 달리하여 처리한다.

2.1.3. 곡물 및 과채류의 용적률은 w/v(%)로, 목재류의 용적률은 v/v(%)로 표현하는 것을 원칙으로 한다.

2.1.4. 투약량은 상업적 훈증 시 농도와 유사하게 처리되어야 한다.

2.1.5. 소독처리 대상 식물이 여러 종인 경우, 감수성이 큰 2～3종을 선정하여 시험할 수 있다.

2.1.6. 수착은 소독처리 초기에 많이 되고 CT적은 가스농도의 측정 간격이 짧을수록 정확하게 구할 수 있으므로 가스농도는 아래 예시와 같이 가능한 초기에 여러 번 측정한다.

훈증시간(hr)	측정시간(훈증후)	측정횟수
2	10, 30, 60, 90, 120분	5
3	10, 30, 60, 90, 120, 180분	6
4	10, 30, 60, 90, 120, 180, 240분	7
24	1, 2, 3, 6, (12), 24시간	6
48	1, 2, 3, 6, (12), 24, 48시간	7
72	1, 2, 3, 6, (12), 24, 48, 72시간	8

2.1.7. 소독처리 CT적은 아래 식에 의해 계산한다.

○ 투약 완료 1, 2, 3, 6, n시간 후  CT적 계산방법

{(2-1)(C1+C2)+(3-2)(C2+C3)+(6-3)(C3+C6)+(n-6)(C6+Cn)}/2

* Cn : n시간 후 가스농도.

2.1.8. 실제투약량은 감수성 시험에서 얻어진 100% 살충 CT적에 수착으로 인하여 손실되는 양을 보충하여 계산한다.

○ 실제 투약량 계산식 = 투약량 × 100% 살충 CT적 / 수착시험시 CT적

○ 예) 투약량이 25g/㎥이며, 투약후 1, 2, 3, 6, 12, 24시간째 측정한 가스농도는 각각 20, 14, 12, 10, 8, 6mg/ℓ으로 CT적은 201이었다. 만일 감수성 시험에서 산출된 100% CT적이 230이라면, 실제 투약량은 25×230/201 ≒ 28.6g/㎥이다.

2.2. 침투성 시험

가스 침투성은 식물의 종류, 형태, 조건, 포장형태 등에 따라 다르므로 각 식물별로 다양하게 실시하여야 한다.

2.2.1. 종이박스에 포장된 과일

2.2.1.1. 포장한 상태에서의 침투시험은 가능한 내용적이 0.5㎥이상의 훈증상에서 실시한다.

2.2.1.2. 가스침투성은 순환팬의 영향을 받으므로 적정한 용량의 순환팬을 설치하여야 한다.

2.2.1.3. 가스농도측정은 테프론 튜브와 같은 비수착성 재질로 된 측정호스를 2개의 포장상자 내부 및 훈증상내 상․하 부위에 설치 측정한다.

2.2.1.4. 가스채취는 훈증상 내 가스농도의 변동을 방지하기 위해 최소 필요량(20～30ml)을 취해야 한다. 가능한 구멍이 작은 호스(직경 1～2mm)를 사용한다.

2.2.1.5. 투약량과 용적율은 상업적 규모와 유사하여야 하며, 순환팬 가까이 있는 상자의 가스농도 측정은 피해야 한다.

2.2.1.6. 가스침투성 시험은 고내와 박스내 가스농도가 균일하게 되었을 때 마친다. 시험 후 잔존 가스는 최대한 신속히 배기하여야 하고 잔존가스농도를 측정한 후 살충효과, 약해 등 조사를 한다.

2.2.2. 마대 등으로 포장된 곡물

2.2.2.1. 종이 박스로 포장된 과일에 대한 침투성 시험 방법을 곡물에도 적용할 수 있다.

2.2.2.2. 곡물의 훈증처리시간은 24～72시간으로, 가스농도측정 간격도 길어질 수 있다.

2.2.2.3. 곡물내부에 끝에 그물망이 씌어진 측정 파이프를 삽입하여 가스를 채취하여 측정하며, 순환 팬은 가스농도가 균일화되면 가동을 멈춘다.

2.2.3. 싸이로 내 산물 곡물

2.2.3.1. 싸이로 내 산물 곡물은 가스침투 및 확산이 어려우므로 필수적으로 가스 강제 순환시스템이 설치된 싸이로에서 실시하여야  한다.

2.2.3.2. 가스순환시스템은 2시간이내 싸이로 내 가스농도를 균일화시킬 수 있어야  한다. 이 시험은 대개 대규모로 이루어질 수 밖에 없으므로 대규모의 적용시험과 병행 실시할 수 있다.

2.2.4. 목재

목재 내부의 침투성 확인은 가스농도로 조사가 어려우므로, 목재 내부에 감염된 해충 또는 투입한 공시충의 살충율을 조사 확인하여야 한다.

2.2.5. 침투성 시험시 주의사항

2.2.5.1. 종이상자는 가스의 침투 또는 배기가 지연되어 약해가 발생될 수 있으므로 시험대상 종이상자의 좌우 측면에 여러 개의 구멍을 내어야 한다.

2.2.5.2. 훈증처리 시간이 2～3시간인 경우는 15～20분정도, 24～48시간인 경우는 2시간 정도 지난 후에는 가스가 균일하게 침투되어야 한다.

2.2.5.3. 침투성이 낮은 경우 투약량 및 시간을 조정하여야 한다.

3. 약해 시험

3.1. 적용대상 식물체가 다수인 경우 감수성이 큰 2~3종 식물체를 선정하여 시험을 실시할 수 있다.

3.2. 약해 감수성은 약량, 온도, 처리시간을 정하여 2개 처리구 이상 시험을 하여야 한다.

3.3. 절화류 및 신선과일의 약해 시험의 예시는 다음과 같다.

항목	재료 및 방법
공시작물	절화류	사과
공시약제	PH3	MB
처리구(농도)	1, 2, 3g/㎥	35, 40, 45g/㎥
용적율	20%	0.1t/㎥
처리 온도	15℃	15℃
훈증 시간	24hr	2hr
훈증상	0.5㎥ 훈증상	0.5㎥ 훈증상
포장형태	종이 포장	종이 포장

4. 현장 적용 시험

대형 또는 상업적 수준의 소독시설 등 조건하에서 대상해충에 대한 살충효과 및 식물체에 대한 약해여부, 작업자의 안전성, 적용가능성 및 실용성 등을 확인하여야 한다.

4.1. 현장 적용조건하에서의 시험은 원칙적으로 상업용 소독시설 및 대물량의 피훈증물을 대상으로 실시하여야 하나, 0.5㎥ 이상 훈증상(스틸 또는 아크릴) 또는 1～5㎥이상의 천막을 사용할 수 있다.

4.2. 공시충은 내성이 큰 종의 태를 500마리 이상으로 사용하여 2회 반복시험 하여야 한다. 다만, 하늘소류와 같이 공시충 확보에 과도한 예산이 소요되는 등 확보가 어렵다고 인정되는 경우는 250마리 이상으로 2회 반복 시험할 수 있다.

4.3. 용적율, 피 훈증물의 크기 및 양, 포장 방법, 투약방법, 순환 및 배기 등의 훈증조건은 상업용과 유사하게 하여야 하며, 감염된 식물체가 부족한 경우는 감염되지 않은 식물체로 용적율을 맞출 수 있다.

4.4. 약해시험도 상업적 조건과 유사한 조건하에서 실시하여야 한다.