(별표 9) 흰반점병 (White spot disease, WSD) 정밀검사법

가) 병원체 : White spot syndrome virus (WSSV)

나) 임상증상

- 외골격의 흰 점 (직경 3㎜, 가장 일반적인 임상증상)

- 체색의 변색 정도가 매우 심하며 붉거나 분홍색의 새우가 관찰

- 섭이 부진, 무기력, 양식장 가장자리의 물표면 유영

다) 정밀검사

(1) 시료 : pleopod (live juvenile 및 subadult), 두부를 제거한 postlarvae (PL11 up), whole (PL10), haemolymph

※ subadults & Juvenile (5마리씩 pooling) / PL 이하 (10마리씩 pooling)

(2) PCR primer sets : Nested PCR 실시

		PCR primers	Product size
First	146F1	5'-ACTACTAACTTCAGCCTATCTAG-3'	1447bp
	146R1	5'-TAATGCGGGTGTAATGTTCTTACGA-3'
Nested	146F2	5'-GTAACTGCCCCTTCCATCTCCA-3'	941bp
	146R2	5'-TACGGCAGCTGCTGCACCTTGT-3'

(3) Decopod-spectific primer : 추출한 DNA의 quality 확인을 위해 권장

		PCR primers	Product size
Decapod- specific	143F	5'-TGCCTTATCAGCTNTCGATTGTAG-3'	848bp
	145R	5'-TTCAGNTTTGCAACCATACTTCCC-3'

(4) PCR conditions

- [1 cycle]    94°C for 4min, 55°C for 1min, 72°C for 2min

- [39 cycles]  94°C for 1min, 55°C for 1min, 72°C for 2min

- [1 cycle]    72°C for 5min

라) 확정진단

(1) 염기서열분석 : PCR 산물의 염기서열분석을 통해 WSSV 임을 확인

(2) 결과판정 : WSSV 염기서열과 일하면 양성으로 판정