[별표 6]

일반정보

(제2조제6호 관련)

일반정보

겉보기밀도 및 탭밀도측정법

겉보기밀도 및 탭밀도측정법은 각각의 분말상 의약품을 성기게 충전한 때와 탭(tap) 충전한 때의 겉보기밀도를 측정하는 방법이다. 성기게 충전하는 것은 용기 중에 분체를 눌러 다지지 않고 느슨하게 충전하는 것이며 탭충전하는 것은 분체를 충전한 용기를 일정한 높이에서 일정한 속도로 반복하여 낙하시켜 용기중의 분체의 용적이 거의 일정하게 될 때까지 치밀하게 충전하는 것이다. 겉보기밀도는 단위용적당 질량 (g/mL)으로 표시한다. 또한 겉보기밀도는 분체의 충전성, 압축성, 유동성 등의 척도가 되는 특성값의 하나이며 충전방법과 이력에 의하여 영향을 받으므로 측정조건을 기재한다.

겉보기밀도

겉보기밀도는 용기 중에 분체를 눌러 다지지 않고 느슨하게 충전하여 얻어지는 겉보기밀도이다. 겉보기밀도는 메스실린더에 넣은 질량을 알고 있는 분체검체의 겉보기부피를 측정하는 방법 (제 1 법) 또는 용량을 알고 있는 용기에 충전한 분체의 질량을 측정하는 방법 (제 2 법)의 어느 한 방법으로 측정한다.

제 1 법 정질량법

따로 규정이 없는 한 보존 중에 형성된 응집체를 부수기 위하여 시험에 필요한 양의 검체를 16 호 (1000 μm) 체를 통과하여 조제한다. 약 30 g의 검체를 정밀하게 달아 건조한 100 mL 유리제 메스실린더 (눈금 : 1 mL)에 눌러 다지지 않고 넣고 필요하면 분체층의 윗면을 눌러 다지지 않게 고른 다음 눈금의 최소 단위까지 용적을 읽어 다음 식으로 겉보기밀도 ρB를 계산한다.

ρB = M / V0

ρB : 정질량법에 의한 겉보기밀도 (g/mL)

M : 분체의 질량 (g)

V0 : 분체의 겉보기부피 (mL)

측정을 3 회 반복하여 그 평균값을 구하여 정질량법에 의한 겉보기밀도로 한다. 단지 검체 약 30 g가 과다할 때는 용적이 60 ∼ 100 mL가 되도록 검체의 질량을 조정한다.

제 2 법 정용량법

따로 규정이 없는 한 보존 중에 형성된 응집체를 부수기 위하여 시험에 필요한 양의 검체를 16 호 (1000 μm) 체를 통과하여 조제한다. 검체를 용량 V, 질량 M0 의 스테인레스강제 측정용용기내에 넘칠 때까지 흘려 내린다. 다음에 용기의 상부에 퇴적된 과잉량의 분체를 슬라이드글라스 등을 써서 주의 깊게 흘려 내린다. 용기의 측면에 부착한 모든 검체를 솔 등을 써서 제거한 다음 전체의 질량 Mt 을 달고 다음 식으로 겉보기밀도 ρB 를 계산한다.

ρB = ( Mt -M0) / V

ρB : 정용량법에 의한 겉보기밀도 (g/mL)

Mt : 분체와 측정용기의 합계질량 (g)

M0 : 측정용용기의 질량 (g)

V : 측정용용기의 용량 (mL)

측정을 3 회 반복하고 그 평균값을 구하여 정용량법에 의한 겉보기밀도로 한다.

겉보기밀도 및 탭밀도측정용 용기

보조원통

숫자는 mm를 나타낸다.

이 그림은 100 mL 용기 및 보조원통의 한 예이다.

그림 1. 정용량법에 의한 겉보기밀도 및 탭밀도측정용 용기

탭밀도

탭밀도는 분체검체를 넣은 측정용용기를 기계적으로 탭하여 얻은 겉보기밀도이다. 탭밀도의 측정은 용기에 넣은 질량을 알고 있는 분체검체를 탭충전 했을 때의 용적을 측정하는 방법 (제1법) 또는 용량을 알고 있는 용기에 탭충전한 분체의 질량을 측정하는 방법 (제2법)의 어느 한 방법으로 측정한다.

제 1 법 정질량법

따로 규정이 없는 한 보존 중에 형성된 응집체를 부수기 위하여 시험에 필요한 양의 검체를 16 호 (1000 μm) 또는 22 호 (710 μm) 체를 통과하여 조제한다. 약 100 g의 검체를 정밀하게 달아 250 mL 유리제 메스실린더(눈금 : 2 mL)에 눌러 다지지 않고 넣는다. 검체량이 충분하지 않을 때는 100 mL 유리제 메스실린더(눈금 : 1 mL)를 써서 동일하게 조작한다. 탭할 때 탭밀도시험기의 안정성이 흐트러지지 않도록 지지대 및 메스실린더의 질량에 주의한다.

검체를 충전한 유리제 메스실린더를 탭밀도시험기에 조립한 다음 각각의 시험기에서 규정한 측정조건 (탭속도 및 낙하 높이)으로 시험한다. 측정조건은 반드시 기록해 둔다.

따로 규정이 없는 한 연속하여 측정한 2 회의 측정값의 차가 앞의 측정값에 대하여 2 % 미만이 될 때까지 50 회 또는 1 분간씩 탭을 반복하여 이 때의 최종 용적 Vf를 구하여 다음 식으로 탭밀도 ρT를 계산한다.

ρT = M / Vf

ρT : 정질량법에 의한 탭밀도 ( g/mL )

M : 분체의 질량 ( g )

Vf : 분체의 최종 겉보기부피 ( mL )

측정을 3 회 반복하여 그 평균값을 구하여 정질량법에 의한 탭밀도로 한다.

제 2 법 정용량법

따로 규정이 없는 한 보존 중에 형성된 응집체를 부수기 위하여 시험에 필요한 양의 검체를 16 호 (1000 μm) 체를 통과하여 조제한다. 질량 M0 및 용량 V를 알고 있는 스테인레스강제 측정용 용기에 보조원통 (그림1)을 장착하고 그 용기 내에 충분한 양의 검체를 주입한다. 일정한 낙하높이로 한 적절한 탭밀도시험기에 용기를 조립한 다음 각각의 시험기에서 규정한 탭속도 및 탭회수로 시험한다. 다음에 보조원통을 꺼내고 용기의 상부에 퇴적된 과잉량의 분체를 슬라이드글라스 등을 써서 주의 깊게 흘려 내린다. 용기의 측면에 부착한 모든 검체를 솔 등을 써서 제거한 다음 전체의 질량 Mt 을 달고 다음 식으로 탭밀도 ρT 를 계산한다.

ρT = ( Mt - M0 ) / V

ρT : 정용량법에 의한 탭밀도 (g/mL)

Mt : 분체와 측정용기의 합계질량 (g)

M0 : 측정용용기의 질량 (g)

V  : 측정용용기의 용량 (mL)

측정은 3 회 반복하여 그 평균값 및 상대표준편차를 구한다. 상대표준편차가 2 % 이상일 때는 탭회수를 변경하여 시험을 반복한다.

주의 : 이 측정법에는 감도 0.1 g의 천칭을 쓴다.

경구용의약품의 용출규격 설정 가이드라인

1. 목적

이 가이드라인은 정제, 캡슐제 등 경구용 고형제제의 용출규격 설정에 관한 구체적인 방법을 제시하여 제제의 품질균일성을 확보함으로써 우수한 의약품 생산에 기여함을 그 목적으로 한다.

2. 용출시험의 의의

의약품의 경구투여 후 약물의 흡수는 제형으로부터 약물의 방출성과 생리적 조건에서 약물의 용출성 또는 가용화 정도 및 장관 투과성에 의하여 영향을 받는다. 용출시험은 약물의 방출 및 용출 또는 가용화 상태를 조사하는 시험으로서 경구 투여된 제제가 생체 내에서 어떻게 작용할 것인가에 대한 추측을 가능하게 하는 시험이다. 용출시험을 수행할 때에는 약물의 용해도, 용출, 장관 투과성, 제형의 특성, 약물동태학적인 특징 및 생리학적인 인자를 고려함이 바람직하다. 용출시험 조건은 실제 인체에 투여한 제제와의 상관성을 설정하기 위하여, 위장관의 pH를 나타내는 여러 시험액을 사용하거나, 위장관의 연동운동을 대변하는 적절한 회전속도를 선택하고, 또 지질, 효소 또는 계면활성제를 시험액에 첨가하여 유사한 생리적 조건을 설정하려고 한다. 이러한 접근 방법을 통하여, 때로는 용출시험 결과로서 생체내에서의 약물동향을 예측할 수도 있다(생체외-내 상관성 ; in vitro-in vivo correlation). 그러나 위장관내 조건을 용출시험에 반영하려는 노력이 반드시 필요한 것은 아니다. 왜냐하면 인체 위장관내 상태를 반영하지 않는 조건이라도 용출시험을 통하여 제제의 품질관리 및 품질확보 여부를 판단할 수 있는 다음과 같은 유용한 정보를 얻을 수 있기 때문이다.

1) 로트별 품질의 균일성

2) 제제 조성 및 처방 개발

3) 제제의 약물 방출기전에 대한 정보

4) 유효기간 중 품질의 동등성 여부 판단

5) 제제 허가 후 원료약품 및 분량, 제조방법 또는 제조소 변경 및 생산 규모 변경 전․후 제제의 동등성 여부 판단

3. 용어의 정의

가. 일반(속방성)제제

일반(속방성)제제(conventional release, immediate release dosage forms)는 약물의 고유특성에 따라 제제 중 약물의 용출양상이 결정되는 제형으로서 원료약품의 분량이나 제조방법의 변경에 따라 용출정도가 크게 변하지 않는 제제를 말한다.

나. 장용성제제

장용성제제(delayed release, enteric coated dosage forms)는 투여 후 일정시간동안 약물의 용출을 지연시키도록 구성된 제형으로서 일반적으로 위의 산성조건에서 용출되지 않도록 특별한 처방이나 제조방법에 의해서 제조된다. 약물동태학적 기준은 변하지 않고 일정시간 후에 일반제제와 같은 용출양상을 나타내는 제제를 말한다.

다. 서방성제제

서방성제제(prolonged release, extended release dosage forms)는 같은 투여경로를 가지는 일반(속방성)제제의 약물보다 더 느린 용출을 나타내는 제형으로, 일반제제와 비교 시 복용횟수가 감소된 제형으로서 특별한 처방이나 제조방법에 의해서 제조된 제제를 말한다.

4. 용출 규격 설정 시 일반적 고려사항

가. 제형의 분류

이 가이드라인에서는 제형을 일반제제, 장용성제제 및 서방성제제로 분류하였고 그 정의는 3. 용어의 정의 항에서 언급되는 바와 같다.

나. 용출시험조건

(1) 용출시험장치

현재 7종의 용출기가 공정서에 수재되어 있으며 그 종류는 아래 그림과 같다(그림1). 제형의 특성에 따라 적합한 용출기를 선택하여 용출시험을 실시할 수 있다. 일반적으로 가장 많이 사용되는 방법은 제 1 법 회전검체통법과 제 2 법 패들법이다. 회전검체통법과 패들법은 간단하고 견고한 실험방법으로서, 표준화가 잘 되어 있을 뿐만 아니라, 전 세계적으로 널리 통용되고 있는 방법이다. 그러므로 특별한 용출시험 방법을 필요로 하는 경우를 제외하고는, 회전검체통법이나 패들법을 사용하여 용출시험을 실시한다. 회전검체통법과 패들법의 용출기는 반드시 대한민국약전 일반시험법 중 용출시험법 규정에 적합하여야 한다. 제제 개발 시 회전검체통법이나 패들법 중 어떤 시험법을 선택할 지는 생체외 용출패턴과 생체내 약물동태학적인 면을 고려하여 결정한다. 일반적으로 캡슐, 시험액 위로 뜨는 제형, 또는 천천히 붕해되는 제형의 경우에는 회전검체통법을 사용한다. 정제의 경우에는 패들법을 많이 사용하나 붕해된 약물입자가 용출기 바닥에 가라앉아 용출이 천천히 진행되는 경우에는 패들법보다 회전검체통법을 사용하는 것이 좋다. 또한 용출시험에 사용되는 용출기는 일반적으로 일정기간마다 용출기 적합성시험(부록 1 참조)을 실시하는 것이 바람직하다.

장치 1                 장치 2

(회전검체통법)             (패들법)

장치 3                       장치 4

(flow-through cell법)      (reciprocating cylinder법)

장치 5                        장치 6

(paddle over disk법)               (cylinder법)

Acryl rod

Angled disk

Teflon cylinder

Spring holder

Reciprocating disk

장치 7

(reciprocating holder법)

그림 1. 용출시험장치의 종류

(2) 회전속도

회전속도는 일반적으로 패들법은 50 rpm, 회전검체통법은 100 rpm으로 설정한다. 서방성제제는 패들법의 경우 일반적으로 100 rpm으로 설정하는 등 보다 빠른 회전속도를 설정한다. 그러나 이러한 회전속도를 반드시 설정해야 하는 것은 아니다. 예를 들어 회전검체통법을 사용하여 100 rpm의 회전속도로 용출시험을 실시하였을 때 15 분 이내에 100 %의 약물이 용출되었다면 보다 낮은 회전속도를 사용하거나 시험액의 조성을 바꾸어 용출패턴을 분별할 수 있도록 하는 것이 바람직하다. 즉, 회전속도는 제제의 비동등성을 인식할 수 있는 가장 분별력이 큰 조건으로 설정되어야 한다.

(3) 용출시험액

(가) 일반적인 고려사항

1) 일반적으로 pH 1.2, 4.0, 4.5, 6.8 및 7.4인 시험액을 사용하나 제제의 특성(예로서 약물의 안정성 또는 용해성) 또는 특수한 실험 목적을 위하여 시험액의 pH와 조성을 변경할 수 있으며 이 때 변경에 따른 약물의 안정성 및 용해도 등을 고려한다.

2) 제제조성, 제조공정, 장비, 원료 등 생산 공정의 요인에 따른 제제 간 또는 로트 간 발생할 수 있는 용출속도의 차이를 최대한 분별할 수 있는 시험액을 선택한다. 일반적으로 너무 빠른 용출속도를 나타내는 시험액은 분별력이 작으므로, 상대적으로 느린 용출속도를 나타내는 시험액을 사용하는 것이 좋다.

3) 시험장치에 약물이 흡착되는 등 분석에 지장을 주는 경우에는 이를 방지할 수 있는 흡착억제제를 포함하는 시험액을 사용한다.

4) 난용성 약물의 용해도를 향상시키기 위하여 시험액에 계면활성제를 첨가할 수 있다. 다만, 유기용매의 사용은 권장하지 않는다.

5) 시험액의 탈기는 모든 제제의 용출시험 전에 반드시 실시해야 하는 것은 아니지만, 만약 탈기된 시험액과 탈기되지 아니한 시험액을 사용하여 각각 용출시험을 수행하였을 때, 동일한 결과를 얻을 수 없는 경우에는 탈기 과정(부록 2 참조)이 필요하다.

(나) 시험액 종류

1) 물

물은 완충력이 없어 용출시험 시 약물이나 첨가제에 의하여 물의 pH, 표면장력이 쉽게 변화되어 용출시험에 영향을 줄 수 있는 단점이 있다. 그러나 가장 편하게 사용할 수 있고 환경 친화적이라는 장점이 있어 제제의 용출패턴에 영향을 주지 않는 경우에는 물을 시험액으로 가장 많이 사용한다.

2) pH 1.2 시험액

대한민국약전 붕해시험법 제 1 액을 사용한다. 이 시험액은 염산과 염화나트륨을 사용하여 조제하며 염산의 농도는 약 0.1 mol/L이다. 이 때 약물의 안정성에 영향을 주는 경우 약물의 안정성이 유지될 수 있는 시험조건을 설정하는 것이 필요하다. 실제로 많은 제제들은 산성 조건에서 용출시험을 할 때 염산의 농도를 0.001 ∼ 0.1 mol/L 까지 다양하게 설정하고 있다.

3) pH 4.0/4.5 시험액

- pH 4.0 시험액 : 0.05 mol/L 초산나트륨완충액 [0.05 mol/L 초산․ 0.05 mol/L 초산나트륨혼합액 (82 : 18)]을 사용한다.

- pH 4.5 시험액 : 초산나트륨삼수화물 2.99 g과 빙초산 1.66 g을 물에 녹여 1 L로 한 완충액을 사용한다.

- 약물과의 상호작용 등에 의하여 바람직하지 못한 결과를 초래할 경우에는 구연산 또는 인산 등의 다른 완충액을 사용할 수 있다.

4) pH 6.0 시험액

대한민국약전 인산이수소나트륨․구연산완충액 (pH 6.0)을 사용한다.

5) pH 6.8 시험액

대한민국약전 붕해시험법 제 2 액을 사용한다.

6) 인공위액

미국약전 Test Solutions의 인공위액 (simulated gastric fluid TS)을 사용한다.

7) 인공장액

미국약전 Test Solutions의 인공장액 (simulated intestinal fluid TS)을 사용한다.

8) 기타 시험액

일반적으로 pH 1.2, 4.0, 4.5, 6.0 및 6.8인 시험액을 사용하지만 제제의 특성상 또는 특수한 실험목적을 위하여 필요한 경우 pH와 시험액의 조성을 변경하여 용출시험을 실시한다. 그 예로서 약물이 알칼리성 시험액에서 가장 안정하거나 약물의 선택적인 분석이 가능한 경우 또는 알칼리성 시험액에서 충분한 약물의 용해도가 보장되는 경우 등을 들 수 있다. 알칼리성 시험액으로 용출시험 후 C18칼럼을 사용하여 액체크로마토그래피법에 따라 약물을 분석하는 경우, 일반적인 C18칼럼은 높은 pH에서 불안정하기 때문에 검액을 주입하기 전에  중화하거나 이동상으로 충분히 희석하는 작업이 필요할 수도 있다.

(다) 시험액의 양

시험액의 양은 주로 900 mL를 사용하나 시험조건에 따라 500 ~ 1 L로 변경하여 설정할 수 있다. 현재 150 mL의 작은 용출용기나 1 L이상의 큰 용출용기도 사용되고 있다. 일반적으로 시험액 부피를 설정할 때 고려하여야 할 사항은 다음과 같다.

1) 약물의 용해도

시험액의 양은 싱크조건(sink condition)을 만족시켜야 한다. 일반적으로 싱크조건은 약물을 완전히 용해시키는데 필요한 시험액 양에 대하여 최소 3 배 이상(일반적으로 5 ~ 10 배)을 사용하는 것을 의미한다. 즉, 약물이 사용한 시험액에 완전히 녹았을 때의 농도가 약물포화농도의 30 % 미만이 되는 경우를 의미하며 용출시 싱크조건을 유지하여 약물의 용해과정이 용출속도의 율속단계에 영향을 주지 않도록 해야 한다.

2) 계면활성제의 사용

난용성약물의 용해도를 증가시키기 위하여 계면활성제를 첨가하였을 경우에는 시험액의 양을 많이 사용하는 것이 바람직하다.

3) 분석의 용이성

약물의 함량이 미량인 제제의 용출시험 시, 용출된 약물의 농도가 정량한계보다 낮아 약물의 정량이 곤란할 경우에는 되도록 적은 양의 시험액을 사용하는 것이 좋다.

(라) 시험액 온도

일반적으로 경구용 고형제제의 경우 37 ± 0.5 ℃로 유지한다.

(4) 난용성제제의 용출시험

(가) 시험액의 pH 변화가 용출률에 미치는 영향 조사

물, pH 1.2 시험액, pH 4.0/4.5 시험액 및 pH 6.8 시험액 등을 사용하여 용출시험을 하며 이 때 보다 빠른 회전속도(예로서 회전검체통법은 회전속도 120 rpm으로, 패들법은 회전속도 75 rpm)를 설정하여 용출시험을 실시한다. 용출시험 시작 후 적절한 시점에서 시험액 일부를 채취하여 약물의 용출률을 측정하고, 용출시험결과그래프를 작성한다. 이 실험결과를 가지고 시험액을 선정한다. 만약 약물의 용출률이 70 ~ 85 % 범위에 도달하지 않을 때에는, 위의 여러 시험액 중에서 가장 빠른 용출속도를 나타내는 시험액을 선정하고 그 시험액에 계면활성제를 첨가하는 것을 고려한다.

(나) 적합한 계면활성제의 선택

약물과 계면활성제의 상호작용은 약물과 계면활성제의 물리화학적 특성에 의해 영향을 받는다. 그러므로 주어진 약물에 대하여 다음과 같은 비이온성, 음이온성 및 양이온성 등 여러 가지 계면활성제를 선택하여 실험한다. 이때 계면활성제의 농도는 우선적으로 약 2 %로 설정하고 계면활성제의 종류는 다음과 같다.

- 음이온성 계면활성제 : 라우릴황산나트륨(SLS)

- 양이온성 계면활성제 : 브롬화세틸트리메칠암모늄(CTAB)

- 비이온성 계면활성제 : 폴리소르베이트 80, 40 및 20 라우릴디메칠아민 N-옥사이드(LDAO)

(다) 계면활성제의 농도 결정

규정시간(2 시간 또는 6 시간 이내)에 용출시험을 종료하였을 때 충분한 용출률을 나타내는 가장 낮은 농도의 계면활성제를 사용한다. 이러한 목적을 달성하기 위해, 사용하는 계면활성제의 농도를 2.0 %에서 1.5, 1.0, 0.75, 0.5와 0.25 % 등으로 점차적으로 감소시키면서 용출시험을 실시한다.

(5) 장용성제제의 용출시험

위저항성 코팅제의 역할 또는 코팅을 통한 약물의 확산 가능성에 대한 영향을 확인하기 위하여 산성조건(acid stage)과 장관의 환경에 유사한 조건인 완충액조건(buffer stage)의 두 가지 조건에서 용출시험을 한다.

공정서에 수재된 장용성제제의 용출시험 예시로서 산성조건인 0.1 mol/L 염산을 가지고 용출시험을 실시한 후 완충액조건인 pH 6.8 인산염완충액을 사용하여 용출시험을 하는 경우, 다음과 같은 방법이 있다.

(가) 0.1 mol/L 염산 750 mL를 가지고 37 ± 0.5 ℃에서 2 시간 동안 용출시험을 실시한다. 2 시간 후 시험액 일부를 약물농도 측정 목적으로 채취한다. 상기의 0.1 mol/L 염산에 미리 37 ± 0.5 ℃로 맞춘 0.2 mol/L 인산나트륨액 250 mL를 넣는다. 필요에 따라 2 mol/L 염산 또는 1 mol/L 수산화나트륨액을 사용하여 시험액의 pH를 6.8로 맞추어 시험한다(0.2 mol/L 인산나트륨액의 첨가와 pH 조절을 5 분 이내에 수행한다).

(나) 0.1 mol/L 염산 1 L를 가지고 37 ± 0.5 ℃에서 2 시간 동안 용출시험을 실시한다. 2 시간 후 용출용기에 있는 용출액 중 일부를 취한 다음 남은 용출액을 버리고 이 용출용기에 37 ± 0.5 ℃로 미리 맞추어 놓은 pH 6.8 인산염완충액 1 L를 넣어 용출시험을 계속한다. (0.1 mol/L 염산 750 mL에 0.2 mol/L 인산나트륨액 250 mL를 넣어 pH 6.8 인산염완충액을 만든다. 필요에 따라 2 mol/L 염산 또는 1 mol/L 수산화나트륨액을 가지고 시험액의 pH를 6.8로 맞춘다).

다른 방법으로 새로운 용출용기에 pH 6.8 인산염완충액 1 L를 넣고 0.1 mol/L 염산의 용출용기로부터 꺼낸 패들 또는 회전검체통과 검체를 넣어 용출시험을 계속한다.

(6) 젤라틴 캡슐의 2 단계 용출시험법

경질 및 연질캡슐의 경우 2 단계용출시험을 실시하는 것이 바람직하다. 위에서 설명한 일반적인 시험액을 사용하여 제 1 단계 시험을 한다. 용출속도가 매우 느려 용출시험을 적용할 수 없는 경우에는 효소를 첨가한 다음 제 2 단계 시험을 실시한다. 사용되는 효소는 정제된 펩신 또는 판크레아틴을 사용하며 시험액의 pH에 따라 효소를 선정한다. 물 또는 pH 6.8 미만의 산성 시험액인 경우에는 펩신을 첨가하며, 시험액 1 L 당 활성도는 750,000 단위 이하로 한다. 이때, 첨가하는 펩신의 양은 시험액 1 L 당 3.2 g 이하이어야 한다. 시험액이 pH 6.8 이상인 경우에는 판크레아틴을 첨가하며, 시험액 1 L 당 활성도 1,750 단위 이하로 한다. 이때 첨가되는 판크레아틴의 양은 시험액 1 L 당 50 mg 이하이어야 한다. 만약 처음 제 1 단계에서 사용한 시험액이 물인 경우에는 제 2 단계 시험액으로서 펩신을 함유하는 0.1 mol/L염산 또는 판크레아틴을 함유하는 pH 6.8 인산염완충액을 사용할 수 있다. 단, 주의할 점은 처음 1 단계 시험액이 높은 농도의 라우릴황산나트륨과 같은 계면활성제를 포함하는 경우에는 2 단계 시험 시 계면활성제에 의해 효소변성이 생길 수 있으므로 주의하여야 한다.

5. 용출 기준

가. 일반제제

일반제제에 대한 용출 기준 설정 방법은 두 가지로 분류할 수 있다.

(1) 1시점 기준(single-point specifications) : 높은 용해도를 가진 제제 (Biopharmaceutics Classification System(BCS) Class I 과 III)를 대상으로 일반적인 품질관리 목적으로 설정한다(예 : 「다음 시험법에 따라 시험할 때 아세트아미노펜은 30분 이내에 80 % 이상이 용출되어야 한다.」). 용출시작 후 lag time(주로 필름코팅이나 캡슐에 의해 초래)이 있더라도 20 ~ 30분에 약물의 80 % 이상이 용출되는 제제를 대상으로 1시점 기준을 설정할 수 있다. 이러한 제제를 개발하는 단계에서는 생체외-내 연관성을 구축하려는 시도가 필요하지 않다.

(2) 2시점 기준(two-point specifications) : 낮은 용해도를 가진 제제 (BCS Class II 와 IV)의 일반적인 품질관리 목적으로 설정한다. 보통 용출시간이 45 분 이상인 경우에 2시점 기준이 필요하다. 일반적으로 2시점 기준이 1시점 기준보다 더 유용하다.

나. 장용성제제

산성조건(acid stage)에서 약물의 용출기준은 10 % 이하가 되도록 하며 완충액조건(buffer stage)에서 용출기준 설정은 일반(속방성)제제의 용출시험 기준 설정에 따른다.

다. 서방성제제

최소한 3시점을 사용하여 용출기준을 설정하여야 한다. 이 때 이 시점들은 용출시험의 초기, 중반, 그리고 종결시점을 대변하는 것이어야 한다. 종결시점에서의 평균용출률은 가능한 80 %에 도달하여야 한다.

초기시점(보통 용출시험 시작 후 1 ~ 2 시간)을 선정하여 약물이 한꺼번에 방출되는지를 조사하는데 일반적으로 초기시점에서는 약물의 20 ~ 30 % 정도가 용출되어야 한다. 중간시점은 약물의 50 % 정도가 용출되는 시점을 선정하며 종결시점은 약물의 80 % 이상이 용출되는 시점을 선정하여 대부분의 약물이 용출되어야 한다. 하지만 용출시험이 끝날 때까지 평균용출률이 80 %에 도달하지 않는 경우에는, 용출률이 더 이상 변화하지 않는 시점을 용출시험의 종결시점으로 한다.

일반제제, 장용성제제 및 서방성제제는 유효기간 동안 용출기준에 적합하여야 한다.

6. 용출 규격 설정 방법

용출 규격은 일반적으로 다음과 같은 방법으로 설정한다. 그러나 보다 더 적절한 방법이 있거나 약물 및 제제의 특성에 따라 타당한 다른 용출시험 조건(용출시험장치, 회전속도 및 시험액 등)으로 변경하여 실시할 수 있다.

가. 검체의 선정

(1) 검체는 임상시험, 생체이용률시험 또는 의약품동등성시험에 사용(또는 동등)한 롯트를 선정한다.

(2) 약물의 표시량과 5 % 이내 또는 대조약과 시험약의 함량차이가 5 % 이내인 롯트를 선정한다.

나. 제 1 단계 (예비시험)

(1) 검체의 수

상기항에 따라 선정한 롯트의 검체 6 개를 가지고 용출시험을 실시한다.

(2) 용출액 채취간격

2 시간까지 적절한 채취간격(예로서 10, 15, 30, 45, 60, 90, 120 분)으로 용출액을 취한다. 다만 최종용출률이 85 % 이상 도달한 시점에서 시험을 종료할 수 있다.

(3) 용출시험조건

(가) 용출시험장치

1) 대한약전 용출시험법의 패들법을 우선적으로 적용한다.

2) 검체가 시험용기의 바닥에서 붕해되어 생긴 입자가 뭉치는 현상 등으로 패들법이 곤란한 경우 회전검체통법 등 다른 방법을 사용한다.

3) 검체가 부유하여 양호한 재현성 결과를 얻을 수 없는 경우에는 싱커를 사용할 수 있다.

(나) 시험액

1) pH 1.2 : 대한약전 붕해시험 제 1액

2) pH 4.0 , 4.5 : 0.05 mol/L 초산나트륨완충액*

0.05 mol/L 초산나트륨완충액* : 0.05 mol/L 초산액․0.05 mol/L 초산나트륨액 (82 : 18) 혼합액. 다만, 약물의 pKa에 따라 시험액의 pH 및 조성을 변경할 수 있다.

3) pH 6.8 : 대한약전 붕해시험 제2액

4) 물

5) 계면활성제를 첨가한 시험액 : 상기 1) ~ 4)항의 모든 시험액에서 용출률이 85 % 미만인 제제의 경우에 계면활성제를 사용할 수 있다.

(다) 회전속도

패들법인 경우 우선적으로 50 rpm을 적용하고 용출률이 낮은 경우 75 rpm으로, 경우에 따라서는 100 rpm이상으로 설정할 수 있으나 150 rpm이상의 회전속도는 사용하지 않는다.

(4) 용출시험조건 선정

(가) 일반(속방성)제제

70 ~ 85% 범위의 용출률을 나타내는 시험조건을 선정한다. 일반적으로 너무 빠른 용출속도를 나타내는 시험조건은 분별력이 떨어지는 경우가 많으므로, 상대적으로 낮은 용출속도(1 시간 이내)를 나타내는 시험액과 회전속도를 선정한다.

(나) 장용성제제

(가)항의 일반제제와 동일하며 시험방법은 5. 용출기준 나. 장용성제제를 참조한다. 단, 시험액은 pH 1.2 시험액 및 pH 6.8 시험액으로 한다.

(다) 서방성제제

최소 3시점을 선정하여 초기시점(1~2시간)에서 약물의 20~30 %정도, 중간시점에서 약물의 50 %정도, 종결시점에서 약물의 80 %정도가 용출되는 시험조건을 선정한다.

다. 제 2 단계 (본시험)

(1) 제 1 단계(예비시험)에서 선정한 시험조건에 따라 시험한다.

(2) 검체수

3 롯트에 대하여 각 롯트 당 검체 12 개를 가지고 시험한다.

(3) 용출시험 규격

(가) 일반(속방성)제제 및 장용성제제

1) 시험시간 : 일반제제는 1 시간 이내, 장용성제제는 산성조건에서 2 시간, 완충액조건에서 1 시간 이내를 적용한다.

2) 용출기준 설정

- 3 롯트 중 중간 용출률을 나타내는 롯트의 용출시험결과그래프가 거의 평형(plateau)에 도달하는 시점에서, 평균용출률보다 약 10 % 이하의 값을 용출기준으로 한다.

- 1시점 기준

용해도가 높고 빨리 용출되는 의약품(예 : BCS Class I과 III)에 적용하며 70 ~ 85 % 범위의 용출률을 나타내는 시점에서 하한값의 기준을 설정한다.

- 2시점 기준

용해도가 낮고 천천히 용출되는 의약품(예 : BCS Class II)에 적용하며 일반적으로 15 분을 첫 번째 시점으로 하고 30 분, 45 분 또는 60 분을 두번째 시점으로 한다. 급속한 용출이 작용․부작용에 영향을 주는 경우 및 치료영역이 좁은 성분(생동규정 별표 2)의 경우는 두 시점에서 기준을 설정한다.(필요한 경우 상 ․ 하한값을 설정한다.)

(나) 서방성제제

- 최소 3 시점을 선정하여 초기시점 (1 ~ 2시간)에서 약물의 20 ~ 30 % 정도, 중간시점에서 약물의 50 % 정도, 종결시점에서 약물의 80 % 정도가 용출되는 시점 또는 용출률이 더 이상 변화하지 않는 경우 변화하지 않는 점을 용출시점의 종결시점으로 한다. 초기 및 중간시점의 용출률은 「평균용출률 ± 15 % 이내」, 종결점은 「평균용출률 - 10 % 이내」로 설정한다.

(다) 설정된 규격(안)에 따라 대조약에 대하여 용출시험하여 분석방법을 포함한 규격(안)의 타당성을 확인한다.

7. 용출시험의 밸리데이션 자료 작성 방법

가. 용출시험액

용출시험액 선정사유를 간략하게 요약한다.

나. 용출시험방법

(1) 용출시험과정과 분석방법에 대하여 다음의 내용을 기술한다.

- 용출시험장치

- 표준액의 조제

- 검액의 조제 : 검액의 채취시간, 희석, 여과 (여과 조작이 있을 경우 회수율 검토)

- 용출액의 분석방법(예 : HPLC 등)

- 계산식

- 용출기준

(2) 공시험액, 표준액 및 검액의 스펙트럼 또는 크로마토그램을 제출한다.

다. 밸리데이션

용출시험과정과 분석방법에 대한 밸리데이션에 대하여 기술한다.

(1) 분석과정동안 검액의 안정성에 관한 자료

(2) 분석방법

『의약품등 시험방법의 밸리데이션에 대한 가이드라인』에 따라 실시한다.

- 범위(Range)

: 용출기준 ± 20 %의 범위 내에서 직선성(Linearity), 정확성(Accuracy), 정밀성(Precision)을 나타내야 한다.
(예 : 서방성제제의 용출기준이 1 시간 후 20 % 이하, 9 시간 후 90 % 이상인 경우, 표시량의 0 ∼ 110 % 범위로서 직선성, 정확성, 정밀성에 대한 자료를 제출한다.)

부록 I

용출기 적합성 시험

지속적으로 사용되는 용출기는 일정한 시험을 통하여 용출시험에 올바르게 사용될 수 있는지를 판별하는 적합성 시험을 하여야 한다. 보통 1 년에 2 번 실시하는 것이 바람직한데, 용출기를 옮겼을 때나 또는 용출기에 중대한 변화가 생겼을 때에도 반드시 적합성 시험을 실시하여야 한다. 회전검체통법에서 패들법으로 또는 역으로 변경하였을 때도 적합성 시험을 실시하는 것이 필요하다. 회전검체통법과 패들법에 의존하는 용출기의 경우, 적합성 시험은 2 가지의 표준 캘리브레이터 (USP dissolution calibrators; www.usp.org)에 따르는데, 이때 사용되는 것은 붕해되지 않는 살리실산 표준정제 1 정과 붕해되는 프레드니손 표준정제 1정이다. 살리실산 정제의 경우에는 pH 7.4 50 mmol/L 인산염완충액을 사용하고, 프레드니손 정제의 경우에는 물을 사용한다.

1. 살리실산 표준정제 300 mg (제조번호 O)를 사용한 용출기 적합성시험

가. 50 mmol/L 인산염완충액 900 mL를 시험액으로 한다. 이때 상온에서 시험액의 pH는 7.4 ± 0.05이어야 한다.

나. 시험액을 탈기시키기 위하여 교반하면서 시험액 온도가 41 ℃가 되도록 가열한 직후 시험액을 공경 0.45 ㎛의 여과지를 사용하여 진공 여과한다. 이때 여액은 여과과정 중 교반하도록 한다. 여과 과정이 끝난 후 플라스크를 막고 진공상태에서 5 분간 더 교반한다.

다. 시험액을 용출기의 용출용기에 넣고 그 과정에서 공기가 포집되지 않도록 주의한다. 시험액의 온도가 37 ℃로 평형상태에 도달하게 한다(이때 온도 평형상태를 촉진하기 위하여 패들을 회전시키는 것은 바람직하지 않다.).

라. 시험액 온도가 37 ℃가 되면 100 rpm의 회전속도로 용출시험을 한다.

마. 용출시험 시작 30 분 후 시험액을 취하여 여과한 다음 296 nm에서 흡광도를 측정하여 살리실산의 용출률 (%)을 계산한다. 분석상의 이유로 여액을 시험액으로 희석할 수도 있다.

바. 용출률 (%)이 아래의 표에 나타난 범위 이내이면 용출기 적합성시험을 통과한 것으로 한다.

※ 주의사항

살리실산 표준품을 1 % 이하의 에탄올로 녹인 후 시험액으로 희석하여 일련의 기지 농도를 가진 표준액을 제조하여 분석에 이용한다. 시험액을 여과할 때 여과지에 대한 살리실산 흡착여부를 조사하여야 한다.

표 1. 살리실산 표준정제 (제조번호 O)의 용출 기준

용출기 종류	용출시점 30분의 용출률(%)
장치 1 (회전검체통법)	23 ∼ 29
장치 2 (패들법)	17 ∼ 26

2. 프레드니손 표준정제 10 mg(제조번호 N)을 사용한 용출기 적합성시험

가. 물 500 mL를 시험액으로 한다.

나. 시험액을 탈기시키기 위하여 교반하면서 시험액 온도가 41 ℃가 되도록 가열한 직후 시험액을 공경 0.45 ㎛의 여과지를 사용하여 진공 여과한다. 이때 여액은 여과과정 중 교반하도록 한다. 여과 과정이 끝난 후 플라스크를 막고 진공상태에서 5 분간 더 교반한다.

다. 시험액을 용출기의 용출용기에 넣고 그 과정에서 공기가 포집되지 않도록 주의한다. 시험액의 온도가 37 ℃로 평형상태에 도달하게 한다(이때 온도 평형상태를 촉진하기 위하여 패들을 회전시키는 것은 바람직하지 않다.).

라. 시험액 온도가 37 ℃가 되면 50 rpm의 회전속도로 용출시험을 한다.

마. 용출시험 시작 30 분 후 시험액을 취하여 여과한 다음 242 nm에서 흡광도를 측정하여 프레드니손의 용출률 (%)을 계산한다. 분석상의 이유로 여액을 시험액으로 희석할 수도 있다.

바. 용출률(%)이 아래의 표에 나타난 범위 이내이면 용출기 적합성시험을 통과한 것으로 한다.

※ 주의사항

프레드니손 표준품을 5 % 이하의 에탄올을 사용하여 녹인 후 물로 희석하여 일련의 기지 농도를 지닌 표준액을 제조하여 분석에 이용한다. 시험액을 여과할 때 여과지에 프레드니손 흡착여부를 조사하여야 한다.

표 2. 프레드니손 표준정제 (제조번호 N)의 용출기준

용출기 종류	용출시점 30 분의 용출률 (%)
장치 1 (회전검체통법)	54 ~ 78
장치 2 (패들법)	28 ~ 54

표 1 및  표 2의 용출률(%)은 평균용출률을 의미하는 것이 아니고 용출시험을 6 개 또는 12 개의 용출용기에 대한 각각의 용출률 (%)을 나타내는 것이다. 또한 표준정제 제조번호에 따라 지정된 용출률이 다른데, 표 3에 이러한 사실을 나타내고 있다. 또한 용출시험에 사용하는 용출기가, 예를 들어, 패들법만을 사용하는 경우에는 용출기 적합성시험은 패들법만을 실시할 수 있다.

표 3. 제조번호 J의 프레드니손 표준정제와 제조번호 K의 살리실산 표준정제의 용출적합성 시험 기준

표준정제	용출시험 개시 30분 후 측정한 용출률 %
	장치 1 (회전검체통법)		장치 2 (패들법)
	50 rpm	100 rpm	50 rpm	100 rpm
프레드니손	6 ~ 23	43 ~ 63	46 ~ 59	58 ~ 69
살리실산	14 ~ 21	23 ~ 29	13 ~ 22	16 ~ 27

부록 II

시험액의 탈기법 (deaeration)

시험액의 탈기과정은 모든 제제의 용출시험 전에 반드시 실시해야하는 것은 아니다. 만약 탈기한 시험액과 탈기하지 아니한 시험액을 사용하여 각각 용출시험을 실시하였을 때, 동일한 결과를 얻는 경우에는 탈기 과정이 필요하지 않다. 하지만 특정한 경우, 시험액에 녹아 있는 공기는 약물과의 화학반응에 관여하거나 기포를 형성하여 용출시험 결과에 영향을 미치기도 한다. 예를 들면 캡토프릴의 경우 시험액에 녹아 있는 공기가 캡토프릴의 산화를 촉진하여 안정성 문제를 일으킨다. 또한 일반적으로 용출시험 중 회전검체통 내에 많은 기포가 존재하면 약물의 용출속도가 현저히 저하되는 경우가 많다. 그러므로 이러한 경우, 시험액에 녹아있는 공기를 용출시험 시작 전에 제거하여야 한다. 표 4에 시험액의 탈기가 필요한 대표적인 제제이다.

표4. 시험액의 탈기과정이 필요한 제제

제형	성분명
정제	캡토프릴(captopril)
정제	클로나제팜(clonazepam)
정제	주석산에르고타민(ergotamine tartrate)
캡슐	에토포시드(etoposide)
캡슐	이소트레티노인(isotretinoin)
정제	메프로바메이트(meprobamate)

1. 탈기방법 I

(1) 교반하면서 시험액의 온도가 41 ℃가 되도록 가열한 직후, 시험액을 공경 0.45 ㎛의 여과지를 사용하여 진공 여과한다. 여과과정 중 여액은 교반자석 등을 사용하여 교반하여 준다.

(2) 여과 과정이 끝난 후 5 분간 더 교반 한다 (교반하는 대신 여액을 초음파진탕할 수 있다.).

(3) 용출용기 내에 시험액을 넣어 온도가 37 ℃가 되도록 한다. 난용성약물인 경우, 시험액은 폴리소르베이트 80 또는 라우릴황산나트륨 등의 계면활성제를 포함한다. 이러한 경우 상기의 탈기과정 중, 특히, 진공여과 과정 중 거품이 생성될 수 있다. 그러므로 난용성 또는 서방성 제제를 대상으로 하는 시험액의 경우에는 계면활성제를 제외한 시험액을 가지고 먼저 탈기과정을 거친 후에 나중에 계면활성제를 녹이는 방법으로 하는 것이 좋다.

2. 탈기방법 II

시험액의 탈기를 위해 사용되는 다른 대표적인 방법은 헬륨주입법 (helium sparging)이다. 시험액에 녹아 있는 공기의 주성분은 산소와 질소이다. 이들보다 덜 반응적이며 물에 잘 녹지 않은 헬륨가스를 시험액에 주입하여 이들을 시험액으로부터 밀어내어 제거하는 것이다. 일반적으로 초기 10 ∼ 30 분 동안 헬륨 주입속도는 50 mL/분이면 충분하며 나중에는 5 ∼ 10 mL/분으로 하면 된다. 보통 헬륨을 사용한 탈기과정은 20 ∼ 40 분이 소요된다. 실제로 헬륨주입법을 실시하면 많은 경우 용출률의 상대표준편차가 감소되며, 용출용기 내에서의 온도 평형이 빨리 이루어지는 결과를 기대할 수 있다. 시험액을 탈기하는 또 다른 방법은 진공 하에서 계면활성제를 포함하는 시험액을 초음파 진탕하는 방법을 사용할 수도 있다.

부록 III

용출시험에 사용되는 싱커

패들법을 사용하여 캡슐의 용출시험을 할 때 캡슐이 용출액 표면에 부유하면서 용출용기 밑바닥으로 가라앉지 않는 경우가 있다. 이러한 경우 대부분 철사줄로 만든 싱커(sinker)에 캡슐을 넣어 용출시험을 실시한다. 싱커는 철사줄로 만든 헬릭스 제품(wire helix)이 대부분이지만 서방형(prolong)싱커 그리고 약전 검체통 싱커 등 다양한 제품들이 사용되고 있다.

표5. 용출시험에 사용되는 싱커

싱커 종류	규격 설명
	대한약전에 명시된 검체통 싱커 (2.4 × 1.2 cm)
	검체통 싱커 (2.6 반경 × 1.7 cm)
	6 나선형의 싱커 (일반적인 크기는 2.5 × 1 cm)
	4 나선형의 싱커 (일반적인 크기는 2.5 × 1 cm)
	Time release 형의 싱커 (3.8 × 2.7 cm; 집게 크기는 5 mm × 7 mm)
	3 서방(prolong)형의 싱커

근적외부스펙트럼(NIR:Near Infrared Spectrosropy)
측정법을 이용한 의약품 품질 관리 지침

Ⅰ. 근적외부스펙트럼측정법

근적외부스펙트럼측정법은 유기화합물을 확인하는데 매우 유용한 방법으로써 근적외선이 검체를 통과할 때 투과 및 반사되는 정도를 각 파수 또는 파장에 대하여 측정하는 방법이다.

근적외선 영역은 700 ~ 2500 nm 의 범위이며 그 강도가 중적외부보다 약하지만 C-H, N-H, O-H, S-H 기의 기본 진동수의 배음과 조합대가 나타나므로 물질을 확인, 정성 또는 정량할 수 있다.

스펙트럼은 적외부스펙트럼측정법과 마찬가지로 횡축에 파수(파장)를, 종축에는 투과율이나 흡광도를 표시한 그래프로 나타낸다. 검체 측정시 스펙트럼은 입자 크기, 결정다형, 잔류 용매, 습도 등에 영향을 받을 수 있고,  이러한 영향은 적절한 수학적 전처리를 이용하여 제거할 수 있다.

1. 장치

보통 광원부, 분광부, 측광부 및 표시기록부로 되어 있다.

- 광원부에는 780 nm에서 2500 nm (12821 cm-1 에서 4000 cm-1)의 영역 또는 영역의 일부를 제공하는 광원 또는 본 영역에 포함되는 단색 파장을 발생하는 레이저가 쓰인다.

- 분광부에는 회절격자, 필터 또는 간섭계 등 단색화 장치를 쓴다.

- 측광부에는 검출기 및 신호처리계로 되어 있다.

- 표시기록부에는 디스플레이, 기록장치 등이 있고 스펙트럼의 수학적 전처리가 가능하다.

2. 측정법

다음의 한 방법을 따른다.

1) 투과

이 방법은 일반적으로 희석 또는 희석되지 않은 액체나 고체에 적용할 수 있다. 검체는 적당한 경로(일반적으로 0.5 mm에서 4 mm)를 가진 근적외선을 통과시키는 셀을 쓰거나 광섬유관을 담궈서 측정한다. 액체 검체의 측정 시 온도 등 스펙트럼에 영향을 미치는 방해 원인을 고려해야 한다. 그리고 모든 경우 바탕선 보정을 해야한다. 예를 들어, 공기(액체의 경우) 또는 용매(용액의 경우)를 대조 스캔하여 검체 스펙트럼에서 그 값을 보정한다.

2) 확산반사

이 방법은 일반적으로 고체에 유용하다. 검체는 적절한 장치를 이용하여 측정하는데 검체 안에 광섬유 프로브를 담그고 스펙트럼을 측정하는 경우는 매 측정시 재현성있는 스펙트럼을 얻을 수 있도록 주의를 기울인다. 모든 경우 바탕선 보정을 해야 한다. 예를 들어, 내부용 반사 표준 물질 또는 외부용 반사 표준 물질을 대조 스캔하여 검체의 스펙트럼에서 그 값을 보정한다. 측정시 입자 크기와 수화·용매화 상태를 고려해야 한다.

3) 투과반사

이 방법은 일반적으로 희석 또는 희석되지 않은 액체와 용액 또는 현탁액 상의 고체에 적용할 수 있다. 반사판을 가진 셀에 검체를 담그거나 반사판을 검체뒤에 놓고 측정한다. 반사판은 금속이거나 화학활성이 없는 물질(일례로 산화티타늄)로서 근적외부 영역에서 스펙트럼이 나타나지 않고 검체에 정량범위내의 흡광도를 부여할 수 있어야 한다.

Ⅱ. 밸리데이션을 위한 기준

이 지침은 ICH의 분석법 일반 지침의 내용에 의거하여, 근적외부스펙트럼측정법을 이용할 경우에 고려해야 인자를 특이성, 직선성, 범위, 정확성 및 정밀성을 중심으로 검토하여, 근적외선을 이용한 분석법의 수행에 관한 종합적이고 신뢰성이 높은 정보를 얻을 수 있도록 한 내용이다.

1. 특이성

특이성은 존재할 것으로 예상되는 방해물질이 있음에도 불구하고 분석물질을 선택적으로 분석할 수 있는 능력이다. 일반적으로 정제에는 활성성분 외에도 많은 물질을 함유하고 있다. 예를 들어 암브록솔 정제는 주성분인 암브록솔이 전체 정제의 용량 210 mg에서 30 mg으로 12.5 % 를 차지하고 있지만 나머지 87.5 % 는 암브록솔을 분석하는데 있어 방해물질이 될 수 있다. 이러한 방해물질에는 불순물, 분해물, 수분, 잔류 용매 등과 대부분의 부형제로 되어 있다. 이들의 영향은 주성분 분석과 같은 계량분석을 실시하여 줄일 수 있다. 다음의 몇 가지 방법을 이용하여 특이성을 확인할 수 있다.

첫째, 활성성분과 그 외의 모든 관련된 물질의 스펙트럼을 얻는다. 전처리 하지 않은 원래 스펙트럼을 관찰할 때, 활성성분의 고유파장과 그 외 물질의 피크파장이 겹치지 않는다는 사실을 확인할 수 있다면 가장 손쉽게 활성성분을 분석하는데 특이성을 얻는 방법일 것이다. 그러나 원래 스펙트럼에서 이러한 경향이 관찰되지 않는다면 수학적 전처리나 계량분석적 분해 작업을 실시하여 방해요인을 제거하여 특이성을 얻을 수 있다.

둘째, 타정 전 혼합물이나 파쇄한 정제에 존재 가능한 방해물질들을 첨가함으로써(농도를 증가시키면서) 분석할 때 방해 효과를 확인한다. 즉, 첨가물의 농도에 따라 변이가 나타나는 파장이 활성 성분의 고유 파장과 겹치지 않는지 확인해야 한다.

셋째, 정제의 주성분 함량은 표시량의 95 ~ 105 % 내에 대부분 존재한다. 그러나 농도를 변화시켜 90 %, 100 %, 110 % 와 같은 표시량의 허용범위 밖에 있는 농도를 써서 실제값과 근적외브스펫트럼측정법에 의한 예상값 사이에 선형적인 관계를 얻는다면 특이성을 확인할 수 있는 좋은 방법이 된다.

넷째, 특이성의 가장 신뢰성있는 접근 방법은 물질의 확인 및 정성이다. 물질의 확인은 적절한 알고리즘을 사용하여 실험에 쓸 검체와 생산과정에서 발생하는 변이를 함유하는 라이브러리(library) 검체(분말상)로 측정한 스펙트럼을 비교하는 작업이다. 물질의 정성은 검체의 근적외선 평균 스펙트럼과 라이브러리(library) 스펙트럼을 비교한다. 이러한 과정을 통하여, 플라시보를 선별해 낼 수 있다.

분석을 위해 스펙트럼에 이차미분을 실시하면 여러가지 장점이 있다. 활성 성분과 존재 가능한 방해 물질로 인한 피크간의 차이를 극대화시킬 수 있으며 바탕선 변이도 제거될 뿐만 아니라 피크는 예리해지며 정제의 물리적 형태로 인한 어떤 변이도 제거되어 분해능을 향상시킬 수 있다. 일반적으로, 미분을 하게 되면 신호 대 잡음비는 두배로 낮아지므로, 원래 스펙트럼보다 이차미분한 스펙트럼이 신호 대 잡음비가 4 배나 낮아진다. 그러나 최근 사용되는 기기의 경우는 안정성이 뛰어나므로 이러한 영향이 큰 문제가 되지는 않는다.

검량모델 개발시, 한 개 이상의 파장을 써서 분석하여 활성 성분이외의 다른 성분에 의한 효과를 제거할 수 있다. 이와 같은 예로 사용되는 계량학적 방법이 다중선형회귀분석(Multiple Linear Regression)이 있다. 이에 반하여, 전체 파장 또는 어느 파장 영역에 대한 정보를 모두 사용하는 방법으로는 주성분회귀분석(Principle Component Regression)과 부분최소자승회귀분석(Partial Least Squares Regression)등이 있다.

그러나 주성분이 전체함량의 5 % 미만인 정제를 분석할 때, 분석의 어려움이 예상되는데, 95 % 에 해당하는 방해요인을 최소화하거나 제거시킴으로써 특이성을 향상시킬 수 있는 방법은 더욱 연구되어야 할 사항으로 보인다.

2. 직선성

분석과정의 직선성은 검체에 있는 분석물질의 농도(양)와 직접적으로 비례하는 결과를 얻을 수 있는 능력을 말한다. 근적외부스펙트럼측정법의 검량선 예측 가능한 농도 범위 내에서 선형회귀분석을 실시한다. 일반적으로 액체크로마토그래프법은 0 ∼ 150 % 범위에서 피크 면적비를 계산하여 검량선(Calibration Curve)을 구하지만, 근적외부스펙트럼측정법의 결과는 좀 더 좁은 범위인 90 ∼ 110 % 범위에서 기존 방법에 의한 표준값과 근적외부스펙트럼측정법에 의한 예측값의 두 세트 값의 선형적 관계로 표현한다. 선형 관계는 최소자승법에 의한 회귀선을 계산하는 것과 같은 적절한 통계적인 방법을 사용하여 평가된다. 회귀선의 상관계수, y 절편, 기울기와 잔차의 제곱합과 같은 항목은 검량 데이터를 분석할 때 필수적인 기재사항이다.

3. 범위

범위는 농도의 최대값과 최고값의 간격으로 분석 과정에서 직선성, 정밀도 및 정확도를 측정하는데 썼던 검체의 농도 범위를 말한다.

정제를 비파괴적으로 분석, 검량화(Calibration) 할 검체를 수집하는데 많은 어려움이 있기 때문에 분석 범위는 허용범위의 2배 값으로 설정한다. 예를 들어  정제의 주성분은 정제의 사용기간 동안의 주성분의 분해와 분석방법의 오차를 감안해 표시량의 ± 5 %를 허용하고 있는데 이 경우 주성분의 최소 범위는 표시량의 ± 10 %가 된다. 범위를 넓게 설정하여 표시량의 80 ∼ 120 %가 되도록 정제를 수집한다면 좀 더 정확한 검량을 할 수 있다. 그러나 원료 또는 제제의 정량법인 경우 시험 농도의 80 ∼ 120 %, 함량균일성시험의 경우는 70 ∼ 130 %, 용출시험의 경우는 규격 전 범위의 ± 20 % 임을 감안해 분석 용도에 맞는 범위를 설정하는 것이 좋다.

4. 정확성

분석 과정의 정확성은 기존에 사용하는(정확성이 입증된) 분석법에 의한 분석값과 근적외부스펫트럼측정법에 의해 예상한 값이 유사하다는 것을 표현하는 척도이다. 정확성은 분석법이 규정하는 범위 전역에 걸쳐 입증되어야 한다. 또한 정확성은 정밀성, 직선성, 특이성이 일단 성립이 되어야 예측할 수 있는 항목이다.

정확성은 규정하는 범위에서 최소 9회 측정으로 평가할 수 있는데, 예를 들면, 세가지 농도에 대하여 각 농도 당 3 회씩 반복 조작하여 측정한 결과로 평가한다. 최소 세가지 농도는 평균값과 범위의 최대 최소인 양극값을 선택한다. 정확성은 기지량의 분석대상물을 첨가한 검체의 양을 정량하는 경우, 회수율로 나타내며, 참값이거나 참값으로서 인증 또는 합의된 값과 비교할 경우에는 이들의 값과 측정값의 평균치와의 차이를 신뢰구간에서 비교한다. 근적외부스펙트럼측정법 정량분석에서 정확도는 검증용 검체세트 (Validation set)의 표준예측오차(Standard error of prediction)로 표현한다.

검량용 검체세트(Calibration set)는 배치(Batch)에서 생산되는 활성 성분의 농도를 가진 검체로 구성하고 그 검체의 전체 범위를 포함해야한다. 선택된 검체는 심지어 검량 범위 전역에 걸쳐 정규분포가 아닌 균일한 확률 분포를 가져야한다. 또한 검증용 검체 세트 (Validation set)는 검량용 검체 세트와 동일한 조성의 활성 성분을 가진 검체로 구성되어야한다.

평행성 시험(Parallel test)을 위한 검체 세트는 새로운 독립적인 생산 배치를 사용하여 시간에 따른 분석을 검정한다. 그러므로 검량용 검체 세트와 검증용 검체 세트와는 완전히 독립적인 기준(set)을 사용하여 분석의 정확도를 확인할 수 있다. 이 시험은 검량 모델(Calibration model)을 개발 후 한 달에 한 번씩 독립적인 검체 세트를 사용하여 실시한다.

5. 정밀성

분석과정의 정밀성은 제시된 분석조건에서 같은 검체에 대해 일련의 연속적인 분석으로 얻은 결과간의 유사함을 의미한다. 그 항목으로는 반복성, 실내재현성, 실간재현성이 있다. 정밀도는 균질하고 확실한 검체를 사용하여 시험하는데 만약 이러한 검체를 얻기 힘들다면 인공적으로 제조된 검체나 용액을 써서 시험할 수 있다. 또한, 정밀성은 일련의 측정에 대하여 표준 편차, 변동계수 등으로 표현된다.

반복성은 시험농도의 100 % 에 상당하는 농도에서 검체의 열적인 분해가 없는 한, 단시간 간격에 걸쳐 분석법의 전 조작을 적어도 6회 반복하여 측정하여 상대표준편차값(CV)이 1.0 % 이내로 한다. 검체의 균질성과 표면 균질성은 주성분의 함량이 낮은 경우 특히 더 고려해야 한다. 이 경우 근적외부스펙트럼측정법 투과법이 검체를 투과하는 영역이 반사되는 영역보다 크기 때문에 반사법보다 우수하다. 반면에 투과법은 만약 정제가 두껍고 검출기에 도달하는 빛이 미약하다면 스펙트럼에 더 많은 잡음을 가져올 수 있다.

실내재현성에서 검토가 필요한 대표적인 변동요인은 시험일, 시험자, 장치 등이다. 실간재현성은 실험실간의 공동실험 시 분석법을 표준화할 필요가 있을 때 평가된다. 실간재현성이 표현된다면 실내재현성은 검증될 필요가 없다. 그러나 실간재현성은 거의 얻기가 힘들기 때문에 주로 실내재현성을 측정한다.

Ⅲ. 근적외부스펙트럼측정법 분광분석기의 평가

근적외부스펙트럼측정법 분광분석기 평가의 목적은 기기의 사양과 비교하여 장치가 의도한 용도를 위해 적합한지를 확인하는 것이다. 평가의 과정으로 설계적격성, 설치적격성, 조작적격성, 수행적격성이 있다.

설계적격성(Design Qualification(DQ))

DQ는 장치가 적절히 설계되어 의도한 용도에 따라 작동되는가에 대한 증거를 제시한다. 장치의 여러 가지 영향인자를 시험하여 기기의 사양에 맞는지 확인해야 한다. 최소한 이것이 기기 제조자의 기기 사양에 부합하는지 확인해야 할 것이다.

설치적격성(Installation Qualification(IQ))

IQ는 장치가 고안 및 명시된 사항에 따라 설치되는지 확인한다. 확인 중에 하드웨어의 일련 번호, 소프트웨어의 버전 등을 기록하는 작업이 포함된다. 또한 기기가 설치된 환경이나 시설 등이 적합한지 보고 장치의 조립상태와 전력상태 등을 조사한다.

조작적격성(Operational Qualification(OQ))

OQ는 분광분석기를 선택할 때 썼던 방법 즉 파장의 정확성 및 재현성, 광도계의 직선성 및 잡음 등을 확인하여 다시 한번 기기를 검증한다.

수행적격성(Performance Qualification(PQ))

PQ는 장치가 지속적으로 작동되는지 확인한다. OQ의 항목 중 일부를 적용하여 사용 전 또는 정기적(적어도 6 개월에 한 번씩)으로 장치를 점검할 필요가 있으며 장치의 보수나 램프의 교환 시에도 반드시 실시한다.

Ⅳ. 정량분석

제약산업에서 원료의약품 및 완제의약품을 수차례 실험을 반복하여 의약품의 품질을 관리하고 있다. 그럼에도 불구하고, 기존의 품질관리를 위한 분석법은 주로 파괴적인 방법이기 때문에 생산되어 나오는 모든 의약품을 관리할 수 없고, 그 중 대표 검체만을 관리할 수 밖에 없다는 단점이 있어, 이것은 안전성 문제에 치명적 걸림돌이 될 수도 있다. 최적의 관리 공정을 위해서는 분석공정에서 몇 가지 원칙이 필요하다. 정확도와 정밀도를 갖추어야 하고 검체의 전처리 과정은 없거나 최소화되어야 한다. 또한 다수의 분석 물질을 동시에 분석가능하며, 제조공정 중에 신속한 조절이 가능해야 한다. 근적외부스펙트럼측정법은 이 원칙을 만족시키는 분석법 중 하나이다. 이러한 근적외부스펙트럼측정법은 정제를 비파괴적으로 생산공정 중에 실시간으로 전수검사를 가능하게 한다. 앞으로 여러가지 제형의 정량분석 중에서도 정제의 비파괴적 정량분석에 대한 내용을 중점적으로 언급할 것이며 일반적인 과정은 다음과 같다.

․ 가능성 연구

․ 표준값

․ 검체의 선택

․ 검체의 스펙트럼 측정

․ 정량 모델의 검량

․ 정량 모델의 밸리데이션

․ 모델의 성능 밸리데이션

1. 가능성 연구

가능성 연구는 근적외부스펙트럼측정법으로 원료 또는 생산품의 정량분석이 가능한지 확인하는 작업이다. 분석물질의 사용 농도에서 스펙트럼의 반응을 관찰하는 것이 첫 단계가 될 것이다. 정제의 모든 성분의 스펙트럼을 측정한 다음 원래 스펙트럼(Original Spectrum)을 관찰한 후 각 성분간의 차이가 뚜렷하지 않을 때 이차미분을 실시할 수 있는데, 이 때 미분한 스펙트럼에서 각 성분간의 고유한 피크를 확인한다. 또한 농도가 다른 검체를 측정하였을 때 측정한 이차미분 스펙트럼에서 농도에 따른 스펙트럼의 변이가 나타나는 파장을 확인한다.

가능성 연구는 검량 알고리즘을 선택할 때에도 필요하다. 활성 성분의 주요 피크가 첨가제의 피크들과 겹치지 않을 때에는 다중선형회귀분석법을 쓸 수 있다. 그러나 유의한 간섭이 있다고 판단될 때에는 주성분회귀분석이나 부분최소자승회귀분석법 등이 더 유효하다.

검체 조작이나 측정법 역시 고려해야 한다. 투과법 또는 반사법인지, 광섬유관을 사용하는지, 검체를 반복 측정 시 재현성 있는 결과를 나타내는지, 검체 측정법이 완건성(robustness)이 있는 방법인지 등과 같은 사항을 확인해야 할 것이다.

2. 참조값(Reference Data)

근적외부스펙트럼측정법의 정량법은 참조값과 측정된 스펙트럼 데이터를 비교하는 방법이므로 참조값이 정확하지 않으면 당연히 근적외부스펙트럼측정법으로 예상한 값 또한 정확할 수 없다. 참조값은 실제 표준품의 조제 또는 표준분석법, 즉 기존에 평가 방법으로 쓰이고 있는 분석법 예를 들어, 중량분석법, 크로마토그래피법, 분광분석법 등의 정확성이 입증된 방법을 통해서 구한다. 표준분석법의 직선성, 정확도, 정밀도를 확인해야 한다. 근적외부스펙트럼측정법과 표준분석법은 거의 동시에 실시되어야 환경오차를 줄일 수 있다. 같은 검체에 대하여 표준분석법을 3회 측정하여 표준값을 얻는다.

3. 검체의 선택 - 검량과 밸리데이션 시험기준
(Calibration and Validation Test Sets)

․ 검량용 검체세트(Calibration Test set)

표준값에 대하여 근적외부 스펙트럼 반응을 정량하기 위한 기준이다. 검량용 검체세트가 분석물질의 가능한 농도 범위 전체를 포함하고 부형제의 농도변화에 완건성을 가질 수 있고 분석에 발생될 수 있는 최대한의 변이를 포함할 수 있도록, 검체를 신중히 선택해야 한다. 다른 분석법과 마찬가지로 근적외부스펙트럼측정법도 범위내의 내삽은 가능하지만 외삽은 불가능하다.

․ 밸리데이션용 검체세트(Validation Test Set)

검량모델(calibration model)을 밸리데이션하기 위한 첫 단계라고 할 수 있다. 밸리데이션용 검체세트는 모델을 최적화하는데 쓰고 검량용 검체세트의 전체 농도 범위를 초과해서는 안 된다. 검량용 검체세트에 포함되지 않은 변이를 포함한다면, 정확한 밸리데이션값을 얻을 수 없다.

검량용 검체세트와 밸리데이션용 검체세트의 분할은 다음과 같이 할 수 있다. 동시에 실험하였을 경우, 검량용 검체세트와 밸리데이션용 검체세트는 같은 기계적인 오차와 환경적인 오차를 가진다.

․ 수동 또는 소프트웨어 방법을 이용하여 목적 성분에 대하여 전체 조성이 고르게 분포될 수 있도록 검체세트를 선택한다.

․ 소프트웨어 방법으로 스펙트럼 변이에 근거하여 검체를 선택할 수 있다.

․ 어느 방법을 취하든지, 농도 범위에 따라 고르게 분포되어 질 수 있도록 주의를 기울이는 것이 필요하다. 분포가 고르지 않은 경우는 (예를 들면, 중심부 농도에 검체가 집중되는 경우) 적절한 이유가 설명되어야 한다.

근적외부스펙트럼측정법에서 측정할 수 있는 검체의 크기는 일반적으로 기존의 방법보다 상당히 작다. 이것은 검체 측정 장치 때문이 아니라 근적외선에 의해 조사되는 검체 영역 때문이다. 근적외선은 마이크로 단위질량으로도 비균질성을 감지할 수 있으며 이를 수용하기 위해서는 적절한 측정방법이 필요하다. 함량균일성 실험에서 이 특징은 유용한 장점이 되지만 대부분의 응용에서 큰 면적을 평균화하여 측정한 정보를 필요로 한다. 그러므로 검체의 평균화된 정보를 얻기 위해서는 빛이 조사되는 동안 검체를 이동시키거나 회전시키는 등의 측정 방법이 필요하다.

여러 가지 제형 중 정제는 검체 선택시 생산품을 그대로 쓰는 경우와 활성성분과 부형제의 비가 변화되는 경우 이 두 가지로 나눌 수 있다.

가. 생산품을 그대로 쓰는 경우

첫째, 투과 분석법이 Beer-Lambert의 법칙에 따를 때 적용할 수 있으며 생산품과 조성은 같으나 질량은 다른 정제에도 쓸 수 있다.

둘째, 정상 생산품에서 검체를 수집하고 각각의 정제가 용도에 따른 필요한 농도 범위를 가질 때 적용할 수 있다.

나. 활성성분과 부형제의 비가 변화되는 경우

첫째, 생산품과 농도확장품을 혼합하여 검량용 검체세트를 얻는다. 일반적으로 생산품은 표시량의 95 ∼ 105 % 내에 존재하므로 이 범위를 더 확장해주기 위해서 실험실에서 농도가 확장된 정제를 제조한다. 이 농도확장품은 생산품과 활성성분과의 부형제 비가 다르며 표시량의 90 ∼ 110 % 또는 85 ∼ 115 % 범위를 쓴다.

둘째, 생산품을 파쇄한 후 활성성분과 부형제를 첨가하여 농도를 조절한다. 전체 정제의 용량에 비해 활성 성분의 함량이 적다면 정제의 파쇄물에 활성 성분을 첨가하면 더 좋은 검량 결과를 얻을 수 있다.

셋째, 실험실에서 제조한 검체를 써서 활성 성분의 농도를 변화시킨다. 정제를 파쇄하는 방법과 유사하나 제조 당시부터 활성 성분의 양을 변화시킬 수 있어서 농도 범위가 더 넓다(80 ∼ 120 %).

넷째, 파쇄한 정제에 활성성분 및 부형제를 첨가하여 질량을 변화시킨 후 다시 타정하는 방법이다. 그러나 이 방법은 정제의 총량이 생산품과 다르기 때문에 특이성 시험에 실패할 수도 있다.

다섯째, 존재하는 모든 변동요인을 포함하여 검량 모델을 만드는 방법인 글로벌 검량용 검체세트(Global calibration set)로 생산과정에서 발생하는 모든 변동요인을 포함하여 모델을 개발한다. 크게 4가지 과정으로 구성되는데, 실험실 제조품(활성 성분이 표시량의 ± 15 % 가 되도록 조제), 과립, 정제의 핵정, 코팅된 정제를 검량용 검체세트에 포함시킨다.

4. 검체의 측정

투과법은 희석 또는 비희석 액체나 용액 중의 고체에 적용한다. 투과경로 0.5 ∼ 4 mm 사이의 셀 또는 딥 프로브(Dip-probe)를 쓰며 바탕선 보정이 필요하다. 반면, 반사 및 확산 반사법은 주로 고체에 적용하며 검체를 적절한 장치에 넣고 시험한다. 광섬유관을 쓸 때에는 적절히 검체에 고정시켜 재현성 있는 스펙트럼을 얻도록 한다. 투과법과 마찬가지로 바탕선 보정이 필요하다.

고체입자인 경우 입자크기, 모양, 압축정도와 같은 물리적 차이가 정량분석에 영향을 줄 수 있으므로 되도록 입자가 작고 균일한 모양을 갖도록 조작한다. 또한 검체에 남아 있는 수분과 잔류 용매에 의한 효과를 균일하게 해주기 위해서 일정 시간동안 건조를 시켜 관리함으로써 각 검체의 수분과 잔류 용매조건을 동일하게 한다. 근적외부스펙트럼측정법으로 검체를 측정할 때 수분과 온도에 근적외부스펙트럼이 영향을 많이 받으므로 항상 같은 환경에서 실험할 수 있도록 항온․항습 환경조건을 형성하는 것이 좋다. 또한 검체간에 결정다형이 다르거나 결정형의 정도가 다르다면 이 또한 정량분석에 영향을 줄 수 있으므로 주의해야 한다.

검체의 성질, 형태, 입자의 크기 등에 의해 여러 가지 검체 측정 장치 중에서 적절한 검체 측정법을 선택하여 스펙트럼을 측정하며 측정 방법의 타당성을 입증하기 위하여 측정한 연속 스펙트럼의 정밀성으로 평가한다. 연속 6회 측정시 전체 파장에서의 상대표준편차를 구하고 최대값이 1.0 % 이하일 때 그 측정법을 인정한다.

5. 정량 모델의 검량

정량 모델을 개발하기 위해서는 필요에 따라 먼저 적절한 수학적 전처리를 실시해야 한다. 전처리 과정은 근적외부스펙트럼 데이터를 계량 분석하는데 있어 중요한 단계이다. 전처리는 근적외부스펙트럼 데이터를 수학적으로 처리함으로써 스펙트럼의 모양을 개선하고 또는 검량 모델 개발에 앞서 원치 않는 변동을 제거하는 것으로 정의한다. 데이터 모델링에 앞서 스펙트럼 데이터를 시험하여 적절한 전처리방법을 선택할 수 있다. 즉, 데이터에 여러 가지 전처리를 병행 실시하여 평가하고 그 중에서 최적의 전처리를 선택한다.

다양한 전처리가 존재하는데 그 예로 normalization, smoothing, baseline correction, derivatives, mean centering, variance scaling, auto-scaling 등이 있다.

적절한 전처리를 선택한 후에 여러 가지 정량 알고리즘을 이용하여 근적외선 데이터의 회귀분석을 실시한다. 검량은 분석기기의 반응과 검체의 특성(농도)을 연결시켜 주는 수학적 모델을 구축하는 과정이다. 이전에 언급했던 것처럼 주요한 검량 알고리즘으로 다중선형회귀분석법(MLR), 주성분분석법(PCR), 부분최소자승회귀분석법(PLS) 등이 있다. 예측은 개발된 모델을 써서 미지 검체의 기기 신호로부터 그 검체의 특성을 추정하는 과정이다. 광의로 검량 모델을 개발하는 두 가지 다른 접근법, 즉 단변량 분석법과 다변량 분석법이 있다. 단변량 분석법은 기존의 분석법에서 쓰는 가장 일반적인 방법으로 분석기기의 단일 신호와 단일 성분의 농도를 연결시킨다. 이 방법은 근적외부스펙트럼측정법이 쓰는 일반적인 방법이 아니다. 근적외부스펙트럼측정법에서는 주로 분석기기로부터의 다신호를 검체의 여러 특성과 결부시켜 분석하는 다변량 분석법을 이용하여 검량 모델을 구축하게 된다.

* 정량 모델의 구축시 알고리즘의 선택을 부록 1을 참조한다. 부록 1은 근적외부스펙트럼측정법에서 일반적으로 많이 쓰이는 MLR, PCR, PLS를 중심으로 설명하고자 한다.

6. 정량 모델의 밸리데이션

정량 모델은 내부적 또는 외부적으로 검증하는 방법이 있다. 개발된 모델의 추정 능력에 대한 정보를 얻기 위해서 독립적인 검증용 검체세트를 써서 시험한다. 근적외부스펙트럼의 정확도와 정밀도는 표준분석법의 그것과 비교한다. 또한, 정량 모델의 질을 평가하기 위해서 검량의 표준오차(Standard Error of Calibration)와 예측표준오차(Standard Error of Prediction)를 사용한다. 전통적인 모델 평가인자인 상관계수(Regression Coefficient)도 근적외부스펙트럼측정법에서도 사용하지만 고전적인 단변량 분석법과 같은 중요도를 가지고 있지 않다.

정제를 함량 분석할 때 전체 정제의 질량에 대한 목적 성분의 비(%)를 농도 값으로 한다. 계산한 예측표준오차가 분석성분(mg)의 양을 100으로 환산하였을 때의 상대오차값으로 변환한 값이 기존에 쓰는 분석법의 오차 범위를 초과하지 않을 때 사용이 권장되는 모델이다.

7. 모델의 성능 밸리데이션

단순하게 모델을 평가하는 것이 아니라 산업현장에서 지속적으로 쓰기 위해서는 정기적으로 모델의 성능을 밸리데이션 할 필요가 있다. 모델의 성능 밸리데이션 방법은 체크 검체를 이용하는 방법과 표준분석법으로 얻은 값과 비교하는 방법으로 크게 나누어진다. 먼저 체크 검체를 쓰려면, 체크 검체가 시간에 대해 안정해야 하며 이것을 이용해서 모델의 단기적, 장기적 정확성을 평가할 수 있어야 한다. 다음으로 표준분석법으로 얻은 값과 비교하는 방법은, 근적외부스펙트럼 값과 표준값을 주기적으로 n 개월(n=1, 2, 3 ……), n 배치에서 실시하여 95 % 신뢰구간내에서 쌍체비교한다. 차이가 인정되는 경우는 다시 정량 모델을 보수, 작성하도록 한다.

* 모델의 밸리데이션에 관련하여 부록 2를 참고한다.

* 일상적인 정량분석 및 정량 모델의 유지에 관련하여서는 부록 3을 참고한다.

Ⅴ. 정성분석

근적외부스펙트럼측정법은 물질의 확인과 정성시험에 쓸 수 있다.

․ 확인물질의 화학적 확인이 필요한 경우 쓴다.

․ 정성물질의 화학적 확인을 끝내고 실험할 검체가 물질의 모델에 얼마나 적합한지 측정한다. 이 모델은 그 물질의 여러 변동 정보를 대표하는 검체로부터 개발된 것으로, 수분, 입자 크기, 용매, 다른 화학적 물리적 정보를 포함한다.

확인 및 정성 시험은 모두 라이브러리(Library)내에서 물질사이의 구분을 가능하게 한다. 전형적인 정성적인 근적외부스펙트럼측정법의 응용은 다음과 같은 과정을 포함한다.

․ 가능성 연구

․ 검체의 선택

․ 검체의 측정

․ 라이브러리(Library)의 개발

․ 라이브러리(Library)의 밸리데이션

․ 일상적 용도

․ 라이브러리(Library) 보수와 유지

1. 가능성 연구

모델 개발에 앞서 첫 단계로 가능성 연구를 실시한다. 예를 들어, 최적 검체 측정 방법, 검체의 측정량, 효과적인 분석을 위한 최소 스캔 횟수 등을 들 수 있다. 라이브러리(Library) 검체의 구성과 분자 구조에 대한 선행 지식이 있으면 근적외부스펙트럼측정법으로 분석할 때 유익하다. 또한 분석할 대표 검체의 스펙트럼을 얻었을 때 각 물질의 이차미분 스펙트럼은 다른지 확인한다.

2. 검체의 선택

검체의 선택은 정성분석에 성공하기 위해서 중요한 과정이다. 검체는 라이브러리(Library)를 개발하는 검체세트와 검증을 목적으로 하는 독립적인 세트가 필요하다. 라이브러리(Library)를 개발하고 평가하는 모든 검체는 일정 수준으로 인증되어야 한다. 검체의 인증 수위는 용도에 따라 달라지며 데이터베이스는 물질의 다양한 변동을 포함하는 검체로 구성된다.

각각 다른 배치의 검체는 일정기간 동안 구성성분, 공급자, 공정, 저장상태의 변화를 반영하여 수집한다. 만약 저장기간 동안 화학적․물리적 안정성이 입증된 검체라면 저장 상태에 관계없이 검체를 수집해도 좋다.

수집해야하는 배치의 개수는 분석의 복잡성에 의존하며 분석될 물질은 시스템의 전형적인 변동을 포함하고 있어야 한다. 또한 물질의 확인 시험에 필요한 배치 개수보다 물질의 정성시험에 필요한 개수가 더 많다. 검체를 근적외부스펙트럼측정법으로 측정하는 장치는(컵, 바이얼, 광섬유관, 주문제작용 장치) 많은 종류가 있다. 장치의 선택은 전적으로 사용자의 필요에 달려 있고 장치의 밸리데이션은 설계적격성 단계에서 규정한다. 검체의 측정 장치는 측정동안 잠재적인 변동의 근원이 되므로 가능한 지속적이고 재현성을 밸리데이션할 수 있어야 한다.

3. 검체의 측정

투과법은 희석 또는 비희석 액체나 용액 중의 고체에 적용한다. 투과경로 0.5 ∼ 4 mm 사이의 셀 또는 딥 프로브 (dip-probe)를 쓰며 바탕선 보정이 필요하다. 반면 반사 및 확산 반사법은 주로 고체에 적용하며 검체를 적절한 장치에 넣고 시험한다. 광섬유관을 쓸 때에는 적절히 검체에 고정시켜 재현성있는 스펙트럼을 얻도록 한다. 투과법과 마찬가지로 바탕선 보정이 필요하다.

고체입자인 경우 입자크기, 모양, 압축정도와 같은 물리적 차이가 정량분석에 영향을 줄 수 있으므로 되도록 입자가 작고 균일한 모양을 갖도록 조작한다. 또한, 검체에 남아 있는 수분과 잔류 용매에 의한 효과를 균일하게 해주기 위해서 일정 시간동안 건조하여 관리함으로써 각 검체의 수분과 잔류 용매조건을 동일하게 한다. 근적외부스펙트럼측정법으로 검체를 측정할 때 수분과 온도에 근적외선 스펙트럼이 영향을 많이 받으므로 항상 같은 환경에서 실험할 수 있도록 항온․항습 환경조건을 형성하는 것이 좋다. 또한, 검체간에 결정형태가 다르거나 결정형의 정도가 다르다면 이 또한 정량분석에 영향을 줄 수 있으므로 주의해야 한다.

검체의 성질, 형태, 입자의 크기 등에 의해 여러 가지 검체 측정 장치 중에서 적절한 검체 측정법을 선택하여 스펙트럼을 측정하며 측정 방법의 타당성을 입증하기 위하여 측정한 연속 스펙트럼의 정밀성으로 평가한다. 연속 6 회 측정시 전체 파장에서의 상대표준편차를 구하고 최대값이 1.0 % 이하일 때 그 측정법을 인정한다.

4. 라이브러리(Library)의 개발

라이브러리(Library)를 개발하기 위해서는 다음과 같은 과정을 거친다.

․ 라이브러리(Library)를 개발하는 목적을 규정

․ 라이브러리(Library) 개발용 검체세트의 선택

․ 데이터의 표시

․ 라이브러리(Library) 검증용 검체세트의 선택

․ 데이터 전처리/변환

․ 라이브러리(Library) 구성

․ 역치의 설정

가. 라이브러리(Library)를 개발하는 목적을 규정

라이브러리(Library) 개발에 앞서 의도한 용도에 따라 라이브러리(Library)의 유효범위를 규정하는 일은 중요하다. 이 작업은 물질의 확인 및 정성에도 해당되는 과정으로 분석할 그룹의 화학적 유사성과 그룹의 개수 등을 확인해야하는 작업도 포함된다.

나. 라이브러리(Library) 개발용 세트 선택

라이브러리(Library) 개발에 있어 다음과 같은 인자 때문에 발생하는 변동을 고려해야 한다. 정성시험의 라이브러리(Library)를 위해 특히 중요한 인자는 다음과 같다.

․ 수분(Moisture)

․ 입자크기(Particle size)

․ 잔류 용매(Residual solvents)

․ 분해물(Degradation products)

․ 제조물의 구성 변화(Compositional change of formulated product)

․ 기타 화학적/물리적 변화(Other chemical/physical properties)

․ 시간(Time)

․ 대체물(Alternative sources of material)

․ 보관검체(Retained samples)

․ 온도(Temperature)

․ 작동자(Operator)

․ 측정(Presentation, e.g. 관 삽입)

․ 기기간 변동(Between-instrument variation)

․ 기타(Others)

이 같은 인자들과 고려 범위는 의도한 용도와 필요한 구분 능력정도에 따라 달라진다.

다. 데이터의 표시

이 작업은 가시적으로 스펙트럼이 이상하게 나타나는 검체를 체크하고 예외(outlier)를 확인한다는 점에서 중요한 과정이다. 가능한 한 예외(outlier)는 반드시 조사해야하며 타당한 분석상의 이유가 있으면 제거할 수 있고, 그런 경우는 명확한 이유가 반드시 기술되어야 한다.

라. 라이브러리(Library) 밸리데이션용 검체세트의 선택

분석할 때 큰 집단에서 대표 검체를 선택해야 할 상황이 있다. 간단한 상황에서 눈대중으로 선택할 수 있지만, 좀 더 복잡한 상황에서는 검체를 선택하는 도구를 써서 물질의 그룹을 결정한 다음 선택해야 한다(예를 들어, 활성성분 분석 또는 군집 분석 등).

각 물질 그룹마다 필요한 검체 개수는 정성 알고리즘과 시스템의 상태(얼마나 정확하게 그룹의 경계를 설정해야 하는지)에 따라 다르다.

마. 데이터 전처리/변환

스펙트럼을 좀 더 단순하게 만들기 위해서 데이터를 수학적으로 전처리 해야 할 필요가 있다. 예를 들어 미분과 분산 보정 알고리즘은 물리적 특성 차로 인한 바탕선을 제거해 준다. 원래 스펙트럼은 물리적인 형태에서 기인하는 정보가 유용할 경우에 쓴다.

주의할 점은 스펙트럼을 수학적으로 변환하면 인공적인 산물이 될 수 있으며 또한 중요한 정보를 상실할 수 있다. 데이터 전처리 및 변환의 알고리즘 바르게 이해하여 변환을 실시할 때마다 이론적 근거를 제시할 수 있어야 한다.

바. 라이브러리(Library) 구축

라이브러리(Library) 구조는 소프트웨어의 한계와 사용자의 필요에 따라 달라진다. 가장 간단한 경우 모든 물질이 하나의 라이브러리(Library)로 통합될 수도 있다. 반면 필요한 특이성 수준을 확보하기 위해 하위라이브러리(sub-library)로 분할할 수 도 있다.

주요 라이브러리(Library)에서 모든 물질 그룹은 수학적 변환 과정이 동일하다. 변환은 각 하위라이브러리(sub-library) 내에서는 동일하지만 서로 다를 수 도 있다. 일례로,  부형제 라이브러리(Library)로부터 물질을 유당으로 확인한 다음 유당의 등급을 결정하는 경우가 그러하다. 파장 범위는 전체 또는 축소된 파장 범위를 쓸 수 있다. 특정 측정장치를 쓰거나 불필요한 파장 정보를 제거할 경우(Dynamic Range를 초과하는 범위나 잡음이 많은 범위) 파장 범위를 축소시킬 수 있다. 파장을 분할하여 분석하는 방법은 원치 않는 효과를 제거하거나 작지만 중요한 차이를 부각시킬 때 유용하다.

다른 분석 기술과 마찬가지로 근적외부스펙트럼측정법은 모든 물질 그룹들, 특히 인접한 유사 그룹들을 구분할 수는 없다. 이러한 경우에 두 그룹을 하나로 통일하거나 특이적으로 물질을 확인 및 정성과정을 실시할 수 있는 다른 조절 방법을 써야 한다.

Correlation, Soft Independent Modeling Class Analogy, Mahalanobis distance, SMV 등과 같은 많은 알고리즘이 존재한다. 라이브러리(Library)의 유효범위를 고려하여 사용자가 적절한 알고리즘을 선택한다. 그러나 물질의 구분이 용이할 때 가장 간단하게 쓸 수 있는 알고리즘이 추천된다. 예를 들어, 물질의 확인만을 목적으로 할 때 물리적인 인자는 고려할 필요가 없으므로 이차미분을 한 다음, 알고리즘으로 파장 상관법을 선택할 수 있다.

사. 역치의 설정

내부적 밸리데이션(Internal Validation)은 소프트웨어 자체로 설정된 값이나 제조자의 추천값에 의해 실시된다. 라이브러리(Library)의 역치값은 라이브러리(Library)를 내부적으로 검증하거나 외부적으로 검체를 평가할 때 수정될 수 있다.

5. 라이브러리(Library)의 밸리데이션

분석과정의 밸리데이션의 목적은 분석이 의도한 목적을 위해 적합한지 확인하는 것이다. 이 목적에 따라 필요한 밸리데이션에 영향을 주는 인자를 결정해야 한다.

가. 내부적 밸리데이션

어떠한 스펙트럼 데이터베이스 구축과정에서도 라이브러리(Library)의 수행능력이 평가되어야 한다. 이것은 라이브러리(Library)를 구성하는 검체(이 검체들이 서로 구분 가능한지 확인)를 기반으로 한다. 내부적 밸리데이션은 소프트웨어에 의해 실시되며 정확한 과정은 소프트웨어에 따라 다르지만 기본적인 과정은 다음과 같다.

․ 라이브러리(Library) 개발에 쓰인 스펙트럼을 적절한 방법으로(correlation 또는 distance) 밸리데이션 한다.

․ 라이브러리(Library) 내에 있는 물질의 분포가 서로 겹치지 않는지 확인한다.

․ 라이브러리(Library) 구축 시에 교차밸리데이션(cross-validation)을 쓴다.

나. 외부적 밸리데이션

내부적 밸리데이션이 성공한 후에, 데이터베이스 개발에 쓰지 않은 인증된 검체를 사용하여 데이터베이스의 수행능력을 밸리데이션 한다.

재현성  물질을 확인할 때 일반적으로 적용하는 방법은 아니다. 정성시험을 위한 재현성 시험은 라이브러리(Library)내에 포함되는 물질과 그렇지 않은 물질을 역치를 써서 신뢰성 있게 구분할 수 있어야 한다.

완건성  이 카테고리는 응용 및 표본선정 기술에 의존하며 분석에서 정상적인 작동 상태에서의 미묘한 변화에 의한 영향을 시험한다. 실험 설계법을 쓰면 필요한 분석물질의 정보의 효과를 최대화시킬 수 있다. 고려해야 할 사항은 다음과 같다.

․ 분석에서 환경 조건(온도, 습도)에 의한 영향

․ 분석에서 검체의 온도에 의한 효과

․ 검체의 측정 위치

․ 프로브의 깊이와 물질의 압착/충전 정도

․ 다른 검체 측정 장치에 의한 효과

․ 기기 부품 교체(lamp)에 의한 효과

․ 전처리 효과와 라이브러리(Library) 개발 알고리즘 파라미터(미분 gap/segment, 거리 역치 등)

6. 일상적 용도

시스템을 평가할 때에는 필요한 기능만 이용 가능하도록 조절한다. 예를 들어, 근적외부스팩트럼 시스템 관리자나 라이브러리(Library) 개발 전문가는 소프트웨어를 완전히 평가해야 하지만 일상적인 용도의 사용자는 일상적인 물질의 확인에 대한 수행능력만을 평가하면 된다.

스펙트럼의 확인 라이브러리(Library)를 개발하는 측면에서 그 목적은 물질내의 고유 변이의 상당 부분을 포함하도록 한다. 그러나 때때로 이러한 변이가 라이브러리(Library) 개발용 검체세트에서 포함되지 않을 경우가 있다. 예를 들어 시험 물질이 라이브러리(Library) 중의 한 모델의 경계선밖에 있다고 분석되었을 때 근적외부스펙트럼 모델에 대해서 ‘근적외부스펙트럼 부적합’이라고 표현한다. 이 경우에 시험물질이 모델 내에 있다고 판정하거나 이 스펙트럼을 라이브러리(Library)에 포함시키기 전에 적절한 대체 시험을 실시하여 물질을 다시 정확히 인증한다.

* 정성분석시 라이브러리(Library)의 구축에 관련하여 부록 4를 참고한다.

7. 라이브러리(Library)의 보수 및 유지

가. 기존 물질의 제거

정상적인 상태에서는 물질을 라이브러리(Library)에서 제거하는 작업은  일반적으로 추천하지 않는다. 그러나 검체의 선택이 잘못된 것이 입증되는 경우에는 라이브러리(Library)에서 제거할 수 있고, 그런 경우 라이브러리(Library)는 재평가되어야 한다.

나. 새로운 물질의 첨가

라이브러리(Library)에 새로운 물질을 추가하기 위해서는 물질의 검체세트는 검체의 선택항목에 세부적으로 부합하도록 선택한다. 이 라이브러리(Library)는 계속적으로 특이성을 밸리데이션하기 위해서 재평가되어야 한다.

다. 라이브러리(Library) 그룹의 수정

때때로 다음과 같은 경우에 검체세트를 수정해야할 필요가 있다.

․ 물질의 물리적 성질상의 변화

․ 공급 출처상의 변화

․ 좀 더 넓은 범위를 포함

각 경우에 새로운 검체를 모델 내에 포함시키기 전에 근적외부스펙트럼 외에 다른 방법으로 인증한다. 검체를 포함한 경우, 라이브러리(Library)는 검체 선택 항목에 따라 수정한 후 계속적으로 특이성을 밸리데이션하기 위해서 재평가한다

* 정성분석시 라이브러리(Library)의 적용에 문제가 있을 경우 부록 5를 참고한다.

Ⅵ. 용어 설명

검량(Calibration)

정량 모델을 작성하는 과정

예측(Prediction)

작성된 정량 모델을 이용하여 미지의 검체에 적용하여 농도를 구하는 과정

검량용 검체 세트(Calibration set)

정량 모델을 작성하는 쓰이는 검체군

밸리데이션용 검체 세트(Validation test set, Validation set)

정량 모델을 밸리데이션하는 쓰이는 검체군,

Multiplicative Scatter Correction

검체의 입자 크기 같은 물리적 특성에 의해 나타나는 스펙트럼의 바탕선의 변이를 보정하는 수학적 전처리 중의 한가지 방법

다중선형회귀분석법(Multiple Linear Regression(MLR))

두 개 이상의 파장의 흡광도를 이용하여 정량 모델을 작성

주성분회귀분석(Principal Component Analysis )

주성분 분석, Factor analysis를 이용한 다변량 분석의 한 종류

부분최소자승회기분석(Partial Least Squares Regression)

주성분 분석에 검체의 농도 정보까지 포함한 다변량 분석의 한 종류

Soft Independent Modelling by Class Analogy (SIMCA)

패턴인식법의 한 종류로 검체의 확인 및 정성분석에 쓰는 알고리즘

NIST SRM

National Institute of Standards and Technology Standard Reference Material

부 록

부록1. 정량 모델 구축시 알고리즘의 선택

부록2. 정량 모델의 밸리데이션 및 평가

부록3. 일상 정량분석 과정 및 정량 모델의 보수, 유지

부록4. 정성분석에 필요한 라이브러리(library)의 구축

부록5. 정성분석시 라이브러리(library)의 적용 실패시

등전점 전기영동법

머 리 말

등전점 전기영동법은 단백질의 등전점의 차이를 이용하여 분리하는 전기영동법이다. 분리는 양성전해질(ampholyte)의 혼합물을 함유하는 폴리아크릴아미드 혹은 한천평판겔을 써서한다. 이와 같은 겔에 전압을 걸면 암포라이트가 겔 내를 이동하여 pH 기울기가 형성된다. 겔의 조제시에 겔 자체에 약산 혹은 약염기의 해리기를 도입한 고정화 pH 기울기를 가진 겔을 쓰는 경우도 있다. 첨가한 단백질이 그 등전점과 같은 pH의 겔의 위치까지 영동되면 단백질의 상대전하가 중화되어 이동이 멎는다. 혼합하는 암포라이트를 선택함으로서 여러 범위의 pH 기울기를 만들 수 있다.

이    론

단백질은 전장이 걸려진 겔 내의 등전점의 위치에서는 실효하전이 0으로 되어 이동도가 영으로 되는데 확산작용에 의한 이동은 인정된다. 단백질은 통전으로 형성된 pH 기울기의 각각의 등전점 위치에서 이동이 정지하고 거기에 농축된다. 이 농축효과를 집속(focusing) 이라고 한다. 전압을 걸어서 발생하는 열을 방산시켜야 하기 때문에 거는 전압에는 제한이 있지만 검체량을 적게하여 고전압에서 분석하면 단백질의 분리도를 향상시킬 수 있다. 얇은 겔이나 자동온도조절 순환장치를 이용한 냉각판을 쓰면 겔의 발열을 막고 구분이 분명한 집속이 가능해진다. 분리도 R은 인접하는 두 개의 밴드를 분리하는데에 필요한 최소 pI 차(ΔpI)를 측정하여 산출된다.

식 중 D는 단백질 고유의 확산계수, dpH/dx는 pH 기울기, E는 전계강도(V/cm), -dμ/dpH는 단백질의 pH 이동도 곡선상의 pI와 같은 pH에서의 기울어짐이다. D 및 -dμ/dpH는 단백질 고유의 값이며 변화시킬 수는 없지만 R은 보다 좁은 pH 범위를 써서 전계강도를 크게 하여 분리를 보다 잘 할 수가 있다. 암포라이트 운반체를 써서 제작된 등전점겔에 의한 단백질의 분리는 대단히 양호한 결과를 얻는다. 겔 자체에 암포라이트 운반체와 마찬가지의 해리기를 도입한 고정화 pH 기울기를 써서 분리도를 향상시킬 수가 있다. 암포라이트 운반체를 써서 만든 등전점겔에서는 0.02 pH 단위 이상 다른 등전점을 갖는 단백질을 분리할 수 있는데 고정화 pH 기울기를 쓴 겔에서는 약 0.001 pH 단위이상 다른 등전점을 가진 단백질을 분리할 수 있다.

조    작

검체의 특성 그리고 그 조제는 특히 주의를 하여야한다. 필요에 따라 투석 혹은 겔여과법으로 검체를 탈 이온수 내지는 2 % 암포라이트를 함유하는 용액으로 조제하는 것이 바람직하다.

폴리아크릴아미드 평판겔로 집속이 완료되는데 요하는 시간은 색소단백질(예를 들면 헤모글로빈)을 겔 표면에 각각 다른 위치에 첨가하고 전압을 걸면 확인할 수 있다. 즉 다른 위치에 첨가한 색소단백질의 밴드 위치가 동일하게 된 시점에서 집속이 완료한 것이 확인된다. 프로토콜(protocol)에 따라서는 집속의 완료를 영동개시 후의 경과시간으로 정할 수가 있다. 적절하게 조제된 표준품 또는 IEF(isoelectric focusing)용 마커(marker) 단백질과 영동패턴을 비교하여 등전점 전기영동을 목적단백질의 확인시험에 쓸 수 있다. 또한 표준품의 영동밴드와의 농담(濃淡)을 비교하여 한도시험으로 등전점전기영동을 쓸 수도 있다. 더욱이 덴시도미터를 써서 밴드의 농담을 측정하여 정량법으로도 사용이 가능하며 혹은 마찬가지 조작으로 목적단백질의 밴드에 함유되는 단백질의 상대량을 측정하는 것도 가능하다.

장    치

장치의 구성은 아래와 같다.

정전압 정전류 정전력 전원장치. 2500 V의 전압을 공급할 수 있는 것이 범용되고 있으며 이와같은 전원장치가 조작상 최적으로 생각된다. 또 30 W이상의 출력을 가지는 장치가 바람직하다.

적당한 재료로 된 겔지지용 냉각판이 있는 플라스틱제 등전점전기영동장치. 백금전극이 달린 플라스틱제 커버. 각 전극은 각기양극액 및 음극액에 담근 적당한 폭, 길이 및 두께의 종이심지로 겔과 접속된다.

폴리아크릴아미드겔 등전점전기영동법 : 상세한 조작

이하는 폴리아크릴아미드 평판겔을 사용하는 등전점 전기영동법을 상세하게 설명한 것이며 의약품 각조에 특히 규정이 없는 한 이 법을 쓴다.

평판겔의 조제법

형틀  형틀(그림참조)은 유리판(A), 겔의 취급을 용이하게 하기위한 폴리에스텔필름(B), 1개 이상의 spacer(C), 유리판(D) 및 이들을 고정시키기 위한 클램프(clamp)로 되어있다.

7.5% 폴리아크릴아미드겔  아크릴아미드 29.1 g 및 N,N'-메틸렌비스아크릴아미드 0.9 g을 물 100 mL에 녹인다. 이 액 2.5 용량에 의약품 각조에 규정된 암포라이트 혼합액을 넣고 물로 10 용량으로 한다. 이 액을 주의깊게 혼화한 후 탈기한다.

형틀의 조립  제일 밑의 유리판에 폴리에스텔 필름을 올려놓고 스페이서(spacer)를 놓고 2장 째의 유리판을 그 위에 놓고 이것을 클램프로 고정한다. 앞에서 조제한 7.5 % 폴리아크릴아미드겔을 magnetic stirrer로 교관혼합하면서 10 % 페르옥소이황산암모늄용액 0.25 용량 및 N,N,N',N'-테트라메틸에틸렌디아민 0.25 용량을 가하여 이 액을 바로 형틀의 유리판 사이의 격간에 흘려 넣는다.

방    법

형틀을 빼고 냉각한 지지판을 적당한 액체 2 ∼ 3mL로 적시고 그 위에 기포가 생기지 않도록 주의하면서 폴리에스테르필름 위에 중합시킨 겔 옮긴다. 의약품 각조에 규정된 것과 같이 검체용액 및 표준용액을 조제한다. 약 10mm × 5mm의 검체 첨부용의 종이편(복수)을 겔 판 위에 놓고 각 종이편에 시험하는 검체의 규정량을 배어들게한다. 또 등전점을 알고 있는 단백질용액의 규정량을 pH 마커로서 겔 위에 놓는다. 프로토콜에 따라서는 종이편 대신에 검체액을 첨부하는 틈이 있는 겔 판을 사용한다. 겔 폭에 닿는 길이로 자른 2 장의 여과지를 각각의 전극액(양극액은 산성, 음극액은 알칼리성)에 담근다. 양극액 및 음극액의 각각의 조성은 의약품 각조에 규정된다. 이들 종이심지를 겔의 양단에 끝에서 수 밀리미터 겹쳐지게 놓는다. 양전극이 각 종이심지에 접촉하도록 커버를 한다. 의약품 각조에 규정된 전기영동조건에 따라 영동을 시작한다. 표준단백질 혼합물의 영동이 끝난 시점에서 전류를 끊고 핀셋으로 검체첨가용 종이편과 양 전극종이심지를 제거하고 겔 평판을 “폴리아크릴아미드겔 등전점전기영동용 고정액”에 담근다. 실온에서 30분간 조용히 휘저어 섞은 후 고정액을 제거하고 “탈색액” 200 mL를 가하여 1시간 휘저어 섞는다(1시간 정도 교반한다). 탈색액을 버리고 “쿠마시 염색액”을 가하여 30 분간 방치한다. 다음에 “탈색액”에 담그어 투명한 배경에서 밴드가 보이게 될 때까지 겔을 탈색한다. 의약품각조에 기재되어 있는 염색패턴의 밴드의 위치 및 농도를 조사한다.

이 시험법의 세부의 변경(검증이 필요한 항목)

이 법을 준용하여 시험법 혹은 조작법을 변경하는 경우에는 적절한 검증이 필요하다. 변경은 다음과 같은 경우가 포함된다.

(1) 시판평판겔, 염색 및 탈색액의 키트(kit) 사용

(2) 고정 pH 기울기 겔의 사용

(3) disk 겔의 사용

(4) 여러 크기의 초박층(0.2 mm) 평판겔 카세트의 사용

(5) 다른 샘플량 또는 종이 이외의 샘플 첨가수단을 포함하는 샘플 첨가조작법의 변경

(6) 겔의 치수나 장치에 의존하는 전류, 전압 등의 변경이나 밴드의 이동도로 판단하는 것이 아니고 정해진 영동시간의 분리 등 여러 영동조건의 이용

(7) 예비집속(prefocusing) 단계의 짜넣기

(8) 자동장치의 사용

(9) 한천겔의 사용

등전점 전기영동 조작법의 검증

이 법과 다른 방법을 채용하는 경우에는 그 검증을 할 필요가 있다. 다음의 판단기준으로 분리능을 평가할 수 있다.

(1) 예를 들면 등전점을 알고 있는 착색 pH 마커(marker)를 쓰는 경우에는 목적으로하는 안정한 pH 기울기가 형성되어있는지 여부의 평가

(2) 피험물질의 표준물질의 영동패턴과 피험물질의 전기영동 패턴과의 비교

(3) 의약품 각조에 기술된 것 이외의 평가기준

이 법의 규정의 변경

특정한 물질의 분석에 필요한 이 법의 변경은 의약품 각조에 상세하게 규정할 수가 있다. 여기에는 다음의 것이 포함된다.

(1) 영동겔 중에 요소의 첨가(3 mol/L의 농도가 단백질을 가용화 시켜두는 데에 필요한 양으로 가끔 사용되는데 8 mol/L 까지 사용할 수도 있다.) : 등전점에서 침전이 생기는 단백질이 있는 경우에는 침전을 일으키지 않도록 겔의 조성에 요소를 가한다. 요소를 사용할 필요가 있는 경우에는 단백질의 카르바밀화를 방지하기 위하여 쓸 때 조제한 용액을 써야한다.

(2) 다른 염색법의 이용

(3) 단백질의 응집이나 침전을 방지하기 위하여 비이온성의 계면활성제(예를 들면 옥틸글루코시드)나 양친매성의 계면활성제(예를 들면 3-[(3- cholamido propyl)dimethylammonio]-1-propanesulfonate (CHAPS) 나 3-[(3-cholamidopropyl)dimethyl ammonio]-2-hydroxy-1-propanesulfate (CHAPSO))를 첨가한 겔의 사용이나 검체에 암포라이트를 첨가하는 것

주    의

검체는 겔의 어느 장소에도 첨가할 수 있는데 극단적인 pH환경에 검체를 노출시키는 일이 없도록 전극부근에 검체를 첨가하는 것은 피해야한다. 시험법을 개발하는 경우에, 피험검체를 겔의 3개의 포인트(중심과 양단)에 첨가할 수 있는데 양단에 첨가한 단백질의 영동패턴은 동일하게는 되지 않는 일도 일어날 수 있다.

집속을 장시간하면 pH 기울기가 무너져서 「pH 드리프트(drift) (음극류)」라고 하는 현상이 일어날 가능성이 있다. 그 메커니즘은 완전하게 해명되어있는 것은 아니지만 전기적 삼투압과 이산화탄소의 흡수가 음극류를 일으키는 요인으로 생각되고 있다. pH 드리프트는 겔의 음극측에서 집속한 단백질이 밖으로 영동되어버리는 현상이다. 고정화 pH 기울기를 사용함으로서 문제를 해결할 수 있다.

영동 중에는 겔을 받치는 겔 지지판을 충분히 냉각(약 4 ℃)하는 것이 중요하다. 전기영동 중에 높은 전장을 걸면 발열하는 일이 있어 겔의 집속에도 영향을 준다.

시약·시액

폴리아크릴아미드겔 등전점 전기영동용 고정액  5-설포살리실산이수화물 35 g 및 트리클로로아세트산 100 g 에 물을 가하여 녹이고 1000 mL로 한다.

쿠마시 염색시액  쿠마시브릴리안트 블루 R-250  125 mg을 물·메탄올·아세트산무수물 혼합액(5 : 4 : 1) 100 mL에 녹이고 여과한다.

탈색액  물·메탄올·아세트산무수물 혼합액(5 : 4 : 1)

모세관 전기영동법

모세관 전기영동법은 모세관내의 전해질액 중에 존재하는 하전검체가 직류전장의 영향아래서 이동하는 것을 바탕으로 하는 물리적인 분석법이다.

전장 E에서의 이동속도는 검체의 전기영동이동도와 모세관내의 완충액의 전기침투이동도에 따라 정해진다. 전기영동이동도 μep는 검체의 특성(전하, 분자의 크기와 모양)과 완충액의 특성(전해액의 종류와 이온강도, pH, 점성 및 첨가제)에 의존한다. 구형을 상정한 물질의 전기영동속도 νep 는 다음 식으로 주어진다.

q : 입자의 유효전하

: 완충액의 점도

r : 용질 이온의 Stockes 반지름

V : 전압

L : 모세관의 전 길이

완충액으로 채워진 모세관에 전압을 인가(印加)하면 전기침투류라고 하는 용매의 흐름이 모세관내에 발생한다. 전기침투류의 속도는 모세관내벽의 전하밀도 및 완충액의 특성에 의존하는 전기침투이동도 μeo로 정해진다. 전기침투속도는 다음 식으로 주어진다.

ε : 완충액의 유전율

: 모세관 내벽의 제타전위

검체의 이동속도(ν)는 다음 식으로 주어진다.

검체의 전기영동이동도와 전기침투이동도는 검체의 전하에 의하여 같은 방향 혹은 반대방향으로 움직인다. 보통의 모세관 전기영동법에서는 음이온은 전기침투류와 역방향으로 영동되어 이동속도는 전기침투류보다 늦다. 양이온은 전기침투류와 같은 방향으로 영동되어 이동속도는 전기침투류보다 빠르다. 검체이온의 전기영동속도에 비하여 빠른 전기침투류가 존재하는 조건에서는 양이온, 음이온의 양자를 동시에 분석가능하다.

모세관의 검체도입말단에서 검출부까지의 거리(유효길이, )를 검체가 이동하는 데에 걸리는 시간(t)은 다음 식으로 주어진다.

보통 내면을 처리하지 않은 용융 실리카 모세관은 pH 3 이상에서 내벽에 존재하는 시라놀기가 해리하여 부전하를 띈다. 따라서 양극 측에서 음극 측으로 향하는 전기침투류가 발생한다. 검체의 이동속도에 있어서 높은 재현성을 얻기 위해서 전기침투류를 일정하게 유지할 필요가 있다. 분석의 목적에 따라서는 모세관의 내벽을 수식하거나 완충액의 농도, 조성 및 pH를 변화시킴으로서 전기침투류를 억제할 필요가 있는 경우가 있다. 검체도입 후 각 검체성분 이온은 각각의 구역(zone)으로서 전기영동이동도에 따라 전해질 내를 이동한다. 구역의 분산 즉 각각의 검체 밴드의 퍼짐은 여러 현상에 의하여 일어난다. 이상적인 조건에서는 검체 구역의 퍼짐에 대한 유일의 원인은 모세관에 따르는 방향으로 검체성분의 분자확산(축방향 확산)이다. 이상적인 경우의 구역의 분리효율은 이론단수(N)로 다음 식으로 나타난다.

D : 완충액 중에서의 검체의 분자확산

실제로는 열방산, 모세관벽으로의 검체흡착, 검체와 완충액간의 전도율의 불균일성, 검체 플라그(층)의 길이, 검출셀의 크기, 영동액조의 수위차등도 구역의 퍼짐의 원인이 될 수 있다.

2개의 밴드간의 분리(분리도 RS로 표시함)는 검체의 전기영동이동도, 모세관내에 발생하는 전기침투이동도를 변경하여 각 검체 이온의 구역의 분리 효율을 향상시킴으로서 달성할 수 있다.

및  : 분리한 2 종류의 검체이온의 전기영동 이동도

: 2 종류의 검체이온의 전기영동 이동도의 평균

장    치

모세관 정기영동장치는 다음과 같이 구성된다.

(1) 전압가변고전압전원

(2) 규정의 양극액 및 음극액을 넣고 같은 수위로 유지되는 2개의 영동액조

(3) 영동액조에 담겨지고 전원에 접속된 1쌍의 전극(음극과 양극)

(4) 광학검출용창이 있는 분리용모세관(보통 용융석영제). 모세관의 양단은 영동액중에 놓는다. 이 모세관은 각조에서 규정하는 용액으로 채워진다.

(5) 적절한 검체도입시스템

(6) 정해진 시간에 모세관의 검출부를 통과하는 목적물질의 양을 모니터 할 수 있는 검출기, 보통은 자외가시부흡광도측정법 혹은 형광광도법으로 하는데, 분리목적에 따라서는 전도도측정, 전류측정 혹은 질량분석에 의한 검출도 유용하다. 자외흡수 또는 형광성이 없는 화합물에는 간접적인 검출법을 쓴다.

(7) 재현성이 좋은 분리를 얻을 수 있도록 모세관내의 온도를 일정하게 유지할 수 있는 온도조절 시스템이 권장되고 있다.

(8) 기록계 및 적절한 적분기 또는 컴퓨터
주입조작과 그 자동화는 정확한 정량분석을 하는 데에 중요하다. 주입방법은 낙차법, 가압법 또는 흡인법 및 전기적 도입법이 있다. 전기적으로 도입되는 각 검체성분의 양은 각각의 전기영동이동도에 의존하며 이 검체도입법의 채택여부를 결정하는 요소로 된다.

각조에 규정된 모세관, 영동액, 모세관의 분석전처리법, 검체용액 및 분석조건을 쓴다. 분석 중에 검출을 방해하거나 기포가 발생하여 통전이 차단되는 것을 방지하기 위해 영동액은 여과 및 탈기를 한다. 영동시간은 높은 재현성을 얻기 위해서는 각 분석법에서 엄밀한 모세관의 세정수순을 설정해 두어야한다.

1. 모세관구역(Capillary Zone) 전기영동법

모세관구역 전기영동법에서는 대류를 방해하는 지지체를 함유하지 않은 완충액만을 채운 모세관내에서 검체를 분리한다. 이 방법에서는 검체중의 각 성분이 서로 다른 속도로 불연속의 밴드로서 이동하므로 분리가 일어난다. 각 밴드의 이동속도는 모세관내에서의 용질의 전기영동이동도와 전기침투류에 의존한다. 실리카표면에 흡착하기 쉬운 물질의 분리능을 높이기 위하여 내면수식된 모세관도 사용할 수 있다. 이 분리모드를 써서 저분자검체 ( Mr < 2000 ) 및 고분자검체( 2000 < Mr < 100000)를 분석할 수 있다. 모세관구역 전기영동법은 분리효율이 높기 때문에 질량전하비가 조금밖에 다르지 않은 분자간의 분리도 가능하다. 이 분리법에서는 카이랄 셀렉터(chiral selectors)를 분리용 완충액에 가하여 카이랄 화합물도 분리할 수 있다.

분리의 최적화

복수의 파라미터가 분리에 관여하는 경우에는 분리조건의 최적화는 복잡해진다. 이 분리법의 조건설정에서는 기기 및 전해질용액이 주요한 파라미터이다.

기기에 관한 파라미터

(1) 전압  인가(印加)전압 및 칼럼온도의 결정에는 Joul열플롯이 유용하다. 분리시간은 인가전압에 반비례한다. 그러나 전압을 올리면 과잉의 열이 발생하고 모세관 내부의 완충액의 온도가 상승하여 영동액의 점도가 고르지 않게 된다. 결과는 밴드가 넓어지고 분리도를 저하시킨다.

(2) 극성  전극의 극성은 보통의 전압인가(검체도입측이 양극, 폐액측이 음극)로 전기침투류는 음극측으로 흐른다. 극성을 역으로 했을 경우에는 전기침투류는 폐액측에서 도입측을 향해 발생하며 전기침투류보다도 전기이동도가 빠른 검체만이 검출부를 통과한다.

(3) 온도  온도의 영향은 주로 영동액의 점도와 전도율에서 볼 수 있고 이동속도에 영향을 준다. 경우에 따라서는 모세관온도의 상승이 단백질의 입체구조를 변화시켜 이들의 이동시간이나 분류효율이 변하는 일도 있다.

(4) 모세관  모세관의 치수(길이 및 안지름)는 분석시간, 분석효율 및 검체용량에 영향을 준다. 전체길이의 증가는 전장을 감소(정전압시)시켜 유효길이 및 전체길이의 증가로 영동시간이 길어진다. 완충액과 전장이 일정하면 열방산효율은 모세관 안지름에 따라 달라진다. 따라서 이것 때문에 일어나는 검체밴드의 확산은 모세관의 안지름에 의해서도 변화한다. 또 사용하는 검출법에 의해서도 변화하지만 안지름이 변하면 검체도입량이 변화하기 때문에 검출한계에도 영향을 미친다.

검출성분이 모세관내벽에 흡착하면 분리효율을 저하시키기 때문에 분리법의 설정에서 흡착을 방지할 방법을 고려해야 한다. 특히 단백질을 검체로 하는 경우 흡착을 방지할 몇가지 방법이 연구되어 있다. 그 방법으로는 완충액조성의 연구(높은 pH 또는 낮은 pH나 내벽으로 양이온성첨가제의 흡착)를 하기만 해도 단백질의 흡착을 막는 방법도 있다. 기타 단백질과 부전하를 띤 실리카표면의 상호작용을 막기 위하여 모세관 안벽을 공유결합으로 폴리머로 피복하는 방법이 있다. 이 목적으로 친수성의 중성폴리머나 양이온성 또는 음이온성폴리머로 수식된 모세관을 구할 수 있다.

전해질용액에 관한 파라미터

(1) 완충액의 종류와 농도  모세관전기영동법에 적합한 완충액은 사용하는 pH 범위 내에서 적당한 완충능을 가지며 또한 전류발생을 최소로 억제할 수 있는 낮은 이동성의 것이다. 가능하면 완충액 이온의 이동도를 용질의 이동도에 맞춤으로서 피크형상의 일그러짐을 최소로 할 수가 있다. 분리효율을 높여 검출감도를 향상시키기 위하여 모세관내에서 검체 구역의 집속을 시도하는데에도 검체용매의 종류는 중요하다. 일정한 pH에서 완충농도를 높이면 전기침투류 및 검체의 이동속도는 감속한다.

(2) 완충액의 pH  완충액의 pH는 검체나 첨가제의 전하 및 전기침투류에 영향을 줌으로 검체의 분리에 영향을 미친다. 단백질 및 펩티드의 분리에 있어서 완충액의 pH를 검체의 등전점보다 높은 pH에서 등전점보다 낮은 pH로 변화시킴으로서 검체의 실질적 전하가 부에서 정으로 변화하게 된다. 일반적으로 완충액의 pH를 높이면 전기침투류는 빨라진다.

(3) 유기용매  검체 또는 영동액첨가제의 용해도를 높이거나 검체성분의 이온화도를 변화시키기 위해 수성완충액에 유기용매(메탄올, 아세트니트릴등)를 첨가하는 경우가 있다. 일반적으로 이들 유기용매를 완충액에 첨가하면 전기침주류를 저하시킨다.

(4) 카이랄분리를 위한 첨가물질  광학이성체를 분리하기 위해서는 영동액에 카이랄 셀렉터를 첨가한다. 가장 일반적으로 쓰이는 카이랄 셀렉터는 텍스트린류인데 크라운에테르류, 다당류 혹은 단백질이 사용되는 경우도 있다. 광학이성체의 인식은 카이랄 셀렉터와 각각의 거울상이성체와의 상호작용이 다른 것 때문이므로 그 분리도는 사용하는 카이랄 셀렉터의 종류에 따라 현저히 달라진다. 내강의 크기가 다른 시클로덱스트린류(α-, β-, γ-시클로덱스트린), 중성기(메틸, 에틸, 히드록시알킬 등) 또는 극성기(아미노메틸, 카르복시메틸, 설포부틸에테르 등)가 있는 시크로데스트린류를 쓸 수 있다. 수식시클로데스트린을 사용할 때 제품간에 수식률에 편차가 있기 때문에 카이랄 분리에 영향을 미치는 일이 있으므로 주의가 필요하다. 카이랄 분리에서 분리도에 영향을 주는 기타의 인자로서 카이랄 셀렉터의 농도, 완충액의 조성과 pH, 및 분석온도가 있다. 메탄올 또는 요소와 같은 유기계 첨가제의 사용도 분리도에 영향을 준다.

2. 모세관겔 전기영동법

모세관겔 전기영동법에서는 분자체효과가 있는 겔을 충전한 모세관내에서 분리가 이루어진다. 유사한 질량전하비를 갖는 분자에서 분자크기가 작은 성분이 큰 성분보다도 겔의 네트워크 내를 자유로이 이동할 수 있으므로 작은 분자가 큰분자보다도 빠른 속도로 영동되어 분리가 달성된다. 모세관겔전기영동법은 유사한 질량전하비를 갖는 생체고분자(예를 들면 단백질 및 DNA단편)를 그들의 분자량에 따라서 분리할 수 있다.

겔의 특징

두 종류의 겔이 사용된다. 가교형겔과 비가교형겔이다. 가교된 폴리아크릴아미드겔 같은 화학겔은 모세관내에서 모노머를 중합시켜서 조제한다. 보통 겔은 용융실리카내벽과 결합하고 있으므로 모세관을 파괴시키지 않는 한 떼어낼 수 없다. 겔을 환원조건하에서 단백질의 분석에 사용할 때에는 영동액은 보통 도데실황산나트륨을 함유한다. 검체를 도입하기 전에 도데실황산나트륨과 2-메르캅토에탄올 또는 디티오슬레이톨의 혼합액과 가열하여 변성시킨다. 비환원적조건의 분석(예를 들면 미변성의 항체)에서는 2-메르캅토에탄올 및 디티오슬레이톨을 사용하지 않는다. 가교겔 중에서의 분리에 있어서(모세관 구역(zone) 전기영동법의 항에서 설명한바와 같이) 영동액의 조절이나 겔 조제시의 아크릴아미드의 농도나 가교제의 비율을 변경하여 겔의 세공크기(pore size)를 조절해 최적화 할 수 있다. 일반적으로 세공크기가 작은 경우에는 검체의 이동도도 작아진다. 겔은 강고하기 때문에 검체도입은 전기적 방법을 이용한다.

유동성(비가교형)겔로 직쇄폴리아크릴아미드, 셀룰로오스 유도체, 덱스트란 등의 수용성 폴리머도 분자체의 효과가 있다. 이들의 분리매체는 가교형 폴리머에 비하여 조제가 쉽다. 바이알 중에서 조제하며 전기침투류가 발생하지 않도록 내벽이 수식된 모세관에 압력으로 충전 할 수가 있다. 일반적으로 검체를 도입하기 전에 겔을 교환하면 분리의 재현성이 높아진다. 고분자량의 폴리머(일정한 농도로)를 쓰던가 폴리머농도(일정한 분자량으로)를 낮게 하면 겔의 세공크기를 크게 할 수가 있다. 겔의 세공크기를 작게 하면 동일 완충액에서는 검체의 이동도는 작아진다. 이들 폴리머는 완충액에 용해시켜도 점성은 낮아서 검체의 도입은 낙차법 및 전기적도입법 그 어느 것도 할 수 있다.

3. 모세관등전점 전기영동법

등전점 전기영동법에서는 분리완충액에 용해한 광범위한 등전점(pI)을 갖는 양성전해질(폴리아미노카르본산)로 형성된 pH 기울기 중에서 검체분자는 그 pI 이외의 곳에서는 전하를 가지기 때문에 전장의 영향 하에 이동한다. 등전점 전기영동법의 3가지 기본적인 단계는 검체첨가(loading), 집속(focusing) 및 이동(mobilization)이다.

(1) 검체첨가 : 2개의 방법을 이용할 수 있다.

(i) 한 단계 첨가  검체를 양성전해질과 혼화하고 가압 또는 흡인으로 모세관에 도입한다.

(ii) 연속적 첨가  leading 완충액, 양성전해질, 양성전해질과 혼화한 검체, 양선전해질, 최후에 terminating 완충액의 순으로 모세관에 도입한다. 검체의 용량은 pH 기울기를 흐트러지지 않게 소량이어야 한다.

(2) 집속 : 전압을 인가(印加)하면 양성전해질은 각각의 전하에 따라 음극 혹은 양극으로 이동하고, 양극(낮은 pH)에서 음극(높은 pH)으로 pH 기울기가 형성된다. 동시에 분리하는 성분은 그들 등전점(pI)에 대응하는 pH로 이동하고 집속하면 전류가 현저히 저하한다.

(3) 이동분리한 밴드를 검출부까지 이동시킨다. 세가지 방법을 이용할 수 있다 :

(i) 제 1의 방법에서는 전기침투류도 집속 중에 성분이동이 달성된다. 다만 성분을 집속시키기 위하여 전기침투류를 작게 한다.

(ii) 제2의 방법에서는 집속종료 후에 압력을 써서 이동시킨다.

(iii) 제3의 방법에서는 집속종료 후에 음극 또는 양극측의 영동액(이동시키고 싶은 방향에 따라 선택)에 염류를 가하여 전압을 인가하면 모세관중의 pH가 변화하고 성분이 이동한다. pH가 변화하는데에 따라 단백질과 양성전해질은 염류를 가한 액조의 방향으로 이동하여 검출기를 통과한다. 얻어지는 분리는 pH 기울기(dpH/dx), 다른 등전점을 갖는 양성전해질의 수, 분자확산계수D, 전장의 세기 E 및 그 pH에서의 검체의 전기영동 이동도의 변화(-dμ/dpH)로부터 △pI로 나타낼 수 있다.

최 적 화

분리조건을 결정하는 주요한 파라메터를 아래에 기술한다.

(1) 전압  모세관등전점 전기영동법에서는 집속시에 300 ~ 1000 v/cm의 높은 전장을 이용한다.

(2) 모세관  검체를 검출부까지 이동시키는 방법(위 참조)에 따라서는 전기침투류를 소실 또는 최소한으로 억제하여야 한다. 내면수식된 모세관은 전기침투류를 억제하는 것이 많다.

(3) 용액류  양극조에는 등전점이 가장 산성인 양성전해질의 등전점보다 낮은 pH의 액을 채우고, 음극조에는 가장 염기성인 양성전해질의 등전점보다 높은 pH의 액을 채운다. 양극측에는 인산이, 음극측에는 수산화나트륨이 가끔 사용된다.

양성전해질액에 메틸셀룰로오스와 같은 폴리머를 첨가하면 점성이 증가하여 대류나 전기침투류가 억제된다. 판매되는 양성전해질에는 여러 pH범위의 것이 있으며 넓은 pH범위가 필요할 때에는 혼화하여 사용한다. 넓은 pH범위는 검체의 등전점을 추정하는데 사용되며 좁은 범위의 것은 측정정밀도를 올리기 위해 사용한다. 표준단백질 마커(marker)의 등전점과 이동시간의 관계로부터 pH를 교정할 수 있다.

필요하면 글리세린, 계면활성제, 요소, 양성이온완충제등을 완충액에 첨가하여 등전점에서 단백질이 침전하는 것을 막을 수 있다. 그러나 요소는 농도에 따라서는 단백질을 변성시킨다.

4. 미셀동전크로마토그래피(MEKC)

미셀동전크로마토그래피(MEKC)에서는 임계 미셀농도(CMC) 이상의 농도에서 계면활성제를 함유하는 전해질 용액 중에서 분리가 된다. 검체분자는 수성완충액과 미셀로 되는 의사고정상으로, 검체의 분배계수에 따라 분배된다. 따라서 이 방법은 전기영동과 크로마토그래피와의 양자의 특징이 있다. MEKC는 모세관전기영동의 효율, 속도 및 장치에 적응성을 겸하여 구비하면서 증성 및 하전한 검체의 양자의 분리에 이용할 수 있는 전기영동법이다. MEKC에서 가장 널리 쓰이는 계면활성제는 음이온성의 도데실황산나트륨(SDS)인데 에틸트리메틸암모늄염과 같은 양이온성계면활성제도 사용된다.

MEKC에서의 분리 메카니즘은 다음과 같다. 중성 및 알칼리성 pH에 있어서는 강한 전기침투류가 발생하고 영동액은 음극방향으로 이동한다. SDS를 쓰면 부전하를 가지는 미셀은 전기적으로 역의 양극방향으로 이동한다. 그 결과 영동액에 비하여 미셀의 이동속도는 늦어진다.

중성물질의 경우에는 미셀과 수성완충액과의 사이에서 분배가 일어나고 전기영동이 되지 않기 때문에 그 이동속도는 미셀과 수성완충액간의 분배계수에만 의존한다. 전기영동 그림에서 중성물질유래의 피크는 언제나 전기침투류 마커의 피크와 미셀의 피크 사이에 존재한다(두 개의 피크 사이는 separation window라고 한다). 전하를 가지는 검체의 경우 그 이동속도는 미셀과 수성완충액 간의 분배계수와 미셀이 없는 경우의 전기영동이동도와의 양자에 의존한다.

중성 또는 약하게 이온화한 검체의 MEKC에서의 분리원리는 본질적으로는 크로마토그래피이므로 검체의 이동도와 분리는 검체의(k'), 즉 미셀 중의 용질의 몰수와 이동상 중의 몰수의 비인 질량분포비(Dm)로 일반화시킬 수 있다.

tR : 검체의 이동시간

t0 : 유지되지 않는 물질의 이동시간(미셀에 포접되지않는 전기침투류 마커, 예를 들면  메탄올의 이동시간)

tmc : 미셀의 이동시간 (미셀에 상시 포접되어 미셀과 함께 이동하는 수단III(sudan III)과 같은 미셀 마커의 이동시간)

K : 검체의 분배계수

VS : 미셀 상의 용적

VM : 이동상의 용적

마찬가지로 2종류가 인접하여 이동하는 검체간의 분리도(RS)는 다음식으로 얻는다.

N : 한쪽편의 성분의 이론단수

α : 선택성

,  : 양성분의 질량분포비 ( > )

마찬가지의 관계에서 전기적으로 하전한 검체에 대한 값과 RS값을 얻는다.

최 적 화

MEKC에서의 분석조건을 결정할 때에 생각되는 주된 파라미터는 아래와 같은 것이 있다.

기계에 관한 파라미터

(1) 전압  분석시간은 전압에 반비례한다. 그러나 전압을 올리면 열을 발생하고 모세관의 단면에서 열 및 점도의 기울기가 생긴다. 이 효과는 미셀을 함유하는 고전도성의 영동액에서 현저하게 일어나기 쉽다. 열방산이 불충분한 경우에는 구역(zone)의 확산을 일으켜 분리도가 저하된다.

(2) 온도  모세관의 온도의 변화는 검체의 완충액과 미셀로의 분배계수, 임계미셀농도 및 영동액의 점도에 영향을 미친다. 이들 파라미터는 검체의 이동시간에 영향을 준다. 적절한 냉각시스템을 쓰면 검체의 이동시간의 재현성이 개선된다.

(3) 모세관  모세관구역(zone)전기영동법에서처럼 모세관의 치수(길이 및 안지름)가 분리시간 및 분리효율에 영향을 준다. 유효길이 및 전체길이를 길게하면(정전압에서) 전장이 낮아져서 이동시간이 길어지기 때문에 분리효율이 향상된다. 안지름은(동일영동액 및 동일전장 하에서) 열방산에 관여하며 결과로서 검체 구역(zone)의 확산에 관계된다.

전해질 용액에 관한 파라미터

(1) 계면활성제의 종류와 농도  계면활성제의 종류는 크로마토그래피의 고정상과 마찬가지로 분리의 선택성을 변화시키므로 분리도에 영향을 준다. 계면활성제 농도의 증가에 따라서 중성화합물의 log 값은 직선적으로 증가한다.

가  값에 가까워지면 MEKC에서의 분리도는 최대에 도달하므로 이동상 중의 계면활성제의 농도가 변하면 분리도는 변화한다.

(2) 완충액의 pH  pH는 이온화하지 않은 검체의 분배계수를 변화시키지 않으나 코팅하지 않은 모세관 중의 전기침투류를 변화시킨다. MEKC에서 pH가 낮아지면 전기침투류가 감소하고 그 때문에 분석시간이 길어져서 중성검체의 분리도가 향상된다

(3) 유기용매류  소수성화합물의 MEKC에서의 분리를 개선하기 위하여 전해질 용액에 메탄올, 프로판올, 아세트니트릴 등을 첨가할 수 있다. 이들 용매의 첨가로 일반적으로 이동시간 및 분리의 선택성이 감소한다. 유기용매의 첨가는 임계미셀농도에 영향을 준다. 유기용매농도를 높게하면 미셀형성이 저해되므로 MEKC의 분배 메커니즘이 없어지는 고농도에서는 사용할 수 없다. 고농도의 유기용매의 존재에 의한 미셀의 소실이 반드시 분리를 불가능하게 한다는 것은 아니고 이온성의 계면활성제 모노머와 중성의 검체와의 소수성 상호작용 때문에 전기영동적으로 분리가능한 친용매성의 복합체가 형성되는 경우도 있다.

(4) 광학분리용 첨가물질  MEKC로 광학이성체를 분리시키기 위해서는 카이랄 셀렉터를 계면활성제와 공유결합시키든가 영동액에 첨가하든가 하여 미셀분리계에 가한다. 광학식별이 되는 부위가 있는 미셀로는 N-도데카노일-L-아미노산염, 담즙산염 등이 있다. 광학활성체의 분리는 광학인식능이 없는 계면활성제를 함유하는 전해질용액에 시클로덱스트린류와 같은 카이랄 셀렉터를 첨가하여서도 달성할 수 있다.

(5) 기타의 첨가제  영동액에 화학물질을 첨가하여 선택성을 변경시키는 방법이 몇 가지 있다. 수종의 시클로덱스트린류를 첨가하여 미셀과 소수성검체간의 상호작용을 경합시켜 선택성을 높일 수 있다.

미셀에 흡착하는 화합물을 가하여 검체와 미셀 간의 상호작용을 조절하여 MECK에서의 분리를 개선할 수 있다. 이들 첨가제에 이온성 혹은 비 이온성의 다른 종류의 계면활성제를 첨가하여 혼합미셀을 형성시키거나 미셀에 녹여서 검체와 착체형성이 가능한 금속 양이온을 가할 수도 있다.

정량분석

피크면적은 아래의 이유로 대응하는 피크의 영동시간으로 나누어서 바른 면적을 구한다.

(1) 분석마다의 이동시간의 변동에 의한  피크반응(response)의 보정

(2) 다른 영동시간에서 관찰되는 검체성분간의 반응(response) 보정

내부표준물질을 사용하는 경우에는 정량하려고하는 물질의 피크가 내부표준물질의 피크와 겹치지 않음을 확인한다.

계    산

얻어진 값으로부터 목적성분의 함량을 산출한다. 처방되어있는 검체의 경우에는 측정하려고 하는 한 성분 혹은 복수성분의 함량%를, 용매나 첨가제 이외의 보정한 전 피크의 총면적에 대한 목적피크의 면적 %로 구한다. 자동적분시스템(integrator 또는 data 입력처리장치)을 사용하는 것이 권장되고 있다.

적합성 파라미터

모세관 전기영동시스템의 검색(check)에는 적합성 파라미터를 사용한다. 이들 파라미터는 사용하는 모세관 전기영동법의 분리모드에 따라 선택한다. 질량분포비(, 미셀동전크로마토그래피의 경우에서만), 이론단수(N), 대칭계수(AS) 및 분리도(RS)가 있다. N 및 RS에 관한 이론적 설명은 위에서 설명한 바와 같지만 전기영동 그림으로부터 다음 식으로 이들 파라미터를 산출할 수 있다.

이론단수

tR : 목적성분의 피크의 이동시간 또는 검체도입점으로부터 목적성분의 피크의 정점에서 수직으로 내린 점까지 기선에 따라 이어진 거리

Wh : 피크의 반폭값

분 리 도

거의 같은 피크높이를 가지는 두 종류의 성분간의 분리도(RS)는 다음 식으로 계산한다.

[eqn: R _{S} ``=``( {1.18(t _{R2} -t _{R1} )} over {W _{h1} +W _{h2}} )]

tR1, tR2 : 영동시간 또는 검체 주입점으로부터 이웃하는 두 피크의 각각의 정점에서 수직으로 내린 각 선의 기선에 따른 각 점까지의 거리(유지시간)

Wh1, Wh2 : 각 피크의 반폭값
일부 분리되어있는 피크의 경우에는 두 개의 피크 사이의 골의 높이(HV)와 작은 쪽의 피크의 높이(HP)를 측정하고 그 비를 계산하여 분리도를 산출해도 된다.

피크의 대칭성

피크의 대칭성을 나타내는 대칭계수는 다음 식으로 계산할 수 있다.

W0.05 : 피크높이의 1/20에서의 피크 폭

d : 피크 정점에서 수직으로 내린 점과 피크높이의 1/20에서의 피크의 위로 올라가는 부분과의 거리

면적의 재현성(면적 또는 면적과 이동시간과의 비의 표준편차) 및 이동시간의 재현성(이동시간의 표준편차)의 시험을 적합성파라미터에 넣어야 한다. 이동시간의 재현성은 모세관의 세정조작의 적합성의 시험이 된다. 이동시간의 재현성이  낮은 경우에는 내부표준물질과의 상대이동시간을 써서 재현성을 보완할 수 있다.

표준검체에 대한 S/N비를 조사하는(혹은 정량한계의 측정)시험도 유용하다.

Signal Noise 비

검출한계값 및 정량한계값은 각각 S/N 비 3이상 및 10이상에 상당한다. S/N 비는 다음 식을 써서 계산한다.

S/N =

H : 규정의 표준검체용액에서 얻은 전기영동그림 중의 목적성분에 상당하는 피크의 높이, 피크 꼭대기에서부터 반폭값의 20배에 상당하는 범위에서 추정할 수 있는 기선까지의 거리를 측정한다.

h : blank의 주입 후에 얻은 전기영동 그림에서 규정의 표준검체용액으로부터 얻은 영동 그림 중의 피크의 반폭값의 20배에 상당하는 시간범위에서 각 피크가 나타나는 위치의 전후의 범위를 관찰했을 때의 배경(background)의 폭

보존력 시험법

보존력시험법은 분활반복 투여용기 중에 충전된 제제 자체 또는 제제에 첨가된 보존제의 효력을 미생물학적으로 평가하는 방법이다. 제제에 시험대상이 되는 균종을 강제적으로 접종, 혼합하고 경시적으로 시험균의 소멸과 생장을 추적하여 보존력을 평가한다.

또한 의약품 GMP에 대응하기 위하여 또는 단지 생균수를 억제할 목적만을 위해 보존제를 사용해서는 안 된다. 보존제는 그 자체로 독성이 있는 물질이기도 하다. 그러므로 사람에게 안전성의 영향을 줄 수 있는 양을 제제에 첨가해서는 안 되며 보존제의 첨가량을 가능한 한 적게 하려는 배려가 필요하다. 이 시험은 일반적으로 제제의 처방설계단계나 정기적인 보존력의 검증 등에 적용되며 로트의 출하판정시험으로는 하지 않지만 최종용기에 담겨진 제제중의 보존제의 효과는 제제의 유효기간에 걸쳐서 검증하여야 한다.

1. 제제와 그 카테고리

이 시험을 하기 위하여 제제를 2개의 카테고리로 분류한다. 카테고리Ⅰ은 수용성의 기제 또는 용제를 써서 만들어진 것, 카테고리 Ⅱ는 비수용성의 기제 또는 용제를 써서 만들어진 것이다. 또한 수중유형기제를 써서 만들어진 것은 카테고리Ⅰ에, 유중수형기제를 써서 만들어진 것은 카테고리Ⅱ에 포한된다.

카테고리 Ⅰ은 제형에 따라 3군으로 분류한다.

카테고리 Ⅰ A : 주사제 및 무균의 비경구제

카테고리 Ⅰ B : 비무균의 비경구제

카테고리 Ⅰ C : 경구액제(쓸 때 용해 또는 현탁하여 쓰는 시럽제 포함)

카테고리 Ⅱ : 비수용성의 기제 또는 용제를 써서 만들어진 제제로 카테고리Ⅰ에 기재되어 있는 모든 제형을 포함한다.

2. 시험균주와 배지

아래의 균주 또는 이와 동등하다고 생각되는 균주를 쓴다.

Escherichia coli ATCC 8739, NBRC 3972

Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, NBRC 13275

Staphylococcus aureus ATCC 6538, NBRC 13276

Candida albicans ATCC 10231, NBRC 1594, JCM 2085

Asperigillus niger ATCC 16404, NBRC 9455

이들 시험균은 제제의 제조, 사용 또는 보존 중에 사람이나 환경으로부터 혼입될 염려가 있는 미생물을 대표하며 또한 감염 병원체이다. 이들 지정균주에 더하여 제제의 성질에 따라 혼입하여 증식할 염려가 있는 미생물을 시험균주로서 사용하는 것이 좋다. 시험균주는 미생물 보존기관에서 입수한 후 신선한 배지에 심어 계대마다 1계대로 정의하고 5계대 이내의 것을 쓴다. 시험균은 혼합하지 않고 각각 단독으로 제제에 혼입하여 시험한다. 접종균의 배양은 한천배지 또는 액체배지 중 하나를 선택한다.

한천평판배양 : 상기 5종의 균주를 각각 한천평판배지 또는 한천사면배지의 표면에 접종하여 배양한다. 한천배지로는 세균의 경우 대두카제인소화한천배지를 쓰고 진균의 경우에는 사브로·포도당한천배지(Sabourauds dextrose agar), 포도당·펩톤 한천배지, 또는 감자·포도당 한천배지 중 하나를 쓴다. 세균의 경우에는 30 ∼ 35 ℃에서 18 ∼ 24 시간, C. albicans는 20 ∼ 25 ℃에서 40 ∼ 48 시간, A. niger는 20 ∼ 25 ℃에서 1 주간 또는 충분히 포자가 형성될 때까지 배양한다.

이들의 배양균체를 백금이 등으로 무균적으로 채취하고 멸균생리식염액 또는 0.1 % 펩톤식염액에 부유시키고 약 108 개/mL의 생균을 함유하는 부유액을 조제한다. A. niger의 경우에는 폴리솔베이트 80을 0.05 %의 비율로 첨가한 멸균생리식염액 또는 0.1 % 펩톤식염액에 부유시켜 약 108 개/mL의 포자를 함유하는 부유액을 조제한다. 이들 부유액을 접종균액으로 사용한다.

액체배양 : 상기 4종 (A. niger는 제외)의 균주를 각각 적당한 액체배지에 배양 후 원심분리하여 배지를 제거한다. 균체는 멸균생리식염액 또는 0.1 % 펩톤식염액으로 세정하고 같은 용액으로 약 108 개/mL의 생균 또는 포자를 함유하는 접종균액을 조제한다.

상기 5 종 이외의 균주를 배양하는 경우에는 당해균주의 생육에 적합한 배지를 선택하여 사용할 수 있다. 부유액의 조제도 그 균에 적합한 방법을 채용한다. 한천평판배지법과 액체배양법의 그 어느 경우에서도 얻어진 접종균액은 24 시간 이내에 사용한다. 2 시간 이내에 피검체에 접종할 수 없는 경우에는 냉장고에 보존한다. 접종균액 중의 균수를 사용직전에 계측하고 얻어진 균수값으로부터 접종직후의 제제 1 mL(g)당의 이론균수를 산출한다.

3. 시험절차

3.1 카테고리Ⅰ제제

제제를 함유하는 용기 5개의 각각에 접종균액을 무균적으로 주입하고 균일하게 혼합한다. 제제의 용기 중에 균액을 무균적으로 혼합하기 어려울 때 또는 제제량이 적은 경우에는 멸균한 다른 용기에 시험에 필요한 충분한 양의 제제를 무균적으로 옮겨서 접종균액을 혼합한다. 비무균제제의 경우, 균을 접종하지 않은 제제를 대조로 보존하며 생균수(세균수 및 진균수)를 측정한다. 균액을 제제 중에 균일하게 혼합하기 위하여 멸균한 주사침, 스파튜라, 유리봉 등을 사용할 수 있다. 혼합하는 접종균액의 양이 제제의 1/100량을 초과해서는 안 된다. 보통 제제 1 mL 또는 1 g당 105 ∼ 106개의 생균수가 되도록 접종 혼합한다. 이들 용기를 차광하에서 20 ∼ 25 ℃로 보존하고 0, 14 및 28일째에 피검제제에서 1 mL 또는 1 g를 취하여 생균수를 측정한다. 상기의 기간 중 검체에 현저한 변화 (예를 들면 색조의 변화나 다른 냄새의 발생)가 관찰되었을 때에는 기록을 하고 해당제제의 보존력에 대하여 평가검토 한다. 생균수의 경시적인 변화는 시험개시 때의 균수를 100으로 한 백분율로 나타낸다. 생균수측정은 원칙적으로 「미생물 한도시험법」에 기재되어있는 한천평판희석법으로 한다. 또한 이 경우 발육저지물질의 확인시험을 하여 그 영향을 제거하여야 할 때에는 검액의 조제에 쓰는 완충액이나 액체배지 및 한천배지에 효과적인 불활성화제를 첨가할 수 있다. 다만 분활성제가 미생물의 증식에 영향을 주지 않는다는 확인이 필요하다. 보존제나 제제 그 자체의 존재가 생균수측정에 영향을 미치며 동시에 적당한 불활성제가 없는 경우에는 「미생물 한도시험법」에 기재되어 있는 멤브레인필터법에 따라 생균수를 측정한다.

3.2 카테고리Ⅱ 제제

카테고리Ⅰ에 따른다. 시험균을 제제와 균일하게 혼화하는 경우 및 혼합검체 중의 생균수를 측정하는 경우에는 특별한 취급기술과 배려가 요구된다.

반고형의 연고기제 제품에서는 검체를 45 ∼ 50 ℃로 가열하여 유상으로 하고 부유액을 가하여 멸균 유리봉 또는 스파튜라로 접종균액을 균일하게 분산시킨다. 균일하게 혼합되도록 계면활성제를 넣어도 되는데 첨가되는 계면활성제가 접종균의 생존성이나 증식성에 영향을 주지 않으며 동시에 제제의 보존력을 증강시키지 않는 것을 확인할 필요가 있다. 생균수 측정을 위하여 피검제제를 완충액이나 액체배지에 균일하게 혼합할 때에도 계면활성제나 유화제를 첨가하는 것이 바람직할 때도 있다. 특히 반고형연고제제나 유성제제 등에 접종된 미생물을 액체배지 중에 균일하게 분산시키는데에는 소르비탄모노올레인산에스테르, 폴리솔베이트 80, 레시틴 등을 사용하면 좋다. 이것들은 흔히 사용되고 있는 많은 보존제를 불활성화 하거나 중화시키는 작용이 있다.

4. 판정

보존력의 판정은 표 1에 따른다. 표 1에 기록되어 있는 시험결과가 얻어진 경우 보존력이 있다고 판정한다. 더구나 무균제제에 접종균 이외의 균이 발견되었을 때에는 중대한 미생물 오염이 일어났을 가능성이 크며, 시험조작상 또는 제조관리상의 주의가 필요하다. 또한 비무균제제 중의 오염균수가 일반정보수재의 「비무균의약품의 미생물학적 품질특성」에 정해진 균수를 초과하는 경우에도 시험조작상 또는 제조관리상의 주의가 필요하다.

표 1. 제제구분별 판정기준

제제구분	미생물	판정기준
		14 일 후	28 일 후
카테고리ⅠA	세균	접종균수의 0.1 % 이하	14 일후의 수준과 동등하거나 또는 그 이하
	진균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하
카테고리ⅠB	세균	접종균수의 1 % 이하	14 일후의 수준과 동등하거나 또는 그 이하
	진균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하
카테고리ⅠC	세균	접종균수의 10 % 이하	14 일후의 수준과 동등하거나 또는 그 이하
	진균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하
카테고리Ⅱ	세균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하
	진균	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하	접종균수와 같은 수준 또는 그 이하

5. 배지 등

보존력시험용 배지 등은 아래와 같다. 다른 배지에도 유사한 영양성분을 함유하며 동시에 시험대상으로 되는 미생물에 대하여 유사한 선택성이나 증식성을 가지는 것은 사용하여도 무방하다.

대두 카제인 소화 한천배지

카제인제 펩톤	15.0 g
대두제 펩톤	5.0 g
염화나트륨	5.0 g
한천	15.0 g
물	1000 mL

모든 성분을 넣어 혼합하고 121 ℃에서 12 ∼ 20 분간 고압증기멸균 한 다음 pH를 7.1 ∼ 7.3으로 조정한다.

사브로·포도당 한천배지

육제 또는 카제인제 펩톤	10.0 g
포도당	40.0 g
한천	15.0 g
물	1000 mL

모든 성분을 넣어 혼합하고 121 ℃에서 15 ∼ 20 분간 고압증기멸균 한 다음 pH를 5.4 ∼ 5.8로 조정한다.

GP(포도당·펩톤) 한천배지

포도당	20.0 g
효모엑스	2.0 g
황산마그네슘칠수화물	0.5 g
펩톤	5.0 g
인산이수소칼륨	1.0 g
한천	15.0 g
물	1000 mL

모든 성분을 넣어 혼합하고 121 ℃에서 15 ∼ 20 분간 고압증기멸균 한 다음 pH를 5.6 ∼ 5.8로 조정한다.

감자·포도당 한천배지

감자엑스	4.0 g
포도당	20.0 g
한천	15.0 g
물	1000 mL

모든 성분을 넣어 혼합하고 121 ℃에서 15 ∼ 20 분간 고압증기멸균 한 다음 pH를 5.4 ∼ 5.8로 조정한다.

0.1% 펩톤식염액

펩톤	1.0 g
염화나트륨	8.0 g
물	1000 mL

모든 성분을 넣어 혼합하고 121 ℃에서 15 ∼ 20 분간 고압증기멸균 한 다음 pH를 7.2 ∼ 7.4로 조정한다.

분체의 입자밀도측정법

분체의 입자밀도측정법은 분말상 의약품 또는 의약품원료의 입자밀도를 측정하는 방법으로 보통 기체치환형피크노미터를 써서 측정한다. 이 방법으로 측정하는 분체의 밀도는 밀폐된 계중에서 분체로 인해 치환되는 기체의 부피는 분체의 부피와 같다고 간주하여 구한다. 성기게 충전할 때의 겉보기밀도 또는 탭충전할 때의 탭밀도는 입자간의 공극 부피를 포함하여 분체의 부피로 하여 분체의 겉보기 밀도로 나타내는 반면 피크노미터법에 의한 입자밀도는 기체의 침입이 가능한 열려있는 구멍부위의 공극 부피를 제외하고 분체의 부피를 평가하기 때문에 결정밀도와 거의 동등한 분체의 입자밀도를 나타낸다.

분체의 입자밀도는 단위부피당 질량 (kg/m3) 으로 표시하지만 보통 g/cm3 로 표시한다.

장치

피크노미터법에 의한 입자밀도측정장치의 모식도는 그림과 같다. 장치는 검체를 넣는 시험용셀, 대조셀 및 압력계로 구성되어 있다.

보통 측정용 기체로는 헬륨을 쓰고 압력계를 끼워 정해진 압력까지 시험용셀을 가압할 수 있는 시스템을 준비할 필요가 있다.

장치의 교정  시험용셀 및 대조셀의 용적 Vc, Vr 는 소수점이하 3자리 ( 0.001 cm3 )까지 정확하게 구할 필요가 있고 부피 측정의 정확성을 보증하기 위하여 부피를 알고 있는 입자 밀도측정용교정구를 써서 장치의 교정을 다음과 같이 한다. 먼저 빈 시험용셀에 대하여, 다음에는 입자밀도측정용교정구가 들어있는 시험용셀에 대하여 조작법에 따라 최종압력 Pf 를 측정하고, 시험용셀의 용적 Vc 및 대조셀의 용적 Vr을 조작법 항에 있는 계산식으로 구한다. 또한 처음의 조작에서는 검체부피 Vs = 0으로 보고 계산할 수 있다.

Vr : 대조셀의 용적 (cm3)

Vc : 검체셀의 용적 (cm3)

Vs : 검체부피 (cm3)

M : 양력계

기체치환형피크노미터 (입자밀도측정장치)의 모식도

조작법

입자밀도의 측정은 15 ∼ 30 ℃에서 행하며 측정 중 2 ℃이상의 온도변화가 있어서는 안 된다. 먼저 시험용셀의 질량을 달아 기록한다. 의약품각조에 규정한 양의 검체를 달아 시험용셀에 넣은 다음 셀을 밀폐한다. 다음 시험용셀에 측정용기체 (헬륨)를 통하여 분체중의 휘발성불순물을 제거한다. 필요하면 미리 검체분체를 감압으로 하여 휘발성불순물을 제거한 다음 측정용검체로 한다.

시험용셀과 대조셀을 접속되어 있는 밸브를 열어 계의 압력이 일정하게 된 것을 압력계로 확인한 다음에 대조압력 Pr을 읽는다. 다음 2개의 셀을 접속하는 밸브를 막은 다음 측정용기체를 시험용셀에 도입하여 가압상태로 하고 압력계의 지시가 일정하다는 것을 확인한 다음 초기압력 Pi 을 읽는다. 다음 밸브를 열어 대조셀을 시험용셀과 접속하고 압력계의 지시가 일정하다는 것을 확인한 다음 최종압력 Pf 을 읽어 다음 식으로 검체부피 VS 를 구한다.

[eqn: V _{s`} `=`V _{c} `-` {V _{r}} over {{P _{i} -P _{r}} over {P _{f} -P _{r}} -1}]

[eqn: V _{r}] : 대조셀의 용적 ( cm3 )

[eqn: V _{c}] : 시험용셀의 용적 ( cm3 )

[eqn: V _{s}] : 검체부피 ( cm3 )

[eqn: P _{i}] : 초기압력 ( kPa )

[eqn: P _{f}] : 최종압력 ( kPa )

[eqn: P _{r}] : 대조압력 ( kPa )

동일 검체에 대하여 위의 측정을 반복하고 연속적으로 측정한 검체부피가 0.5 % 이내로 서로 일치하는 것을 확인하고 그 평균값을 검체부피 VS 로 한다. 마지막에 시험용셀을 때내어 칭량하여 빈 셀의 질량과의 차로부터 최종 검체질량 m을 구하여 다음 식으로 분체의 입자밀도 ρ 를 계산한다.

[eqn: rho =m/V _{s}]

[eqn: rho] : 분체의 입자밀도 ( g/cm3 )

[eqn: m] : 최종 검체질량 ( g )

[eqn: V _{s} `]: 검체부피 ( cm3 )

비표면적측정법

비표면적측정법은 기체흡착법에 의한 분말상 의약품의 비표면적 (단위 질량당 분체의 전체 표면적)을 산출하는 방법이다. 검체의 비표면적은 고체표면에서의 기체의 물리흡착으로 측정하며 표면에서의 단분자층에 상당하는 흡착기체의 양을 구하여 산출한다. 물리흡착은 흡착 기체분자와 분말 검체표면 사이의 비교적 약한 힘 (van der Waals) 에 기인한다. 보통  측정은 액체질소의 비점에서 하고 흡착된 기체량은 동적유동법 또는 용량법으로 측정한다.

다점법

분말검체에 기체를 물리 흡착시켰을 때 흡착된 기체량  과 흡착평형상태의 흡착기체의 압력 P 와의 사이에는 상대압 (P/P0)의 값이 0.05 ∼ 0.30 의 범위내에서는 다음 식과 같은 관계[Brunnuer,Emmett, Teller (BET)의 흡착등온식]가 있다.

=      (1)

P : -195.8 ℃ (액체질소의 비점)에서 검체표면과 평형상태인 흡착기체의 분압 (Pa)

P0 : 흡착기체의 증기압 (Pa)

: 표준상태 (0℃, 1.013×105 Pa)에서의 흡착기체의 부피 (mL)

Vm: 검체표면에서 겉보기 단분자층을 형성하는 표준상태에서의 흡착기체의 부피 (mL)

C : 검체 표면에서의 흡착기체의 흡착엔탈피와 관계있는 정수.

다점법에서는 Va는 3개 이상의 P/P0에서 측정한다. 이 때 1 /[ {(P0/P)-1} ]을 (1) 식에 따라 P/P0에 대하여 플롯하면 보통 상대압이 0.05 ∼ 0.30의 범위내에서 직선이 된다. 직선 회기의 상관계수 r 이 0.9975이상 즉 r2 이 0.995이상으로 되는 것이 필요하다. 직선 플롯으로부터 기울기 (C-1)/(VmC)와 절편 1/(VmC)를 직선회기분석으로 구한다. 이들 값으로부터 Vm=1/(기울기+절편), C=(기울기/절편)+1을 계산한다. 얻어진 Vm값으로부터 비표면적 S (m2/g)를 다음 식으로 계산한다.

×22400)          (2)

: 아보가드로수 6.022×1023/mol

: 흡착기체분자 1개의 유효단면적 (m2)

N2 : 0.162×10-18

Kr : 0.195×10-18

: 분말검체의 질량 (g)

비표면적 단위는 보통 m2/g의 단위를 쓴다.

일점법

동적유동법 (제1법) 또는 용량법 (제2법)에 의한 비표면적의 측정에서는 보통 적어도 3개의 다른 P/P0에서의 의 측정이 필요하다. 그러나 0.30부근의 P/P0로 측정한 의 값으로부터 다음 식으로 Vm을 구하여 비표면적을 구할 수 있다.

(3)

일점법은 물질과 관계있는 정수 C 가 1보다 훨씬 큰 물질의 분말 검체에 대하여 쓸 수 있다. 일점법으로 구한 비표면적과 다점법으로 구한 값이 근사하면 1/C 이 거의 0이 된다는 것을 나타낸다. 정수 C 가 큰 값을 나타낼 것으로 예상되는 일련의 분말 검체에 대하여는 그 검체 1개에 대하여 다점법으로 C 를 구하여 그 값으로 Vm에 관한 오차를 감소시킬 수 있다. 이 때 다음 식으로 P/P0에 대하여 측정한 의 값으로부터 Vm을 계산한다.

[eqn: V _{m} =V _{a} ( {P _{0}} over {P} -1)( {1} over {C} + {C-1} over {C} TIMES {P} over {P _{0}} )]     (4)

검체의 조제

비표면적을 측정하기 전에 보존 또는 취급하고 있는 분체 검체의 표면에 물리적으로 흡착한 기체를 제거할 필요가 있다. 탈기조작이 불충분할 때는 검체 표면의 일부에 흡착되어 있는 기체의 영향으로 비표면적이 저하하거나 변동한다. 물질의 표면은 반응성을 가지므로 분말의약품의 비표면적측정에서 정밀성과 정확성을 얻기 위해서는 탈기과정의 설정이 중요하다. 탈기조건의 설정에 있어서는 BET 플롯에서 재현성이 있다는 것, 검체의 질량이 일정하다는 것, 및 검체의 물리적 화학적 변화가 없다는 것을 보증하여야 한다. 온도, 압력 및 시간에 따라 결정되는 탈기조건은 분말 검체 본래의 표면이 가능한 한 재현되도록 선택한다. 탈기는 진공으로 하든가 비 반응성의 건조한 기체의 기류 중에 쐬든가 또는 탈기-흡착 반복법을 쓴다. 또한 불순물이 검체로부터 이탈하는 속도를 증가시키기 위하여 가열할 때가 있다. 분말검체를 가열할 때는 표면의 성질과 검체 상태에 영향을 주지 않도록 주의 하며 비표면적측정의 재현성을 유지하기 위하여 될 수 있는 대로 낮은 온도로 탈기 시간을 짧게 한다. 가열에 민감한 검체의 경우에는 탈기-흡착 반복법과 같은 다른 탈기법을 쓴다. 물리흡착의 표준적인 방법은 액체질소 비점에서의 질소의 흡착이다. 비표면적이 작은 검체 (＜0.2 m2/g) 에서는 증기압이 낮은 크립톤의 흡착을 이용한다. 사용하는 모든 기체는 수분을 함유해서는 안된다. 흡착기체가 질소일 때는 전표면적이 적어도 1 m2, 또한 크립톤일 때는 적어도 0.5 m2 가 되도록 분말검체의 질량을 정확하게 단다. 적절한 밸리데이션을 하면 적은 검체량도 사용할 수 있다. 기체흡착은 다음 중 한 방법으로 측정한다.

제 1 법 동적유동법

동적유동법 (그림1) 에서는 흡착기체로 건조한 질소 또는 크립톤을 쓴다. 헬륨은 흡착되지 않으므로 희석용기체로 쓴다. P/P0가 0.05 ∼ 0.30의 범위 내에서 흡착기체와 헬륨의 혼합비를 변화시켜 적어도 3종류의 혼합기체를 조제한다. 정해진 바의 온도 및 압력조건에서 기체농도검출기는 통과하는 기체의 부피에 거의 비례하는 신호를 출력하며 보통 검출기로서 전자식적분계를 내장한 열전도도검출기를 쓴다. P/P0가 0.05 ∼ 0.30의 범위 내에서 적어도 3개의 데이터를 측정한다.

질소 및 헬륨의 혼합기체는 검출기를 통과한 다음 시험용 셀로 도입되어 다시 검출기를 통과한다. 시험용 셀을 액체질소 중에 담그면 검체는 이동상에서 질소를 흡착하고 열전도도검출기를 통하여 기록계에 펄스로 기록된다. 다음에 시험용 셀을 냉각제에서 제거한다. 이렇게 하여 흡착피크의 반대 측에 이것과 같은 면적을 가지는 탈착피크가 생긴다. 이 탈착피크는 흡착피크보다 명확하므로 측정을 위하여 사용된다. 교정에는 탈착피크와 같은 크기의 피크를 주는 양의 기체를 주입하여 단위피크면적과 기체부피와의 비례관계를 구한다.

제 2 법 용량법

용량법 (그림2)에서 널리 쓰이는 흡착기체는 질소이며 이것을 미리 탈기한 분말검체위의 공간에 일정한 평형압력 P가 되도록 도입한다. 헬륨은 빈 부피(void volume)를 측정할 목적으로 쓴다. 검체표면의 오염을 방지하기 위하여 검체 관내에 건조한 소량의 질소를 넣고 검체 관을 떼어내어 마개를 한다. 그 질량을 달아 검체의 질량을 구한다. 검체 관을 측정 장치에 매달고 검체 관내를 주의 깊게 정해진 압력 (2 ∼ 10 Pa)까지 감압한다. 필요하면 검체 관내의 빈 부피를 측정한다. 액체질소를 넣은 듀아(Dewar) 병을 검체관 위의 정해진 위치까지 올리고 필요한 P/P0가 되도록 충분한 양의 질소를 도입하고 흡착된 기체의 부피을 측정한다. 다점법에서는 연속적으로 보다 높은  P/P0 에서 의 측정을 반복한다. 흡착기체로 질소를 쓸 때는 0.10, 0.20, 0.30의  P/P0가 적절하다.

표준물질 시험해야할 검체와 비슷한 비표면적을 가지는 비표면적측정용 α-알루미나 등을 쓰고 장치의 가동을 정기적으로 확인한다.

A : 유량제어밸브	K : 시험용셀

B : 미분류량제어계	L : 갈아 맞춘 연결관

C : 개폐 밸브	M : 단류도 안정관

D : 기류류 입구	N : 검출기

E : O-링 실(seal)	O : 유로선택밸브

F : 냉각트랩	P : 장류로 안전관

G : 열평형관	Q : 유량계

H : 검출기	R : 탈기용 부위

I : 디지털 화면	S : 확산조절장치

J : 교정용 격막	T : 배기구

<그림 1. 동적유동법장치의 개략도>

A : 진공계	D : 압력계

B : 질소류	E : 진공 / 대기

C : 헬륨류	F : 냉각트랩 / 진공펌프

소독법 및 멸균법

소독법 및 멸균법은 의약품의 제조기기 및 제조환경과 의약품각조에 규정된 미생물관련시험법등을 실시 할 때 필요한 미생물의 살멸방법에 관한 것으로 [최종멸균법 및 멸균지표체]에 언급된 [최종멸균법] 및 [여과법]과는 다르다. 그러므로 이 방법을 적용하는 목적에 따라 예상되는 미생물 사멸효과 또는 무균성 보증수준은 크게 다르고 소독법 및 멸균법에서의 처리조건도 일률적으로 규정할 수가 없다.

일반적으로 이 방법을 적용하는 물질의 성질 및 오염상태 (오염 미생물의 종류 및 오염정도)에 따라서 적절한 선택과 조작 및 조건의 적정화를 검토한 후 보통 다음의 방법을 단독 또는 병용하여 시행한다. 다만, 이 방법을 의약품 제조공정에 적용할 때에는 [최종멸균법 및 멸균지표체]에 준하는 멸균 밸리데이션 (validation)이 필요하다.

1. 소독법

생존하는 미생물의 수를 줄이기 위해 사용하는 방법으로서 반드시 미생물을 전부 사멸시키거나 제거하는 것은 아니다. 일반적으로 소독법은 화학약제 (소독제)를 이용하는 화학적 소독법과 습열이나 자외선 등을 이용하는 물리적 소독법으로 나누어진다.

1.1 화학적 소독법

화학약제를 사용하여 미생물을 사멸하는 방법을 말한다. 미생물을 사멸시키는 화학약제의 기전 및 효과는 사용하는 화학약제의 종류, 농도, 작용온도, 작용시간, 소독대상물의 오염도, 미생물의 종류·상태 (예를 들면, 영양형 세균 및 포자세균)등에 따라 달라진다.

이 방법을 적용할 때에는 조제화학약제의 무균성 및 유효 저장기간, 적용 장소로부터 내성균 출현방지, 잔존화학약제가 제품에 미치는 영향 등에 대하여 주의가 필요하다. 화학약제를 선택할 때는 사용목적에 따라 다음의 항목을 고려하여 적절한 것을 고른다.

1) 항균 스펙트럼의 범위

2) 미생물 사멸에 필요한 작용시간

3) 작용의 지속성

4) 단백질 존재 하에서의 효과

5) 인체에 대한 영향

6) 물에 대한 용해성

7) 소독 대상물에 미치는 영향

8) 냄새

9) 사용방법의 간편성

10) 폐기처리방법의 용이성

11) 폐기에 따르는 환경에 미치는 영향

12) 내성균의 출현빈도

1.2 물리적 소독법

화학약제를 이용하지 않고 미생물을 살멸하는 방법을 말한다.

(ⅰ) 유통증기법

가열 수증기를 직접 유통시켜 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 고압증기법으로는 변질의 우려가 있는 물질에 이용한다. 보통 해당 물체를 100 ℃의 유통 증기 중에 30 ∼ 60 분간 방치한다.

(ⅱ) 자비법

끓는 물에 넣어서 가열에 의해 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 고압증기법으로는 변질의 우려가 있는 물질에 이용한다. 보통, 해당 물체를 끓는 물속에 넣어 15 분 이상 끓인다.

(ⅲ) 간헐법

80 ∼ 100 ℃의 물 속 또는 유통수증기 중에서 1 일 1 회, 30 ∼ 60 분간씩 3 ∼ 5 회 가열을 되풀이하여 미생물을 사멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 고압증기법으로는 변질의 우려가 있는 물질에 사용한다. 또 60 ∼ 80 ℃에서 같은 방법으로 가온을 되풀이하는 저온간헐법도 있다. 가열 또는 가온을 하지 않는 동안에는 20 ℃ 이상으로 미생물의 발육에 적당한 온도를 유지한다.

(ⅳ) 자외선법

보통 254 nm 부근의 파장을 가진 자외선을 조사하여 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 비교적 매끄러운 물품의 표면, 시설, 설비 또는 물, 공기 등 자외선 조사에 견딜 수 있는 것에 대하여 사용한다. 이 방법은 화학적 소독법에서 보이는 내성균 출현의 우려도 없고, 세균, 진균 및 바이러스에 대하여 살멸효과를 보이지만, 인체에 직접 자외선을 조사하면 눈과 피부에 장해를 입힐 수 있으므로 주의가 필요하다.

2. 멸균법

2.1 가열법

가열법을 할 때에는 온도 또는 압력 등이 규정의 조건에 도달할 때까지의 가열시간은 이 방법이 적용되는 것의 성질, 용기의 크기 및 수납상태 등에 따라서 다르다. 또 이 방법을 실시하는 시간은 이 방법이 적용되는 것의 모든 부분이 규정의 온도에 도달한 다음부터 계산한다.

(ⅰ) 고압증기법

적당한 온도 및 압력의 포화 수증기 중에서 가열하여 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 주로 유리제품, 자기제품, 금속제품, 고무제품, 플라스틱 제품, 종이제품 또는 섬유제품, 물, 배지, 시약·시액 또는 액상의 검체 등 열에 안정한 물질에 사용한다.

보통 다음의 조건에서 멸균 한다.

115 ∼ 118℃   30 분간

121 ∼ 124℃   15 분간

126 ∼ 129℃   10 분간

(ⅱ) 건열법

건열 공기 중에서 가열하여 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 주로 유리제품, 자기제품, 금속제품, 광유, 유지류 또는 분체의 검체 등 열에 안정한 물질에 대하여 사용한다. 기체 또는 전기를 써서 직접 가열하든가 가열한 공기를 순환시키는 방식이 있다. 보통 다음의 조건에서 멸균 한다.

160 ∼ 170℃  120 분간

170 ∼ 180℃  60 분간

180 ∼ 190℃  30 분간

2.2 조사법

(ⅰ) 방사선법

방사선동위원소로부터 방출되는 γ 선 또는 전자가속기로부터 발생되는 전자선이나 제어방사선 (X 선)을 조사하여 미생물을 살멸하는 방법을 말한다.

이 방법은 주로 유리제품, 자기제품, 고무제품, 플라스틱제품 또는 섬유제품 등 방사선 조사에 견딜 수 있는 것에 대하여 사용한다. 이 방법이 적용되는 물질의 재질, 성상 또는 오염상태에 따라 선량을 조절하여 실시하고 적용한 다음의 품질의 변화에 특히 주의한다.

(ⅱ) 고주파법

고주파를 직접 조사하여 발생하는 열로 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 이 방법은 주로 물, 배지 또는 시액 등 고주파의 조사에 견딜 수 있는 것에 대하여 사용한다. 보통 2450 ± 50 MHz의 고주파가 사용된다.

2.3 기체법

멸균용 기체를 이용하여 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 멸균용 기체로서는 에틸렌옥시드 기체, 포름알데히드 기체, 과산화수소 기체 및 이산화염소기체 등이 사용된다. 기체의 종류에 따라 멸균시의 온도, 습도, 기체농도, 멸균시간이 다르며, 더구나 인체에 악영향을 초래하는 것도 있어서 사용 환경 및 잔류기체 농도에 대해서는 철저한 주의가 필요하다. 기체법 가운데에는 멸균한 다음의 미생물 사멸을 정량적으로 측정 또는 추측할 수 없는 것도 있다.

2.4 여과법

적당한 여과장치를 써서 여과하여 미생물을 제거하는 방법을 말한다. 이 방법은 주로 기체, 물 또는 가용성이며 열에 불안정한 물질을 함유하는 배지, 시액 등에 대하여 사용한다. 보통 멸균용 필터에는 공경 0.22 ㎛ 이하의 필터가 사용되지만, 이 여과법에서는 공경 0.45 ㎛ 이하의 필터의 사용도 허용된다.

의약품등 시험방법 밸리데이션 가이드라인

I. 목적

이 가이드라인은 식품의약품안전처고시 「의약품의 품목허가·신고·심사 규정」 등 의약품·의약외품의 제조·수입품목허가(신고)신청 및 품질관리를 위하여 필요한 시험방법에 대한 밸리데이션 실시방법을 구체적으로 제시함을 목적으로 한다.

II. 서론

의약품등의 시험방법에 대한 밸리데이션을 실시하는 목적은 의약품등의 품질관리시험에 이용하는 시험방법이 의도한 목적에 적합한 시험방법임을 증명하는 것이다.

이 가이드라인에서는 각각의 시험방법에 관한 밸리데이션 파라미터를 설정하는 방법을 제시하고자 한다. 이 가이드라인에 제시된 밸리데이션이 적용되는 시험방법의 범위는 다음과 같다.

1) 의약품 등의 원료 규격에 설정된 확인시험

2) 순도시험: 불순물의 정량시험 및 한도시험

3) 정량시험: 원료 또는 제품 중 유효성분, 제품 중 기타 특정 성분의 정량시험, 제제균일성시험, 용출시험 중 분석법

평가되어야 할 밸리데이션 파라미터는 시험방법의 목적에 따라 결정되므로 시험방법의 목적이 명확하여야 한다. 밸리데이션 파라미터로는 특이성, 정확성, 정밀성, 검출한계, 정량한계, 직선성, 범위 및 완건성이 있고 각 시험방법의 목적에 맞는 밸리데이션 파라미터를 선정하여 평가한다.

한편, 원료약품의 제조방법, 제제의 조성 및 시험방법이 변경되는 경우에는 재밸리데이션을 하는데, 변경되는 사항 및 정도에 따라 재밸리데이션 정도가 달라진다.

또한 이 가이드라인에서 규정하는 방법이 아닌 다른 밸리데이션 방법을 사용할 수도 있으나 시험방법의 목적에 적절한 방법임을 입증하여야 한다.

III. 용어 정의

1. 시험방법(Analytical Procedure)

분석을 하기 위해 필요한 상세히 기술된 일련의 시험 과정을 말한다. 확인시험, 순도시험, 정량시험 등에 사용된 분석대상물질, 검체, 표준품, 시약 및 시액, 분석 장비의 사용, 검량선 작성, 계산식의 이용 등을 포함한다.

- 시험방법 밸리데이션(Validation of Analytical Procedure)이란 의약품등의 품질관리를 위한 시험방법의 타당성을 미리 확인하는 과정을 말한다.

- 확인시험(Identification Test)이란 검체 중 분석대상 물질을 확인하는 시험을 말하며, 일반적으로 검체의 물리화학적 특성(스펙트럼, 크로마토그래프법에서 얻어지는 정보, 화학적 반응성 등)을 표준품의 특성과 비교하는 방법을 이용한다.

- 순도시험(Purity Test)이란 검체 중 유연물질, 중금속, 잔류용매 등 불순물의 존재 정도를 정확하게 측정하는 시험을 말하며 정량시험과 한도시험이 있다.

- 함량 또는 역가시험(Assay: Content or Potency)이란 검체 중에 존재하는 분석대상물질의 양 또는 역가를 정확하게 측정하는 시험을 말한다. 즉, 원료 또는 제제 중의 주요성분(주성분, 유효성분, 생리활성성분)이나 특정 성분(예: 안정제 또는 보존제 등 첨가제)의 함량을 측정한다. 용출시험 중의 정량 분석과정도 포함된다.

2. 특이성 (Specificity)

특이성(Specificity)이란 불순물, 분해물, 배합성분 등의 혼재 상태에서 분석대상물질을 선택적으로 정확하게 측정할 수 있는 능력을 말한다. 시험방법의 특이성이 부족할 경우 다른 보조적인 시험방법으로 보완될 수 있다.

3. 정확성(Accuracy)

정확성(Accuracy)이란 측정값이 이미 알고 있는 참값이나 표준값에 근접한 정도를 말한다.

4. 정밀성(Precision)

정밀성(Precision)이란 균일한 검체로부터 여러 번 채취하여 얻은 검체를 정해진 조건에 따라 측정하였을 때 각각의 측정값들 사이의 근접성(분산정도)을 말한다. 정밀성은 반복성(병행정밀성), 실험실내 정밀성 및 실험실간 정밀성의 세가지로 검토될 수 있다.

- 반복성(병행정밀성, Repeatability)이란 동일 실험실내에서 동일한 시험자가 동일한 장치와 기구, 동일제조번호와 시약, 기타 동일 조작 조건하에서 균일한 검체로부터 얻은 복수의 검체를 짧은 시간차로 반복분석 실험하여 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다. Intra-assay precision이라고도 한다.

- 실험실내 정밀성(Intermediate Precision)이란 동일 실험실내에서 다른 실험일, 다른 시험자, 다른 기구 또는 장비 등을 이용하여 분석 실험하여 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다.

- 실험실간 정밀성(Reproducibility)이란 일반적으로 표준화된 시험방법을 사용한 공동연구에 적용되는데, 서로 다른 실험실에서 하나의 동일한 검체로부터 얻은 측정값들 사이의 근접성을 말한다.

5. 검출한계(Detection Limit)

검출한계(Detection Limit)란 검체 중에 존재하는 분석대상물질의 검출 가능한 최소량을 말하며, 반드시 정량가능할 필요는 없다.

6. 정량한계(Quantitation Limit)

정량한계(Quantitation Limit)란 적절한 정밀성과 정확성을 가진 정량값으로 표현할 수 있는 검체 중 분석대상물질의 최소량을 말한다. 분석대상물질을 미량으로 함유하는 검체의 정량시험이나 특히 불순물, 분해생성물 결정에 사용되는 정량시험의 밸리데이션 파라미터이다.

7. 직선성(Linearity)

시험방법의 직선성(Linearity)이란 검체 중 분석대상물질의 양(또는 농도)에 비례하여 일정 범위 내에 직선적인 측정값을 얻어낼 수 있는 능력을 말한다.

8. 범위(Range)

범위(Range)란 적절한 정밀성, 정확성 및 직선성을 충분히 제시할 수 있는 검체 중 분석대상물질 양(또는 농도)의 하한 및 상한값 사이의 영역을 말한다.

9. 완건성(Robustness)

시험방법의 완건성(Robustness)이란 시험방법의 조건이 일부 의도적으로 변경되었을 때 측정값이 영향을 받지 않는지에 대한 척도를 말한다. 시험방법이 통상 사용되는 동안 그 시험방법을 얼마나 신뢰할 수 있는 지에 대한 지표이다.

IV. 시험방법 밸리데이션의 실시

시험방법 밸리데이션을 위해서는 우선 시험방법의 적정성에 관한 종합적이고 신뢰성 있는 실험계획을 수립하고 밸리데이션 과정에서 얻어진 모든 데이터 및 밸리데이션 파라미터를 이용하여 그 적정성 여부를 평가한다. 밸리데이션의 과정에서 얻어진 모든 관련 데이터 및 밸리데이션 파라미터를 산출하기 위해 사용된 계산공식이 제출되어야 하며 적절히 설명되어야 한다. 확인시험, 순도시험, 정량시험 등의 시험방법별로 설정되어야 할 밸리데이션 파라미터는 별표1과 같다.

밸리데이션 수행 시에 사용하는 표준품은 순도를 포함하여 물리·화학·생물학적 특성이 명확히 설명되어야 한다. 어느 정도 수준의 순도를 가진 표준품이 요구되는지는 시험방법의 사용목적에 따른다.

1. 특이성(Specificity)

확인시험, 순도시험 및 정량시험의 밸리데이션에서는 특이성이 평가되어야 한다. 특이성을 입증하기 위한 방법은 시험방법이 적용되는 목적에 따라 다르다.

어떤 시험방법이 특정의 분석대상물질에 대해서 특이적이고, 완벽하게 구별할 수 있는 방법임을 입증하는 것이 항상 가능하지는 않다.

이러한 경우에는 분석대상물질을 충분히 구별하기 위해 두 개 혹은 그 이상의 시험방법을 조합하는 것이 권장된다.

가. 확인시험(Identification)

확인시험은 구조적으로 유사한 화합물들이 공존시 이를 식별할 수 있는 방법이어야 한다. 시험방법의 식별 능력은 분석대상물질을 함유한 검체에서 기존의 표준물질과 비교시 양성의 시험결과를 얻고, 분석대상물질을 포함하지 않은 검체에서는 음성의 시험결과를 얻음으로써 확인할 수 있다. 추가적으로 분석대상물질과 구조적으로 유사한 물질 또는 분석대상물질과 밀접한 관련성이 있는 물질에 확인시험을 적용하여 양성의 반응을 얻을 수 없다는 것을 확인해도 된다. 특이성 검토 시 시험방법을 실시하는데 있어서 일어날 수 있는 간섭을 과학적으로 판단하여, 위와 같이 간섭을 일으킬 수 있는 물질을 선택하여야 한다.

나. 정량시험과 순도시험

크로마토그래프법에서는 특이성을 입증하기 위해 대표성 있는 크로마토그램을 제시하여야 하며 개개의 성분들이 크로마토그램에 적절하게 표시되어야 한다. 이는 다른 분리 분석법의 경우에서도 마찬가지이다.

크로마토그래프법에서는 성분이 서로 분리되고 있음을 나타내는 분리한계(Critical Separation)가 평가되어야 한다. 특이성을 나타내기 위해서 서로 가장 근접하게 용리하는 2개 성분의 분리도를 이용하여 분리한계를 나타낼 수 있다.

비특이적인 정량시험(non-specific assay)이 사용될 때는 별도의 보조적 시험방법을 사용하여 종합적으로 특이성을 증명 할 수 있다. 예를 들면, 원료의약품의 출하시험으로 실시하는 정량시험에 적정법(titration)이 적용되는 경우에는 그 정량시험에 적당한 순도시험을 실시하여 검토함으로써 특이성을 증명할 수 있다.

이러한 방법은 정량시험과 순도시험에 동일하게 적용 할 수 있다.

1) 유연물질 표준품 보유 시

유연물질 또는 첨가제가 있는 상황에서 정량시험은 분석대상물질에 특이적이어야 한다. 실제로 원료의약품 또는 제제에 적당한 농도의 유연물질이나 첨가제를 첨가했을 때의 정량 시험결과가 이러한 물질이 첨가되지 않을 때의 시험결과와 비교하여 영향을 받지 않는다는 것을 보여줌으로써 특이성을 입증할 수 있다.

순도시험에서는 원료의약품 또는 제제에 적당한 농도의 유연물질을 첨가하여 이들 유연물질이 서로 분리되거나 유연물질이 검체 중에 존재하는 다른 성분으로부터 분리되는 것을 제시함으로써 특이성을 입증할 수 있다.

2) 유연물질 표준품 미보유시

유연물질의 표준품을 확보할 수 없는 경우에는 유연물질을 포함한 검체에 대하여 밸리데이션 하고자 하는 시험방법으로 측정한 결과와 이미 입증된 다른 시험방법으로 측정한 결과를 비교함으로써 특이성을 입증할 수 있다. 여기서 이미 입증된 다른 시험방법의 예로는, 약전에 기재된 방법 또는 다른 밸리데이션된 시험방법이 있다. 필요에 따라서, 유연물질 발생이 가능한 가혹조건(빛, 열, 습도, 산 또는 염기 가수분해 및 산화)에 노출된 검체를 이용할 수도 있다.

· 정량시험에서는 2개의 정량 시험결과를 비교한다.

· 순도시험에서는 유연물질 프로파일을 비교한다.

크로마토그램상의 분석대상물질의 피크가 다른 성분들로부터 유래하지 않는다는 것을 입증하기 위해서는 다이오드 어레이(Diode array)나 질량분석기(MS) 등을 검출기로 이용하는 피크순도시험이 유용하다.

2. 직선성(Linearity)

시험방법에서 정하는 모든 범위(3. 범위 참조)에 대해 직선성을 확인하여야 한다. 표준원액을 희석하는 방법으로 원료의약품에 대해 직접적으로 직선성을 증명할 수 있으며 제제 구성성분들을 개별 칭량하여 조제한 혼합물을 가지고 직선성을 증명할 수 있다. 두 번째 방법은 범위 설정시에 고려될 수 있다.

신호를 분석대상물질의 농도 또는 함량에 대한 함수로 그래프를 작성하여 시각적으로 평가하여야 한다. 직선성이 확인되는 경우, 최소자승법에 의한 회귀직선의 계산과 같은 통계학적 방법을 이용해 측정 결과를 평가한다. 분석 실측치와 검체농도의 직선성을 얻기 위해서 필요시 회귀분석을 하기 전에 측정데이터를 수학적으로 변환시킬 필요가 있을 수 있다.

회귀직선으로부터 얻을 수 있는 정보는 직선성의 정도를 수학적으로 평가할 때 도움이 된다.

상관계수(correlation coefficient), y－절편, 회귀직선의 기울기 및 잔차제곱의 합(residual sum of square) 등의 결과도 기재하여야 한다. 데이터에 대한 그래프도 작성하여 기재하여야 한다. 실측치와 회귀직선상의 예측치와의 차이를 분석하는 것도 직선성을 평가하는데 있어서 도움이 된다.

면역측정법(Immunoassay)과 같이 어떤 시험방법은 수학적 변환을 하여도 직선성이 나타나지 않는다. 이러한 경우, 분석결과는 검체 중의 분석대상물질의 농도(또는 함량)에 대하여 적절한 함수(이론식 또는 근사식)로 표현한다.

직선성을 입증하기 위해서는 적어도 다섯 개 농도의 검체를 사용한다. 그렇지 않은 경우 그 방법의 타당성에 대한 근거를 제시하여야 한다.

3. 범위(Range)

일반적으로 범위(Range)는 직선성 평가 시 결정되고, 시험방법이 적용되는 목적에 따라 달라질 수 있다. 규정하는 범위 내 또는 그 범위의 하한 및 상한 농도를 포함한 검체를 이용하여 시험방법의 직선성, 정확성 및 정밀성을 확인함으로써 범위의 타당성을 입증한다.

최소로 규정하는 범위는 다음과 같다.

가. 원료의약품 또는 제제의 정량시험

- 일반적으로 시험농도의 80 ~ 120%.

나. 제제균일성시험

- 정량분무흡입제(metered dose inhalers)등과  같이 제형의 특성에 근거하여 더 넓은 범위를 규정하여야 하는 경우를 제외하고는, 적어도 시험농도의 70 ~ 130%.

다. 용출시험

- 제제의 기준 및 시험방법 중 설정된 용출시험기준 범위의 ± 20%.

- 예를 들어, 방출제어제제의 규격이 1시간 후에 20%, 24시간 후에 90%라고 규정되어 있다면 밸리데이션해야 할 범위는 표시량의 0 ~ 110%이다.

라. 유연물질의 정량시험

- 해당 유연물질의 보고수준부터 설정된 기준의 120% 까지

마. 활성이 특히 강하거나 독성 및 예기치 못한 약리 작용을 나타내는 것으로 알려진 유연물질의 검출/정량한계는 그 유연물질이 관리되어야 할 한도를 고려하여 설정되어야 한다. 의약품등의 개발 단계에서 행해지는 순도시험에 이용되는 시험방법을 밸리데이션하는 경우, 예측되는 유연물질의 한도치 근처를 범위로 하여 평가하는 것이 좋다.

바. 유효성분의 정량법과 순도시험이 하나의 시험으로 동시에 행해져 유효성분 표시량의 100%를 함유한 검체만 사용되는 경우, 해당 유연물질의 보고수준부터 함량 시험 기준의 120% 까지 직선성이 평가되어야 한다.

4. 정확성(Accuracy)

정확성은 시험방법이 규정하는 모든 범위에서 입증되어야 한다.

가.　정량시험

(1) 원료의약품

정확성을 결정하기 위해서 다음과 같은 몇 가지의 방법을 이용할 수 있다.

(가) 참값을 알고 있는 경우

순도를 이미 알고 있는 검체(예를 들면, 표준품)에 대해서 밸리데이션하려 하는 시험방법을 적용한다.

(나) 정확성이 알려진 기존의 시험방법이 존재하는 경우

밸리데이션하려 하는 시험방법에 의한 시험결과와 정확성이 알려진 기존의 시험방법에 의한 시험결과를 비교한다.

(다) 정밀성, 직선성 및 특이성이 입증이 되면, 이로부터 정확성을 추론할 수 있다.

(2) 제제

정확성을 평가하기 위하여 다음과 같은 몇 가지의 방법을 이용할 수 있다.

(가) 제제성분의 혼합물에 분석하는 원료약품의 기지량을 첨가하고 이것을 검체로 하여 밸리데이션하려 하는 시험방법을 적용한다.

(나) 확보 불가능한 제제성분이 있는 경우에는 다음의 어느 방법을 이용해도 좋다.

1) 제제에 기지량의 분석대상물질을 첨가하는 방법

2) 제제를 밸리데이션하려 하는 시험방법으로 측정한 결과와 정확성이 알려진 기존의 시험방법으로 측정한 결과를 비교하는 방법

(다) 정밀성, 직선성 및 특이성이 입증이 되면, 이로부터 정확성을 추론할 수 있다.

나. 유연물질의 정량시험

정확성은 기지량의 유연물질을 첨가한 원료약품 또는 제제 등의 검체를 정량함으로써 평가한다.

특정 불순물 또는 분해생성물을 확보하는 것이 불가능한 경우에는 밸리데이션 하려 하는 시험방법에 의한 시험결과를 정확성이 알려진 기존의 시험방법에 의한 시험결과와 비교해도 된다. 원료의약품의 반응계수(response factor)를 이용할 수도 있다.

모든 경우 주요 분석대상물질에 대하여 중량백분율 혹은 면적백분율 등 개개의 유연물질 양 또는 유연물질 총량의 결정방법을 명확히 기재하여야 한다.

다. 제출자료

정확성은 규정된 범위를 포함하여 최소한 3 농도에 대해서 시험방법의 전 조작을 적어도 9회 반복 측정(예를 들면, 3 농도에 대해서 분석법의 전 조작을 각 농도당 3 회씩 반복 측정)한 결과로부터 평가한다.

정확성은 기지량의 분석대상물질을 첨가한 검체를 정량하는 경우에는 회수율(%)로서 나타내고, 참값과 비교하는 경우에는 평균값과 참값으로 인증된 값과의 차이를 신뢰구간과 함께 기재한다.

5. 정밀성(Precision)

함량시험 및 유연물질의 정량시험을 밸리데이션할 때 정밀성 평가가 포함된다.

가. 반복성(병행정밀성, Repeatability)

반복성은 다음과 같은 방법으로 평가할 수 있다.

(1) 규정된 범위를 포함한 농도에 대해 적어도 9회 반복하여 측정한다.(예를 들면, 3농도에 대해서 시험방법의 전 조작을 각 농도 3회씩 반복 측정한다.)

(2) 시험농도의 100 %에 해당하는 농도로 시험방법의 전 조작을 적어도 6회 반복 측정한다.

나. 실험실내 정밀성(Intermediate precision)

실험실내 정밀성의 평가범위는 시험방법이 사용되는 상황에 따라 정해지며 정밀성에 미치는 여러 가지 요인에 대한 영향을 확인할 필요가 있다. 평가가 필요한 대표적인 변동요인은 실험일, 시험자, 시험장비 등이다. 이러한 요인들 각각에 대해 개별적으로 시험을 실시할 필요는 없다.

다. 실험실간 정밀성(재현성, Reproducibility)

재현성은 실험실간 실험(inter-laboratory trial)에 의해 평가된다. 약전에 시험방법을 수재하는 등 시험방법을 표준화할 필요가 있을 경우에는 재현성의 평가가 필요하다. 실험실간 정밀성 자료는 허가시 제출자료에 포함되지 않는다.

라. 제출자료

각각의 정밀성 평가 자료마다 표준편차, 상대표준편차(변동 계수)및 신뢰구간을 기재한다.

6. 검출한계(Detection limit)

시험방법이 기기분석인지 아닌지에 따라 검출한계를 구하기 위한 여러 가지 방법들이 사용 가능하다. 따라서 다음에 제시하는 방법 이외의 다른 방법을 이용할 수도 있다.

가. 시각적 평가에 근거하는 방법

기기를 사용하지 않는 시험방법 뿐 아니라 기기 분석법에 대해서도 시각적으로 평가할 수 있다.

검출한계는 기지량의 분석대상물질을 함유한 검체를 분석하고 그 분석대상물질을 확실히 검출할 수 있는 최저의 농도를 확인함으로써 결정된다.

나. 신호 대 잡음(signal-to-noise)에 근거하는 방법

이 방법은 바탕선에 잡음이 있는 경우의 시험방법에 적용한다. 기지의 저농도 분석대상물질을 함유하는 검체와 공시험 검체의 신호를 비교하여 검출할 수 있는 분석대상물질의 최저농도를 설정함으로써 신호 대 잡음비를 구할 수 있다. 검출한계를 산출하는데 있어, 신호 대 잡음비는 일반적으로 3:1 혹은 2:1이 적당하다.

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법

검출한계(DL)를 다음 식에 의해 결정할 수 있다.

DL = 3.3 * σ／S

여기서 σ는 반응의 표준편차를, S는 검량선의 기울기를 말한다.

기울기 S는 분석대상물질의 검량선으로부터 구할 수 있다. 표준편차 σ를 구하는 방법은 다음과 같은 여러 가지 방법이 있다.

(1) 공시험 검체의 표준편차에 근거하는 방법

적당한 수의 공시험 검체를 분석하여 이 측정값의 표준편차를 계산함으로써 시험방법의 기본(background) 반응 정도를 측정한다.

(2) 검량선에 근거하는 방법

검량선은 검출한계에 근접한 분석대상물질을 함유하는 검체를 가지고 작성되어야 한다. 회귀직선에서 잔차의 표준편차(residual standard deviation) 또는 회귀직선(regression line)에서 y 절편의 표준편차를 표준편차 σ로서 이용할 수 있다.

라. 제출자료

검출한계와 함께 검출한계를 구할 때 사용한 방법을 기재하여야 한다. 시각적 평가 또는 신호 대 잡음비에 의해 검출한계를 결정할 경우에는 그 타당성을 입증할 수 있는 크로마토그램을 제출한다.

계산(calculation) 또는 외삽(extrapolation)에 의해 검출한계를 산출하였을 경우에는 검출한계 농도 혹은 그 부근 농도로 조제한 적당한 수의 검체에 대한 분석을 실시하여 제출값의 타당성을 입증한다.

7. 정량한계(Quantitation limit)

시험방법이 기기분석인지 아닌지에 따라 정량한계를 구하기 위한 여러 가지 방법들이 사용 가능하다. 따라서 다음에 제시하는 방법 이외의 다른 방법을 이용할 수도 있다.

가. 시각적 평가에 근거하는 방법

기기를 사용하지 않는 시험방법 뿐 아니라 기기 분석법에 대해서도 시각적으로 평가 할 수 있다.

정량한계는 기지농도의 분석대상물질을 함유하는 검체를 분석하고, 정확성과 정밀성이 확보된 분석대상물질을 정량할 수 있는 최저농도를 설정하는 것이다.

나. 신호 대 잡음(signal-to-noise)에 근거하는 방법

이 방법은 바탕선에 잡음이 있는 시험방법에만 적용할 수 있다. 기지의 저농도 분석대상물질을 함유하는 검체와 공시험 검체의 신호를 비교하여 정량할 수 있는 분석대상물질의 최저농도를 설정함으로써 신호 대 잡음비를 구할 수 있다. 정량한계를 산출하는데 있어, 신호 대 잡음비는 일반적으로 10:1이 적당하다.

다. 반응의 표준편차와 검량선의 기울기에 근거하는 방법

정량한계(QL)는 다음 식에 의해 결정할 수 있다.

QL = 10 * σ／S

여기서 σ는 반응의 표준편차를, S는 검량선의 기울기를 말한다.

기울기 S는 분석대상물질의 검량선으로부터 구할 수 있다. 표준편차(σ)에 대해서는 여러 가지의 측정방법이 있고 그 예는 다음과 같다.

(1) 공시험 검체의 표준편차에 근거하는 방법

적당한 수의 공시험 검체를 분석하여 이 측정값의 표준편차를 계산함으로써 시험방법의 기본(background) 반응 정도를 측정한다.

(2) 검량선에 근거하는 방법

검량선은 정량한계에 근접한 분석대상물질을 함유하는 검체를 가지고 작성되어야 한다. 회귀직선에서 잔차의 표준편차(residual standard deviation) 또는 회귀직선(regression line)에서 y 절편의 표준편차를 표준편차 σ로서 이용할 수 있다.

라. 제출자료

정량한계와 함께 정량한계를 구할 때 사용한 방법을 첨부자료에 기재하여야 한다.

계산된 정량한계는 정량한계 혹은 그 부근 농도로 조제된 적당한 수의 검체에 대해 분석을 실시하여 그 값의 타당함을 입증하여야 한다.

8. 완건성(Robustness)

완건성은 시험방법을 개발하는 단계에서 평가되어야 하며, 그 평가방법은 개발하려고 하는 시험방법의 형태에 따라 다르다. 완건성은 의도적으로 분석조건에 변동을 주었을 때 분석에 대한 신뢰성을 보여야 한다.

만약, 측정값이 분석조건 변경에 따라 영향을 받기 쉬운 경우라면, 분석조건을 적절히 관리하거나 시험방법 중에 주의 문구를 포함시킬 필요가 있다. 완건성을 평가함에 따라 시스템적합성에 관한 일련의 파라미터(예를 들면, 분리도)를 확립할 수 있다. 이러한 파라미터를 확인함으로써 일상의 분석에서 시험방법의 타당성이 유지되고 있음을 보증할 수 있다.

대표적인 변동인자는 다음과 같다.

가. 여러 가지의 시험방법에 공통되는 변동인자

· 시험용액의 안정성

· 추출시간

나. 액체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자

· 이동상의 pH

· 이동상 조성(composition)의 변경

· 칼럼의 변경(different lots or suppliers)

· 온도

· 유량

다. 기체크로마토그래프법의 대표적인 변동인자

· 칼럼의 변경(different lots or suppliers)

· 온도

· 유량

9. 시스템적합성 시험(System suitability testing)

시스템적합성 시험은 많은 분석법을 포괄하고 있다. 이는 시험장비, 전자공학적 기술, 분석조작 및 검체가 하나의 포괄적인 통합된 시스템을 구성하여 평가될 수 있다는 개념에 기초한다. 시험방법에 대해 확립해야할 시스템적합성의 파라미터는 밸리데이션 하고자 하는 시험방법에 따라 다르다. 추가적인 사항은 약전을 참조한다.

별표 1)

시험방법에 따라 평가해야 할 밸리데이션 파라미터

시험방법 종류 밸리데이션 파라미터	확인시험	순도시험		정량시험 -용출시험(중 정량 시험에 한함) -함량시험/효능시험
		정량시험	한도시험
정확성 정밀성 반복성 실험실내 정밀성 특이성(2) 검출한계 정량한계 직선성 범위	- - - + - - - -	+ + +(1) + -(3) + + +	- - - + + - - -	+ + +(1) + - - + +

- 일반적으로 평가할 필요가 없는 것

+ 일반적으로 평가가 필요한 것

(1) 실험실간 정밀성(재현성, Reproducibility)이 평가되는 경우 실험실내 정밀성 (Intermediate precision)은 필요하지 않음

(2) 한 가지 분석법으로 특이성을 입증할 수 없는 경우 다른 분석법을 추가로 사용하여 특이성을 입증할 수 있음

(3) 필요시 설정

의약품 잔류용매 기준 가이드라인

1. 개 요

이 가이드라인은 환자의 안전을 위하여 의약품 중 잔류용매의 허용가능한 양을 권고하는 것을 목적으로 한다. 이 가이드라인에서는 독성이 적은 용매사용을 권장하고 일부 잔류용매에 대하여는 독성학적으로 허용기준을 정한다.

의약품 중 ‘잔류용매’라 함은 원료의약품(의약품의 주성분(유효성분), drug substances), 첨가제(주성분이외의 성분, excipients)의 제조공정 또는 제제(유효성분을 함유한 정제, 캅셀제, 좌제 등 실제로 투여되는 최종제품)의 제조공정에서 사용되거나 생성되는 휘발성 유기 화학물질을 말한다. 실제 생산공정에서 이용되는 기술로는 이들 용매를 완전히 제거할 수 없다. 적절한 용매선택은 원료의약품의 합성에서 수득률을 향상시키거나, 결정형, 순도, 용해도 등 물성을 결정하며,  때로 합성과정에서 결정적인 요소로 작용하기도 한다. 이 가이드라인은 첨가제로서 의도적으로 사용되는 용매 및 용매화물(solvates)은 대상으로 하지 않으나, 이 경우에도 제제 중의 용매의 함량을 평가하여 타당성을 제시하여야 한다.

모든 잔류용매는 치료적 유익성이 전혀 없기 때문에 제품규격, 우수 의약품 제조 및 품질관리기준(GMP) 또는 그 밖의 품질기준에 적합한 수준으로 제거되어야 한다. 제제 중에서는 안전성 자료에 의하여 인정되는 수준 이상의 잔류용매를 함유하여서는 안된다. 사용을 금지해야할 용매(분류 1, 표 1)는 위험성-유익성 평가로 타당성이 명확하게 인정되는 경우를 제외하고는 원료의약품, 첨가제 또는 제제의 제조 시 사용을 피해야 한다. 상대적으로 중대한 독성이 적은 용매(분류 2 , 표 2)는 잠재적인 이상반응으로부터 환자를 보호하기 위하여 그 잔류량을 규제하여야 한다. 이상적으로는 낮은 독성을 가진 용매(분류 3 표 3)를 사용하도록 한다. 이 가이드라인에 포함되는 용매의 목록은 부록 1에 게재되어 있다.

이 목록은 모든 용매를 망라한 것이 아니므로, 이외의 용매도 사용할 수 있다. 이러한 용매는 목록에 추가될 수 있다. 분류 1과 2의 권장값 또는 용매의 분류는 새로운 안전성 자료에 의하여 변경될 수 있다. 새로운 용매를 포함한 의약품 허가를 신청하는 경우에는 이 가이드라인, ICH Q3A(Impurities in New Drug Substances) 혹은 Q3B(Impurities in New Drug Products) 또는 이 3개의 가이드라인모두를 바탕으로 그 용매의 안전성을 보증할 수 있는 자료를 첨부할 필요가 있다.

2. 잔류용매에 관한 가이드라인의 적용 범위

이 가이드라인의 적용 대상은 원료의약품, 첨가제 및 제제 중 잔류용매이다. 따라서 제조 또는 정제공정 후에도 용매가 존재하는 경우 잔류용매시험을 실시해야 한다. 시험은 원료의약품, 첨가제 또는 제제의 제조 또는 정제공정에서 사용되거나 생성된 용매에 대해서만 실시하면 된다. 의약품 제조업자는 제제에 대한 시험을 실시하거나 제제의 제조 시 사용한 각각의 성분 중 잔류용매 함량을 합산하여 제제 중의 함량을 계산하는 적산적 방법을 활용하여도 된다. 만약 계산결과가 이 가이드라인의 권장값 이하이면 제제의 잔류용매 시험은 필요하지 아니하다. 계산된 값이 권장 값보다 높은 경우에는 그 용매의 함량이 제제화 공정에서 잔류허용량 이하로 낮추어졌는지 여부를 확인하기 위하여 제제를 시험할 필요가 있다. 그리고 제조공정 중에 용매가 사용된 경우, 그 제제에 대한 시험을 실시하여야 한다.

이 가이드라인은 임상시험단계에서 사용되는 새로운 원료의약품, 새로운 첨가제 또는 새로운 제제에 대하여는 적용하지 아니한다.

이 가이드라인은 모든 제형 및 투여경로의 의약품에 적용한다. 단기간(30일 이하) 투여 또는 국소적용 품목의 경우에는 각각의 사례별로 타당성이 인정될 경우 보다 높은 잔류량이 허용될 수 있다.

잔류용매에 관한 추가적인 정보는 부록 2에 게재되어 있다.

3. 일반원칙

3.1  위험성 평가에 따른 잔류용매의 분류

1일섭취내량(TDI, Tolerable Daily Intake)이라는 용어는 국제화학물질안전성프로그램 (IPCS, International Program on Chemical Safety)에서 독성이 있는 화학물질에 대한 노출한계를 규정하기 위하여 사용하는 용어이다. 1일섭취허용량(ADI, Acceptable Daily Intake)이라는 용어는 세계보건기구(WHO)와 그 외 국제적인 보건당국 및 관련단체 등에서 사용하는 용어이다. 이 가이드라인에서는 같은 물질의 1일섭취허용량(ADI)의 값으로 WHO 등이 정한 것과 다른 값을 나타내어 혼동을 주는 것을 피하기 위해 1일노출허용량(PDE, Permitted Daily Exposure)이라는 새로운 용어를 의약품유래 잔류용매의 허용섭취량으로 정의하여 사용한다.

이 가이드라인에서는 잔류용매를 인체에 미칠 수 있는 위험도로서 평가하여 아래와 같이 세 가지로 분류하였으며 일반명과 구조식을 부록1에 게재하였다.

분류 1 : 사용을 금지해야 할 용매
인체에 발암원성으로 알려져 있거나 강력하게 발암원성물질로 의심되며 환경에 유해한 용매

분류 2 : 잔류량을 규제해야 할 용매
유전독성은 나타내지 않으나 동물시험에서 발암성이 나타난 용매, 신경독성과 최기형성 등 발암성 이외의 비가역적인 독성을 나타낸 용매 및 기타 심각하지만 가역적인 독성이 의심되는 용매

분류 3 : 저독성 용매
사람에 대한 저독성이라고 생각되는 용매; 건강상의 이유로는 노출 제한농도를 설정할 필요는 없다. 분류 3의 용매는 50mg/일 이상의 1일노출 허용량(PDE)값을 갖는다.

3.2 노출한계 설정방법

잔류용매의 1일 노출한계 설정하는 방법은 부록 3에 게재되어 있다. 노출한계를 정하는데 사용되는 독성자료는 pharmeuropa, Vol. 9, No. 1, Supplement, April 1997에 공표되어 있다.

3.3 분류 2 용매의 한계 설정방법

분류 2 용매에 대해 제한농도를 설정하는 경우에는 다음 2가지 방법이 모두 가능하다.

방법 1 : 표 2의 ppm으로 표시된 제한농도를 사용한다. 이 값은 1일 투여량을 10g으로 가정하여 아래의 식 (1)을 사용하여 계산된 것이다.

식 (1) :

[eqn: rm 농도(ppm)~=` {1,000 TIMES 1일노출허용량(PDE)} over {투여량} ~~~(1)]

여기서 1일노출허용량(PDE)은 ㎎/일로, 투여량은 g/일로 한다.

이 제한농도는 모든 원료의약품, 첨가제 또는 제제에 적용된다. 따라서, 이 방법은 1일 투여량이 불분명하거나 일정하지 않은 경우에 적용한다. 만일 모든 원료의약품이나 첨가제가 이 방법 1에서 주어진 제한농도를 충족한다면, 이 성분들은 어떠한 비율로도 사용될 수 있다. 1일 투여량이 10g 이하인 경우에는 계산할 필요가 없다. 1일 투여량이 10g을 넘는 제제의 경우에는 방법 2를 적용하여야 한다.

방법 2 : 제제 중 각 성분이 모두 방법 1에 표시된 제한농도에 적합할 필요는 없다. 표2의 mg/일로 표시된 1일노출허용량(PDE)과 실제 1일최대투여량을 가지고 위의 식(1)을 사용하여 제제 중에 잔류가 허용되는 용매 함량을 계산할수 있다.

만약 제제중의 각성분의 잔류용매량이 계산된 최소값까지 감소한 것을 입증할 수 있다면 그 제한농도는 허용될 수 있다. 그 제한농도는 분석의 정밀성, 제조상의 능력, 제조공정에서 발생할 수 있는 편차를 고려하여 현실적이어야 하며, 의약품 제조에 관한 현행수준을 반영한 것이어야 한다.

방법 2를 적용하기 위해서는, 제제 중 각 성분에 존재하는 잔류용매의 총량이, 1일 섭취하는 용매량의 합계가 1일노출허용량(PDE) 이하이어야 한다.

다음은 제제 중의 아세토니트릴 잔류량을 구하기 위해 방법 1 및 방법 2를 적용한 예이다. 아세토니트릴의 1일노출허용량(PDE)은 4.1mg/일 (방법 1에서의 제한농도는410ppm)이다.

이 제제의 1일 최대투여량은 5.0g이며, 2 종류의 첨가제를 함유하고 있다. 이 제제의 조성 및 계산에 의해 구한 아세토니트릴 함량의 추정값(실제로 얻을 수 있는 값 중 최대값에 상당한다)는 다음과 같다.

성 분	분량	아세토니트릴함량	1일 노출량
원료의약품	0.3g	800ppm	0.24mg
첨가제 1	0.9g	400ppm	0.36mg
첨가제 2	3.8g	800ppm	3.04mg
제제	5.0g	728ppm	3.64mg

첨가제 1은 방법 1의 제한농도를 만족하지만 원료의약품, 첨가제 2 및 제제는 방법 1의 제한농도를 만족하지 못한다. 그러나, 이 제제는 방법 2의 1일노출허용량(PDE) 4.1㎎을 만족한다. 따라서 이 경우에는 이 가이드라인의 권장사항에 적합하다.

다음은 아세토니트릴을 잔류용매로 사용한 다른 예이다. 이 제제도 1일 최대투여량이 5g이고 2 종류의 첨가제를 함유하고 있다. 이 제제의 조성 및 계산된 아세토니트릴의 함량의 추정값(실제로 얻을 수 있는 값 중 최대값에 해당한다)는 다음의 표와 같다.

성분	분량	아세토니트릴함량	1일 노출량
원료의약품	0.3g	800ppm	0.24mg
첨가제 1	0.9g	2,000ppm	1.80mg
첨가제 2	3.8g	800ppm	3.04mg
제제	5.0g	1,016ppm	5.08mg

이 제제에서 각 성분 중 잔류용매의 합계는 방법 1의 제한농도 및 방법 2의 1일노출허용량 (PDE)을 모두 만족하지 못한다. 의약품제조업자는 제제화 공정에서 아세토니트릴의 양을 감소시킬 수 있는지 시험해야 하며, 만약 아세토니트릴의 양이 제제화 공정에서 권장값 이하로 감소되지 않은 경우에는 제제 중 아세토니트릴의 양을 감소시킬 수 있는 공정으로 바꾸어야 한다. 그럼에도 불구하고 이 가이드라인의 권장값을 만족시킬 수 없는 경우, 제조업자는 가이드라인에 권고된 수준으로 잔류용매의 양을 줄이기 위한 노력에 대한 요약자료, 권장값 이상임에도 용매사용의 필요성을 나타내는 위험성-유익성 평가 자료를 제출할 수 있다.

3.4 분석방법

잔류용매 분석법으로는 기체크로마토그래프법 등 크로마토그래프법이 일반적으로 이용된다. 잔류용매의 양을 결정할 수 있는 표준화된 방법으로 가급적 약전 등 공정서에 수재된 방법을 사용하여야 한다. 다만, 특별한 경우 제조업자는 밸리데이션 된 다른 가장 적절한 방법을 자유롭게 선택할 수 있다. 만약 분류3의 용매만 존재하는 경우라면 건조감량 등의 비특이적 방법을 사용할 수 있다.

잔류용매 분석법의 밸리데이션은 의약품등 시험방법의 밸리데이션에 대한 가이드라인에 따른다.

3.5 잔류용매의 보고 수준

의약품제조업자는 이 가이드라인에서 제시한 기준을 만족하기 위하여 첨가제나 원료의약품 중의 잔류용매 함량에 대한 정보가 필요하다. 다음은 첨가제나 원료의약품의 공급자가 의약품 제조업자에게 제공할 수 있는 정보의 예시이며, 공급자는 다음의 사항 중 적절한 것을 선택할 수 있다.

· 분류 3 용매만 존재한다고 생각되는 경우, 건조 감량이 0.5% 이하일 것

· 분류 2 용매(X,Y 등)만 존재한다고 생각되는 경우, 모든 용매가 방법 1의 제한농도 이하일 것.(이 경우 공급자는 X,Y등으로 나타내는 분류 2의 용매명칭을 표시할 필요가 있다.)

· 분류 2 용매(X,Y 등)와 분류 3 용매가 존재한다고 생각되는 경우, 분류 2 용매의 잔류량은 방법 1의 제한농도 이하이고 분류 3 용매의 잔류량은 0.5% 이하일 것.

만약 분류 1 용매가 존재한다고 생각되는 경우에는 이들 용매를 확인하고 정량하여야 한다.

‘존재한다고 생각된다.’는 것은 제조의 최종공정에서 사용된 용매 및 이전의 공정에서 사용되었지만 밸리데이션된 공정에 의해 언제나 제거가 가능하다고 할 수는 없는 용매이다.

만약 분류2와 분류3의 용매잔류량이 각각 방법 1의 제한농도 또는 0.5%보다 크면 이를 확인하고 정량하여야 한다.

4. 잔류용매의 제한

4.1 사용을 금지해야할 용매

분류 1의 용매는 심각한 독성 및 환경 유해성으로 인해 원료의약품, 첨가제 및 제제의 제조공정에서 사용하여서는 아니 된다. 만약 이 용매의 사용이 현저한 치료효과를 가진 제제를 제조하기 위하여 불가피하다면, 용매의 사용수준을 따로 정하지 않은 경우에는 표 1의 제한농도 이하이어야 한다. 트리클로로에탄(1,1,1-Trichloroethane)은 환경에 유해한 물질이기 때문에 표 1에 포함된다. 표 1에 나타낸 제한농도 1,500ppm은 안전성 자료 검토에 기초한 것이다.

표 1. 분류 1의 용매(의약품제조에서 사용을 금지해야 할 용매)

용 매	제한농도(ppm)	비고
벤젠	2	발암성
사염화탄소	4	독성 및 환경유해성
1,2-디클로로에탄	5	독성
1,1-디클로로에텐	8	독성
1,1,1-트리클로로에탄	1,500	환경유해성

4.2. 잔류량을 규제해야 할 용매

표 2의 용매는 그 고유의 독성 때문에 의약품 중 잔류를 규제하는 용매이다. 1일 노출허용량(PDE)은 0.1 mg/일 단위까지, 제한농도는 10 ppm 단위까지 표시하였다. 표에서 정해진 값은 측정할 때에 필요한 분석의 정밀성을 반영하는 것은 아니며, 정밀성은 시험방법을 밸리데이션할 때 결정하여야 한다.

표 2. 의약품 중 분류 2 용매

용 매	1일노출허용량 (PDE)(mg/일)	제한농도 (ppm)
아세토니트릴	4.1	410
클로로벤젠	3.6	360
클로로포름	0.6	60
크멘	0.7	70
시클로헥산	38.8	3,880
1,2-디클로로에텐	18.7	1,870
디클로로메탄	6.0	600
1,2-디메톡시에탄	1.0	100
N,N-디메틸아세트아미드	10.9	1,090
N,N-디메틸포름아미드	8.8	880
1,4-디옥산	3.8	380
2-에톡시에탄올	1.6	160
에틸렌글리콜	6.2	620
포름아미드	2.2	220
헥산	2.9	290
메탄올	30.0	3,000
2-메톡시에탄올	0.5	50
메틸부틸케톤	0.5	50
메틸시클로헥산	11.8	1,180
N-메틸피롤리돈	5.3	530
니트로메탄	0.5	50
피리딘	2.0	200
설폴란	1.6	160
테트라히드로푸란	7.2	720
테트랄린	1.0	100
톨루엔	8.9	890
1,1,2-트리클로로에텐	0.8	80
자일렌주1)	21.7	2,170

주1) 일반적으로 17% 에틸벤젠을 함유하는 60% m-자일렌, 14% p-자일렌, 9% o-자일렌

4.3 저독성 용매

분류 3의 용매(표 3)는 독성이 적고 인체에 미치는 위험 정도가 낮은 것이다. 분류 3은 의약품 중 일반적으로 인정되는 범위 내에서 인체에 유해하다고 알려진 용매는 포함되지 않는다. 그러나, 분류 3의 용매 중 많은 용매는 장기간의 독성이나 발암성에 대한 연구자료가 없다. 현재까지 입수된 자료에 의하면 분류 3의 용매는 급성 독성 또는 단기독성에서 저독성이며, 유전독성에서 음성을 나타내었다. 잔류 용매의 양이 1일 50㎎ 이하 (방법 1에서 5,000ppm이나 0.5%에 해당량)인 경우 타당성을 입증하는 자료 없이도 인정될 수 있다. 이보다 높은 잔류량에 대하여도 제조업자의 제조능력이나 우수 의약품 제조 및 품질관리기준(GMP)과 관련하여 현실적인 것으로 인정되는 경우 허용될 수 있다.

표 3. 분류 3의 용매 (우수 의약품 제조 및 품질관리기준 또는 그 밖의 품질기준에 따라 규제되어야 하는 용매)

아세트산	헵탄
아세톤	아세트산이소부틸
아니솔	아세트산이소프로필
1-부탄올	아세트산메틸
2-부탄올	3-메틸-1-부탄올
아세트산n-부틸	메틸에틸케톤
t-부틸메틸에테르	메틸이소부틸케톤
디메틸설폭시드	2-메틸-1-프로판올
에탄올	펜탄
아세트산에틸	1-펜탄올
디에틸에테르(에테르)	1-프로판올
포름산에틸	2-프로판올
포름산	아세트산프로필

또한, 원료의약품 제조시 마지막 제조공정 이전에 사용된 분류2 또는 분류3의 용매의 경우는 최종 원료에서 용매가 잔류하지 않음을 입증하는 자료를 제출할 경우, 원료의약품에 잔류용매 기준을 설정하지 않을 수 있다.

(제출자료 예) 불검출임을 확인할 수 있는 실생산 3 배치 시험 분석 자료 및 정량한계에 대한 자료. 분류2의 용매의 경우에는 중간체 규격 관리 또는 최종 원료 중 일정 배치 생산규모별 관리에 대한 자료 포함)

4.4 충분한 독성학적 자료가 없는 용매

다음의 용매(표 4)는 첨가제나 원료의약품 또는 제제의 제조업자가 관심을 가질 만한 용매이나, 1일노출허용량(PDE) 산출에 필요한 충분한 독성학적 자료가 없다. 따라서 제조업자는 의약품중 이 용매의 잔류수준에 대한 타당한 자료를 제시하여야 한다.

표 4. 충분한 독성학적 자료가 없는 용매

1,1-디에톡시프로판	메틸이소프필케톤
1,1-디메톡시메탄	메틸테트라히드로푸란
2,2-디메톡시프로판	석유에테르
이소옥탄	트리클로로아세트산
이소프로필에테르	트리플루오로아세트산

5. 용어의 정의

1. 유전독성이 있는 발암물질(genotoxic carcinogens) : 유전자나 염색체에 영향을 주는 발암성 물질

2. 최소작용량(lowest-observed effect level, LOEL) : 사람이나 동물에게 노출시 어떤 작용의 발현빈도나 정도를 생물학적으로 유의하게 증가시키는 최소 용량

3. 변형계수(modifying factor) : 독성학자의 전문적인 판단에 의해 정해지고 실제 자료를 사람의 안전성에 외삽하기 위한 계수

4. 신경독성(neurotoxicity) : 신경계에 유해한 작용을 일으킬 수 있는 물질의 성질

5. 최대무작용량(no-observed-effect level, NOEL) : 사람이나 동물에 노출시 어떤 작용의 발현 빈도나 정도를 생물학적으로 유의하게 증가시키지 않는 최대 용량

6. 1일노출허용량(permitted daily exposure, PDE) : 의약품에서 하루에 섭취가 허용되는 잔류용매의 최대량

7. 가역적 독성(reversible toxicity) : 어떤 물질에 노출되면 나타나고  노출이 끝나면 사라지는 유해작용

8. 사람에 있어서 발암성이 강하게 의심되는 물질 (strongly suspected human carcinogen) : 사람에 있어서 역학적으로 발암성의 증거는 없지만 유전독성 자료가 양성이고 설치류에 있어 명백한 발암성이 있는 물질

9. 태자독성(teratogenicity) : 임신 중 그 물질을 투여하는 경우 태아에 형태학적 이상을 일으키는 성질

부록 1. 가이드라인에 포함된 용매의 목록

용매명	별 명	분류
아세트산	Ethanoic acid	분류 3
아세톤	2-Propanone ; Propan-2-one	분류 3
아세토니트릴		분류 2
아니솔	Methoxybenzene	분류 3
벤젠	Benzol	분류 1
1-부탄올	n-Butyl alcohol ; Butan-1-ol	분류 3
2-부탄올	sec-Butyl alcohol ; Butan-2-ol	분류 3
아세트산n-부틸	Acetic acid butyl ester	분류 3
t-부틸메틸에테르	2-Methoxy-2-methyl-propane	분류 3
사염화탄소	Tetrachloromethane	분류 1
클로로벤젠		분류 2
클로로포름	Trichloromethane	분류 2
크멘	Isopropylbenzene ; (1-Methyl)ethylbenzene	분류 2
시클로헥산	Hexamethylene	분류 2
1,2-디클로로에탄	sym-Dichloroethane ; Ethylene dichloride; Ethylene chloride	분류 1
1,1-디클로로에텐	1, 1-Dichloroethylene ; Vinylidene chloride	분류 1
1,2-디클로로에텐	1, 2-Dichloroethylene ; Acetylenedichloride	분류 2
디클로로메탄	Methylene chloride	분류 2
1,2 -디메톡시에탄	Ethyleneglycol dimethyl ether ; Monoglyme ; Dimethyl Cellosolve	분류 2
N, N-디메틸아세트아미드	DMA	분류 2
N, N-디메틸포름아미드	DMF	분류 2
디메틸설폭시드	Methylsulfinylmethane ; Methyl sulfoxide ; DMSO	분류 3
1,4-디옥산	p-Dioxane ; [1.4] Dioxane	분류 2
에탄올	Ethyl alcohol	분류 3
2-에톡시에탄올	Cellosolve	분류 2
아세트산에틸	Acetic acid ethyl ester	분류 3
에틸렌글리콜	1,2-Dihydroxyethane ; 1.2-Ethanediol	분류 2
디에틸에테르	Diethyl ether ; Ethoxyethane; 1.1'-Oxybisethane	분류 3
포름산에틸	Formic acid ethyl ester	분류 3
포름아미드	Methanamide	분류 2
포름산		분류 3
헵탄	n-Heptane	분류 3
헥산	n-Hexane	분류 2
아세트산이소부틸	Acetic acid isobutyl ester	분류 3
아세트산이소프로필	Acetic acid isopropyl ester	분류 3
메탄올	Methyl alcohol	분류 2
2-메톡시에탄올	Methyl Cellosolve	분류 2
아세트산메틸	Acetic acid methyl ester	분류 3
3-메틸-1-부탄올	Isoamyl alcohol ; Isopentyl alcohol ; 3-Methylbutan-1-ol	분류 3
메틸부틸케톤	2-Hexanone ; Hexan-2-one	분류 2
메틸시클로헥산	Cyclohexylmethane	분류 2
메틸에틸케톤	2-Butanone ; MEK ; Butan-2-one	분류 3
메틸이소부틸케톤	4-Methylpentan-2-one ; 4-Methyl-2-pentanone ; MIBK	분류 3
2-메틸-1-프로판올	Isobutyl alcohol ; 2-Methylpropan-1-ol	분류 3
N-메틸피롤리돈	1-Methylpyrrolidin-2-one ; 1-Methyl-2-pyrrolidinone	분류 2
니트로메탄		분류 2
펜탄	n-Pentane	분류 3
1-펜탄올	Amyl alcohol ; Pentan-1-ol ; Pentyl alcohol	분류 3
1-프로판올	Propan-1-ol ; Propyl alcohol	분류 3
2-프로판올	Propan-2-ol ; Isopropyl alcohol	분류 3
아세트산프로필	Acetic acid propyl ester	분류 3
피리딘		분류 2
설폴란	Tetrahydrothiophene 1.1-dioxide	분류 2
테트라히드로푸란	Tetramethylene oxide ; Oxacyclopentane	분류 2
테트랄린	1,2,3,4-Tetrahydro-naphthalene	분류 2
톨루엔	Methylbenzene	분류 2
1, 1, 1- 트리클로로에탄	Methylchloroform	분류 1
1, 1, 2- 트리클로로에텐	Trichloroethene	분류 2
자일렌주)	Dimethybenzene ; Xylol	분류 2

주) 일반적으로 17% 에틸벤젠을 함유하는 60% m-자일렌, 14% p-자일렌, 9% o-자일렌

부록 2. 부가적인 배경

2.1 휘발성 유기 용매의 환경 규제

의약품의 제조에 사용되는 일부 잔류용매는 환경보건기준 (EHC, Environmental Health Criteria)의 모노그래프와 통합위해정보시스템(IRIS, Integrated Risk Information System)에 독성 화학물질로 수재되어 있다. 국제 화학물질 안전성 프로그램 (IPCS, International Programme on Chemical Safety)과 미국 환경청(US EPA) 및 미국 식약청(US FDA) 같은 기구의 활동 목적 중에는 허용 노출수준을 결정하는 것이 포함되어 있다. 최종목표는 화학물질이 장기간 환경에 노출되었을 때 유발될 수 있는 유해한 효과로부터 사람의 건강과 환경을 보호하는 데에 있다. 최대안전노출한계(maximum safe exposure limits)를 설정할 때는 일반적으로 장기독성시험자료를 바탕으로 한다.

장기독성시험자료를 활용할 수 없는 경우에는 짧은 기간의 독성시험자료에 보다 큰 안전계수(safety factor)를 이용하는 등 변경을 하여 이용할 수 있다. 이러한 환경규제에 관한 문서에 기재되어 있는 접근법은 일상적인 환경(예 : 대기, 식품, 음용수 기타 매체 등)에서 일반인의 장기간 또는 일생에 걸친 노출을 주로 고려한 것이다.

2.2 의약품 중 잔류용매

이 가이드라인의 노출한계(exposure limit)는 EHC와 IRIS의 모노그래프에서 서술된 방법론과 독성 자료에 의하여 설정된 것이다. 그러나, 노출한계 설정시 의약품의 합성이나 제제화 공정에서 사용되는 잔류용매의 특수성에 대한 다음과 같은 몇가지 특수한 전제를 고려해야한다.

1) 일반인이 아닌 환자가 질병의 치료 또는 감염․질병예방 목적으로 의약품을 사용한다.

2) 환자가 대부분의 의약품에 일생동안 노출되는 것은 아니지만, 사람의 건강에 대한 위해성을 줄이기 위해 일생동안 노출된다는 가설을 적용할 수 있다.

3) 잔류용매는 의약품 제조시 피할 수 없는 요소이고 때로는 제제의 일부분이 된다.

4) 잔류용매는 예외적인 상황을 제외하고는 권고된 수준을 초과해서는 아니된다.

5) 잔류용매의 허용수준 결정시 사용되는 독성학적 시험자료는 경제협력개발기구(OECD), 미국환경청(US EPA), 미국 식약청(US FDA) Red Book에 기재되어 있는 것과 같은 적절한 프로토콜에 기초하여 시험한 것이어야 한다.

부록 3. 노출한계 설정 방법

분류 1 발암성 용매의 위해성 평가 방법으로는 Gaylor - Kodell 방법(Gaylor, D. W. and Kodell, R. L. : 독성 물질의 저용량 평가에 대한 Linear Interpolation algorithm J Environ. Pathology, 4, 305, 1980)이 적절하다. 신뢰할 수 있는 발암성 자료가 있는 경우에만, 노출한계 설정을 위해 수학적 모델을 이용한 외삽(extrapolation)을 적용하여야 한다. 분류1용매의 노출한계는 최대무작용량(NOEL)에 큰 안전계수(예 : 10,000 ~100,000)를 사용하여 결정할 수 있다. 이 용매의 검출과 정량은 필요시 최신분석기술에 따라 시험한다.

이 가이드라인에서 분류 2 용매의 허용노출 수준은 미국약전 포럼(Pharmacopeial Forum, Nov-Dec1989)에서 제시한 ‘의약품 중 노출한계 설정 절차’와 인체에 대한 화학물질의 위해성 평가를 위해 IPCS (Environmental Health Criteria170, WHO, 1994)에서 채택한 방법에 따라 1일 노출 허용량(PDE)을 계산하여 설정되었다.  이 방법은 미국환경청(US EPA)(IRIS), 미국식약청(US FDA)(Red Book) 및 다른 기관에 의해 사용되는 것과 유사하다. 1일 노출 허용량(PDE)의 산출근거에 대한 이해를 돕기 위하여 1일 노출 허용량(PDE) 계산법을  이 가이드라인에 기술하였다. 이 가이드라인 중 표 2(의약품 중 분류 2용매)의 1일 노출 허용량(PDE)을 그대로 사용하는 경우에는 이 방법으로 다시 계산할 필요는 없다.

1일 노출 허용량(PDE)은 다음과 같이 가장 적절한 동물시험에서 얻은 최대무작용량(NOEL) 또는 최소작용량(LOEL)으로부터 얻어진다.

[eqn: & rm 1일노출허용량(PDE)~ &]

[eqn: =~ rm {NOEL TIMES 사람의`체중(Weight`Adjustment)} over {F1` TIMES `F2` TIMES `F3` TIMES `F4` TIMES `F5}] (1)

1일 노출 허용량(PDE)은 NOEL로부터 계산하는 것이 바람직하며, 만약 NOEL이 없는 경우 LOEL을 사용할 수 있다. 이 가이드라인 상에 제시된 변형계수(modified factor)는 동물시험 상의 수치를 사람에게 외삽하기 위한 것으로서, 환경보건기준(EHC, Environmental Health Criteria 170, WHO, Geneva, 1994)의 “불확실성 계수(uncertainty factor)”와 미국약전포럼의 “변형계수(modifying factor)” 또는 “안전계수(safety factor)”와 같은 종류이다. 100% “전신노출”에 대한 가정은 투여경로와 관계없이 모든 계산에서 사용된다.

변형계수는 다음과 같다.

F1은 종간에 외삽을 하기 위한 계수이다.

랫트에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 5

마우스에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 12

개에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 2

토끼에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 2.5

원숭이에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 3

그 외의 동물에서 사람으로 외삽하는 경우 F1 = 10

F1은 시험에 사용된 동물과 사람의 비표면적(체표면적 : 체중의 비)을 고려하여 설정하였다. 체표면적(S)는 다음과 같이 계산된다.

S = kM0.67  (2)

M은 체중이며 상수 k는 10이다. 체중은 다음의 표 1에서 주어진 수치를 적용하였다.

F2는 개인간의 편차를 고려한 계수로 일반적으로 모든 유기용매는 계수 10이 주어진다. 이 가이드라인에서도 일괄하여 10을 이용하였다.

F3는 독성시험의 기간이 짧은 경우 적용하는 변수이다.

적어도 수명의 절반(설치류 또는 토끼:1년, 고양이, 개 및 원숭이 : 7년)의 시험인 경우 F3=1

시험기간이 전체 기관형성 기간을 포함하는 생식독성시험인 경우 F3=1

시험기간이 설치류 6개월 또는 비설치류 3.5년 시험인 경우 F3=2

시험기간이 설치류 3개월 또는 비설치류 2년 시험인 경우 F3=5

시험기간이 보다 단기간인 경우 F3=10

모든 예에서 시험기간이 위의 기준시간 사이에 있을 경우에는 높은 쪽의 계수를 이용하였다. 예를 들어 설치류의 시험기간이 9개월인 경우에는 계수2를 이용하였다.

F4는 중대한 독성, 예를 들어 유전독성을 동반하지 않는 발암성, 신경독성 또는 최기형성의 경우에 적용하는 계수이다. 생식독성시험에서는 다음의 계수가 이용된다.

모체독성을 동반하는 태자독성에는 F4=1

모체독성을 동반하지 않는 태자독성에는 F4=5

모체독성을 동반하는 최기형성에는 F4=5

모체독성을 동반하지 않는 최기형성에는 F4=10

F5는 NOEL이 확립되어 있지 않은 경우에 적용하는 변수이다. LOEL만 이용가능한 경우에는 독성의 심각한 정도에 따라 계수는 최대 10까지의 계수가 이용된다.

사람의 체중(weight adjustment)은 임의로 성인 남녀의 체중을 50kg이라 가정한 것이다. 이렇게 상대적으로 낮은 체중을 사용하면 이와 같은 유형의 계산식에서 자주 이용되는 표준체중(60kg, 또는 70kg)에 비하여 안전계수를 추가적으로 제공해 준다. 체중이 50 kg미만인 성인 환자도 있으므로 이 환자에 대해서는 1일노출허용량(PDE) 결정시 사용된 안전계수 중에 모두 포함되어 있다고 간주된다. 소아용으로 제조된 의약품 중에 용매가 잔류하고 있는 경우에는 보다 낮은 체중으로 조정하는 것이 적절하다.

(1)식의 적용 예로서, pharmeuropa, Vol. 9, No.1-supplement, April 1997, page S24에 기재되어있는 마우스를 이용한 아세토니트릴의 독성시험을 예로 들면 다음과 같다. NOEL은 50.7mg/kg/일로 산출되었다. 이 시험에서 아세토니트릴의 1일노출허용량(PDE)은 다음과 같이 계산된다.

1일노출허용량(PDE) =[eqn: rm {50.7mg/kg/day TIMES 50kg} over {12 TIMES 10 TIMES 5 TIMES 1 TIMES 1}] =4.22mg/일

이 예에서

마우스에서 사람으로 외삽이므로  F1=12

사람간의 개체차로서 F2=10

시험기간이 13주간이므로 F3=5

중대한 독성이 나타나지 않았기 때문에 F4=1

NOEL이 산출되었으므로 F5=1

표 1. 이 가이드라인에서 계산에 사용된 값

랫트의 체중	425 g
임신한 랫트의 체중	330 g
마우스의 체중	28 g
임신한 마우스의 체중	30 g
기니픽의 체중	500 g
붉은털 원숭이의 체중	2.5kg
토끼의 체중(임신, 비임신)	4kg
비글견의 체중	11.5kg
랫트의 호흡량	290L/일
마우스의 호흡량	43 L/일
토끼 호흡량	1,440 L/일
기니픽의 호흡량	430 L/일
사람의 호흡량	28,800 L/일
개의 호흡량	9,000 L/일
원숭이의 호흡량	1,150 L/일
마우스의 물 섭취량	5mL/일
랫트의 물 섭취량	30mL/일
랫트의 사료 섭취량	30g/일

흡입독성시험에서 사용된 기체 농도를 ppm 단위에서 mg/L 또는 mg/m3의 단위로 변환하기 위해서는 이상기체방정식, PV = nRT이  사용된다. Pharmeuropa, Vol. 9, No. 1, Supplement, April 1997, page S9에 기재된 사염화탄소(carbon tetrachloride, 분자량:153.84)의 흡입에 의한 랫트의 생식독성시험을 예로 들면 다음과 같다.

[eqn: &rm {n over V} `=` { P over RT} `=` {300×10^-6` atm ×153,840mg/mol} over {0.082×Latm/K/mol×298K }`##&~~rm~~~~~~~~~~~ =` 46.15mg over 24.45L `=`1.89mg/L]

1,000 L = 1 m3 의 관계를 이용하여 mg/m3 으로 변환한다.

입도측정법

입도측정법은 분말상 등의 원료의약품, 첨가제 등의 입도특성을 확인하기 위하여 외관, 형상, 크기 및 그 분포를 직접 또는 간접으로 측정하는 방법이며 측정의 목적과 검체의 성상에 따라 광학현미경법 또는 체분급법을 쓴다.

제1법 광학현미경법

광학현미경법은 광학현미경을 써서 육안 또는 현미경사진으로 직접 개개 입자의 외관 및 형상을 관찰하고 크기를 측정하는 방법이다. 또한 이 방법으로 입자경분포를 구할 수 있다. 이 법에 따르면 복수의 다른 종류의 고체입자가 혼재할 때도 광학적으로 인식이 가능하면 각각의 고체입자의 입도측정이 가능하다. 또한 입자경분포를 구할 때 화상해석 등에 의한 데이터처리도 유용하다.

입자평가를 위한 광학현미경법은 일반적으로 1 μm보다 큰 입자에 적용한다. 하한은 현미경의 해석능에 달려있다. 상한은 그다지 명확하지 않으며 큰 입자의 입자경을 평가할 때의 어려움에 따라 그 영향을 받는다. 광학현미경법의 적용범위 외의 입자평가에 대하여는 몇 개의 별법이 이용된다. 광학현미경법은 비 구형입자의 평가에 특히 유용하다. 이 법은 보다 신속하고 범용적인 방법의 교정을 위한 기초적 방법으로서도 도움이 된다.

장치

안정하고 방진대책이 되어 있는 현미경을 쓴다. 현미경의 종합배율 (대물렌즈 배율×접안렌즈 배율×기타 확대부품의 배율)은 검체 중 가장 작은 입자를 적절하게 평가하기에 충분한 크기이다. 대물렌즈의 최대 개구수는 각각의 배율에 맞게 결정한다. 편광필터를 적절한 분석기기나 검판과 조합하여 쓸 수 있다. 비교적 좁은 분광투과특성을 가지는 유색유리필터는 아크로마트 대물렌즈와 같이 쓰이지만 아포크로마트 대물렌즈와 같이 쓰는 것이 더 바람직하며 현미경사진에서의 색을 나타내기 위하여 필요하다. 적어도 구면수차를 보정한 콘덴서를 광원과 같이 현미경의 서브스테이지 내에서 써야 한다. 콘덴서의 개구수는 사용조건에서 대물렌즈의 개구수와 조화되어야 한다. 즉 개구수는 콘덴서의 조리개와 이머션오일의 존재여하에 영향을 받는다.

조정

광학계의 모든 장치가 정확하게 조정되어있고 초점이 적절하게 조절되어 있는 것이 필요하다. 장치의 초점조절은 현미경 제조자의 설명에 따라 행한다. 엄밀한 축 조정도 권장한다.

조명

양호한 조명을 위한 필요조건은 시야 전체에 미치는 광의 강도는 균일하고 또한 조절 가능한 것이다. 이를 위하여 케-라(Kohler)조명이 좋다. 착색입자에 대하여는 입자영상의 콘트라스트와 상의 세부를 조절할 수 있도록 필터의 색을 선택한다.

육안에 의한 평가

배율과 렌즈의 개구수는 평가해야 할 입자의 영상을 적절히 확인할 수 있도록 충분히 높인다. 접안마이크로미터를 교정하기 위하여 미리 교정한 대물마이크로미터를 써서 실제의 배율을 결정한다. 입자상이 접안마이크로미터에서 적어도 10눈금이 되도록 충분히 높은 배율이면 오차를 줄일 수 있다. 각각의 대물마이크로미터는 각각 따로 교정한다. 접안스케일을 교정하기 위하여 대물마이크로미터의 스케일과 접안스케일이 평행이 되게 한다. 이렇게 하여 접안용 스테이지의 눈금간격의 길이를 정확히 측정할 수 있다.

입자경을 측정할 때는 접안마이크로미터를 접안렌즈의 조리개의 위치에 넣은 다음, 대물마이크로미터를 스테이지의 중앙에 놓고 고정한다. 접안렌즈를 현미경 통에 장착하고 대물마이크로미터의 눈금에 초점을 맞춘다. 다음 이들 2개의 마이크로미터의 눈금의 간격을 비교하여 이 렌즈의 조합에서의 접안렌즈의 1눈금에 상당하는 검체의 크기를 다음 식으로 계산한다.

접안렌즈 1눈금에 상당하는 검체의 크기 (μm) = 대물마이크로미터의 길이(μm)/접안마이크로미터의 눈금수

대물마이크로미터를 제거하고 검체를 스테이지에 펴고 초점을 맞춘 다음 측정한 접안렌즈의 눈금수를 가지고 입자경을 측정한다.

또한 입자경분포폭이 넓은 검체를 평가할 때는 몇개의 다른 배율이 필요하다.

사진에 의한 평가

사진으로 입자경을 측정할 때는 필름 면에 피사체의 초점이 확실하게 맞도록 주의하여야 한다. 충분한 감도, 해상력 및 콘트라스트를 가지는 사진 필름을 쓰고 교정된 대물마이크로미터의 사진을 따로 촬영하여 실제의 배율을 측정한다. 검체 및 배율측정을 위한 촬영에 있어서는 노출과 현상 및 인화처리는 동일하게 한다. 사진에서의 입자의 겉보기 크기는 현미경의 해상력과 마찬가지로 노출, 현상 및 인화의 영향을 받는다.

검체의 조제

고정제는 검체의 물리적 특성에 따라 선택한다. 검체 가장자리의 세부까지 확실하게 확인할 수 있도록 검체와 고정제 간에는 충분하지만 과도하지 않는 정도의 콘트라스트가 필요하다. 입자를 평판위에 놓고 개개의 입자를 식별하기 위하여 적절히 분산시킨다. 또한 입자는 검체 중의 입자경분포를 대표해야 하며 마운트의 조제 중에 변화하지 않아야 한다. 고정제를 선택할 때는 검체의 용해성도 고려한다.

결정성의 평가

검체의 결정성은 의약품각조 중에 기재되어 있는 결정성에 관한 조건에 적합한지의 여부를 결정하기 위하여 평가한다. 각조에 따로 규정이 없는 한 깨끗한 슬라이드글라스위에 몇 개의 검체입자를 광물유 중에 고정한다. 편광현미경을 써서 검체를 관찰한다. 검체가 결정성일 때는 현미경의 스테이지를 회전하면 입자는 복굴절 ( 간섭색 )과 암 시야를 나타낸다.

현미경에 의한 입자경의 한계시험

적당량 (예를 들면 분체의 경우 10 ∼ 100 mg )의 검체를 달아 필요하면 분산제를 넣고 검체가 용해하지 않는 적절한 분산매 10 mL에 현탁시킨다. 입자밀도와 근사하거나 또는 일치하는 밀도를 가지는 분산매 중에 현탁시키고 적절하게 흔들어 섞어 입자의 균일한 혼탁액을 얻는다. 균일한 현탁액의 일부를 적당한 계수 셀에 넣고, 분체일 때는 현미경 하에서 10 μg 이상의 검체에 상당하는 면적을 주사하고 소정의 한계입자경보다 큰 최대 길이를 가지는 모든 입자수를 센다. 한계입자경과 이를 초과하는 입자의 허용개수는 의약품각조에 명시되어 있다.

입자경의 평가

입자경의 측정은 입자형상에 따라 복잡하게 변화하므로 평가할 입자개수는 측정된 수치의 신뢰성이 통계적으로 보증하는데 충분한 수가 되도록 한다.1) 불규칙한 형상의 입자일 때 입자경에 관한 여러 가지의 정의가 있다. 일반적으로 불규칙한 형상의 입자에 대하여는 입자경을 평가할 때 입자형상에 관한 정보와 마찬가지로 측정한 입자경의 종류에 관한 정보도 포함되도록 한다. 일반적으로 입자경 측정에는 다음과 같이 정의된 용어를 쓴다(그림 1).

그림 1. 입자경의 정의

페레(Feret)경 (정방향접선경) : 무작위로 배향한 입자를 사이에 두고 각 입자에 대하여 평형선을 그어서 그 사이의 길이

마틴(Martin)경 (정방향면적등분경) : 정방형에서 투영면적을 2등분하는 선분의 길이

헤이우드 (Heywood)경 (투영면적원상당경) : 입자와 동일한 투영면적을 가지는 원의 지름

장축경 : 접안스케일에 대하여 평행으로 배향한 입자의 가장자리에서 다른 한 쪽의 가장자리까지의 최대 길이

단축경 : 장축경에 대하여 직각으로 측정한 입자의 최대 길이

입자 형상의 평가

불규칙한 형상의 입자에 대하여는 입자경의 평가에 입자 형상에 관한 정보도 포함되어야한다. 검체의 균일성은 적당한 배율을 써서 검사한다. 아래의 설명은 입자의 형상에 관하여 일반적으로 쓰이고 있는 용어의 정의이다.(그림2)

그림 2. 일반적으로 쓰이는 입자형상의 기술

침상 : 단축경과 두께가 거의 같고 가늘고 긴 침상의 입자

주상 : 침상입자 보다 긴 단축경과 두께를 가지고 길고 얇은 입자.

박판상 : 장축경과 단축경이 거의 같고 얇고 편평한 입자.

판상 : 장축경과 단축경이 거의 같으나 박판상보다 두꺼운 편평한 입자.

엽편상 : 길고 얇은 엽편상의 입자.

등방상 : 장축경, 단축경 및 두께가 거의 같은 입자. 입방체상 및 구상입자를 포함한다.

일반적 관찰

보통 1개의 입자를 최소 개별단위로 본다. 입자는 액체 또는 반고체상의 액적, 단결정 또는 다결정, 비정질 또는 응집체라도 된다. 복수의 입자가 응집되어 있어도 된다. 응집의 정도는 다음과 같은 용어로 나타낸다.

아그리게이트 : 부착성 입자의 덩어리

아글로메레이트 : 융해 또는 고결한 입자.

콘글로메레이트 : 2 종류 이상의 입자의 혼합물.

스페룰라이트 : 방사상의 클라스터.

드루시 : 소립자를 덮어쓴 입자.

층상 : 판상입자가 겹쳐 쌓인것

입자의 상태는 다음의 용어로 표시한다.

각̇・연 : 뾰족한, 둥근, 매끄러운, 예리한, 파쇄상의

색・투명도 : 착색하고 있는(적당한 색 필터를 쓴 경우), 투명한, 반투명의, 불투명한

입자간의 얽어짐 : 맞물린(occlusion). 포합(inclusion)한 표면특성은 다음의 용어로 표시한다.

균열 : 부분적으로 갈라진, 부서진 갈라진 틈이 있는

평활함 : 불규칙성, 요철이나 돌출부가 없는

다공성 : 개구부와 통로가 있는

조잡한 : 요철이 있는, 평탄하지 않는, 매끄럽지 않은

오목한 : 작은 오목 들어간 자국이 있는

제 2 법 체분급법

체분급법은 체를 써서 가루 의약품의 입자경분포를 측정하는 방법으로 본질적으로는 2 차원의 크기를 평가하는 측정법이다. 이 법으로 측정된 입자의 크기는 입자가 통과하는 최소의 체눈의 치수로 나타낸다.

이 법은 입자경분포로 된 분체 및 과립을 대상으로 한 분급법의 하나이다. 직포 체를 쓸 때는 체분급은 기본적으로는 입자를 체의 중간적인 입자경 치수 (예를 들면 폭)에 의한 분급이다. 기계적 체분급법은 입자의 대다수가 약 75 μm이상일 때 가장 적합하다. 비교적 작은 입자에 대하여는 무게가 가벼워 체분급 중에 입자가 상호 부착하거나 체에 부착하는 결과 당연히 체를 통과할 입자가 잔류하게 되며 부착력 및 응집력 등의 입자간력을 이겨내기에는 불충분하다. 이러한 물질에 대하여는 air jet 법 또는 sonic sifter 법과 같은 진탕법이 더 적합하다. 체분급법은 측정법의 타당성이 확인되면 75 μm보다 작은 중위경인 분체 및 과립에도 적용이 가능하다. 체분급법은 보통 비교적 큰 분체나 과립을 분급하기 위한 방법이다. 이 법은 분체나 과립을 입자경만을 기초로 하여 분급하는 경우에 적절한 방법이며 대부분의 경우 건조 상태에서 행한다.

이 법의 문제점은 비교적 많은 검체량 (분체와 과립의 밀도 및 시험용 체의 지름에 달려있지만 보통 적어도 25 g이상) 이 필요하다는 것 및 체 눈을 막을 수 있는 유상 또는 기타 부착성 분체와 과립의 경우에는 체분급이 어렵다는 것이다. 체 눈으로부터의 입자의 통과는 종종 길이보다 최대 폭 또는 두께에 더 많이 의존하므로 이 법은 기본적으로 입자경을 2차원적으로 평가하는 것이 된다.

이 법은 검체의 전체적인 입자경분포를 평가하는 것을 목적으로 하고 있다. 따라서 특정한 1개 또는 2개의 체를 통과하는 비율 또는 잔류하는 비율을 측정하는 것은 아니다.

각조 중에 따로 규정이 없는 한 건식 체분급법에서 기술되어있는 것과 같은 입자경분포를 평가한다. 체분급 종점에 도달하기 어려운 경우 (예를 들면 검체가 체를 쉽게 통과하지 않는 경우) 또는 보다 미세한 최소 체분급 범위( < 75μm)를 쓸 필요가 있는 경우에는 다른 입자경측정법의 이용을 충분히 고려해야한다.

체분급은 검체가 흡습 또는 탈습하지 않는 조건에서 한다. 체분급을 할 때의 환경의 상대습도는 검체의 흡습 또는 탈습을 방지할 수 있도록 조절한다. 반대로 이러한 현상이 일어나지 않을 때는 체분급법은 일상 환경 습도에서 한다. 특수한 검체에 적용하는 특별한 조건에 대하여는 각조 중에 전부 상세히 기재해 둔다.

체분급법의 원리

시험용체는 평직으로 된 금속선의 망목으로 구성되어 있으며 망목 개구부는 거의 정방형으로 가정하고, 밑이 없는 원통형 용기의 아래 부분에 고정되어 있다. 기본적인 측정법은 1 개의 체위에 체 눈이 더 큰 체를 순차적으로 쌓아 두고 맨 위 단의 체 위에 검체 분체를 놓는다.

한 군의 체를 정해진 시간 진동하고 각 체 위에 잔류한 검체 질량을 정확하게 단다. 시험 결과는 각각의 체 지름 범위내의 분체의 질량기준 백분율 (%)로 주어진다. 단일 의약품 분체의 입자경분포를 평가하기 위한 체분급법은 일반적으로 적어도 입자의 80 %가 75μm 이상인 경우에 이용된다. 체분급법으로 입자경분포를 측정할 때의 입자경 파라미터는 입자가 통과하는 가장 좁은 체 눈이다.

시험용 체

이 시험에 쓰는 체는 각조에 따로 규정이 없는 한 표 1에 제시된 것을 쓴다.

체는 검체중의 전체 입자경범위를 커버할 수 있도록 선택한다. 체 눈 면적의 [eqn: sqrt {2}]급수를 가지는 한군의 체를 쓰는 것이 좋다. 이들 체는 체 눈이 가장 큰 것을 제일 상단, 가장 작은 것을 제일 하단이 되도록 조립한다. 시험용 체의 체눈의 표시에는 μm 또는 mm 를 쓴다(주 : mesh번호는 표중에서 환산하는 경우에만 쓴다. ). 시험용 체는 스테인레스강제, 황동제 또는 기타 적절한 불활성 망으로 된 것을 쓴다.

표 1  관계있는 범위에서의 표준체의 체눈의 길이

ISO공칭체번호			USP 체번호	권장된 USP 체번호(microns)	EP 체번호	대한민국약전 체번호
주요치수	보조치수
R 20/3 11.20 mm 8.00 mm 5.60 mm 4.00 mm 2.80 mm 2.00 mm 1.40 mm 1.00 mm 710 μm 500 μm 355 μm 250 μm 180 μm 125 μm 90 μm 63 μm 45 μm	R 20 11.20 mm 10.00 mm 9.00 mm 8.00 mm 7.10 mm 6.30 mm 5.60 mm 5.00 mm 4.50 mm 4.00 mm 3.55 mm 3.15 mm 2.80 mm 2.00 mm 1.60 mm 1.40 mm 1.25 mm 1.12 mm 1.00 mm 900 μm 800 μm 710 μm 630 μm 560 μm 500 μm 450 μm 400 μm 355 μm 315 μm 280 μm 250 μm 224 μm 200 μm 180 μm 160 μm 140 μm 125 μm 112 μm 100 μm 90 μm 80 μm 71 μm 63 μm 56 μm 50 μm 45 μm 40 μm	R 40/3 11.20 mm 9.50 mm 8.00 mm 6.70 mm 5.60 mm 4.75 mm 4.00 mm 3.35 mm 2.80 mm 2.50 mm 2.36 mm 2.24 mm 2.00 mm 1.80 mm 1.70 mm 1.40 mm 1.18 mm 1.00 mm 850 μm 710 μm 600 μm 500 μm 425 μm 355 μm 300 μm 250 μm 212 μm 180 μm 150μm 125 μm 106 μm 90 μm 75 μm 63 μm 53 μm 45 μm 38 μm	5 6 7 8 10 12 14 16 18 20 25 30 35 40 45 50 60 70 80 100 120 140 170 200 230 270 325	4000 2800 2000 1400 1000 710 500 355 250 180 125 90 63 45	11200 5600 4000 2800 2000 1400 1000 710 500 355 250 180 125 90 63 45 38	3.5 4 4.7 5.5 6.5 7.5 8.6 10 12 14 16 18 22 26 30 36 42 50 60 70 83 100 119 140 166 200 235 282 330 391

시험용 체의 교정은 ISO 3310-12)에 따른다. 체는 사용 전에 현저히 찌그러지거나 파손되지 않았는지 또한 특히 망 면과 체 틀의 접합부에 대하여도 주의하여 검사한다. 체 눈의 평균 크기와 크기의 변동을 평가하는 경우에는 눈으로 검사할 수도 있다. 또한 212 ∼ 850 μm의 범위내에 있는 시험용 체의 유효 체 눈의 크기를 평가할 때는 표준유리구를 써도 된다. 각조 중에 따로 규정이 없는 한 체의 교정은 조정된 실온과 환경상대습도에서 한다.

체의 세정 : 이상적으로는 시험용 체는 air jet 또는 액류 중에서만 세정할 수 있다. 만약 검체가 체 눈을 막았을 때는 최후 수단으로서 주의하여 부드럽게 솔질을 할 수 있다.

측정용 검체

특정한 물질에 대하여 각조 중에 검체의 질량이 규정되어 있지 않은 경우에는 검체의 겉보기밀도에 따라 25∼100 g의 검체를 쓰고 지름 200 mm의 체를 쓴다. 지름 76 mm의 체를 쓰는 경우에는 검체양은 200 mm체일 때의 약 1/7로 한다. 정확히 단 여러 질량의 검체 (예로서 25, 50, 100 g)를 체 진탕기로 같은 시간 시험적으로 체분급을 하여 이 검체에 대한 최적 질량을 결정한다. (주 : 만일 시험 결과가 25 g 과 50 g 검체에서 비슷하지만 100 g검체는 체 눈이 가장 작은 체를 통과하는 질량백분율이 25 g 및 50 g 보다 낮을 경우 100 g은 검체로서 너무 많다). 10 ∼ 25 g 의 검체 밖에는 쓸 수없는 경우에는 동일한 체 리스트 (표 1)에 적합한 지름보다 작은 시험용 체를 대신 사용할 수 있지만 이 경우에는 종점을 다시 측정하여 바로 잡는다. 때에 따라서는 더 작은 질량 (예를 들면 5 g미만 ) 에 대하여 측정할 필요가 있을 때도 있다. 겉보기밀도가 작은 검체 또는 주로 지름이 아주 근사한 입자로 된 검체에 대하여는 체 눈의 과다한 막힘을 방지하기 위하여 200 mm 체로는 검체의 질량이 5 g미만 이어야 될 때도 있다. 특수한 체분급법의 타당성을 확인할 때는 체 눈의 막힘을 주의한다.

검체가 습도 변화에 따라 심하게 흡습 또는 탈습하기 쉬울 때는 적당하게 습도를 조절한 환경에서 시험한다. 마찬가지로 대전하는 검체의 경우에는 이러한 대전이 분석에 영향을 주지 않는다는 것을 보증하기 위하여 주의 깊게 관찰한다. 이 영향을 최소화하기 위하여 경질무수규산 또는 산화알루미늄과 같은 대전방지제를 5 %수준으로 첨가해도 된다. 위에 설명한 그 어느 영향도 제거할 수 없으면 이에 대신하는 다른 입자측정법을 선택한다.

진탕법

서로 다른 메커니즘을 바탕으로 한 여러 진탕장치가 있으며 이들 모두가 체분급에 이용된다. 그러나 시험 중에 개개의 입자에 작용하는 힘의 종류 및 크기가 기종 간에 차이가 나 진탕법이 달라지면 체분급이나 종점의 결정에서 다른 결과가 나타난다. 기계적 진탕법 또는 전자진탕법 및 수직방향의 진동 또는 수평방향의 원운동을 병행할 수 있는 방법 또는 tapping 또는 tapping과 수평방향의 원운동을 병행하는 방법 등이 이용된다. 기류 중에서 입자의 비상을 이용하는 방법도 있다. 측정결과에는 사용한 진탕법과 진탕에 관계하는 파라미터(이들을 변화시킬 수 있는 경우에는)를 기재한다.

종점의 결정

체분급은 어느 체에 대하여도 체위의 질량변화가 직전의 질량에 대하여 5 % ( 76 mm 체의 경우에는 10 % ) 또는 0.1 g이하가 될 때 종료한다. 소정의 체위의 잔류양이 전체 검체질량의 5%미만이 되는 경우에는 종점은 그 체위의 질량변화를 직전의 질량에 대하여 20 %이하까지 끌어 올린다. 각조 중에 따로 규정이 없는 한 어느 한 체위에 잔류한 검체양이 전체 검체질량의 50 %를 넘는 경우에는 체분급을 반복한다. 이체와 처음의 체 조합 중에서 이체보다 큰 체 눈을 가지는 체와의 중간에 있는 체 즉 한 군의 체 조합으로부터 삭제된 ISO 시리즈의 체를 추가한다.

체분급법

1) 기계적진탕법  건식체분급법

각각의 체만의 질량을 0.1 g까지 단다. 질량을 정확히 단 검체를 최상단의 체위에 놓고 뚜껑을 한다. 체 조합을 5분간 진탕한다. 검체가 손실되지 않도록 체 조합으로부터 각 단의 체를 주의 깊게 분리한다. 체 망의 아래 면에 미분이 부착되어 있을 때에는 필요하면 연한 솔을 써서 조용히 체의 아래 면으로부터 제거하고 바로 아래 단의 체위에 있는 검체에 합한다. 각 체의 질량을 다시 달아 체위의 검체질량을 측정한다. 같은 방법으로 받침접시내의 검체질량도 측정한다. 체를 다시 조합하여 다시 5 분간 진탕한다. 앞에 기술한 바와 같이 각 체를 분리하고 질량을 단다. 이 조작을 종점규격에 적합할 때까지 반복한다(종점 결정 항 참조). 체분급을 종료한 다음 전 손실 량을 계산한다. 전 손실 량은 처음 검체질량의 5 %이하이다.

새 검체를 써서 체분급을 반복하지만 이때는 앞에서 쓴 반복회수에 대응하는 합계시간을 1회 체 분급시간으로 한다. 이 분급시간이 종점 결정을 위한 필요조건에 적합한 지를 확인한다. 하나의 검체에 대하여 이 종점의 타당성이 확인 되어 있는 경우에는 입자경분포가 정상적인 변동범위 내에 있으면 이다음의 체분급은 하나의 고정된 분급시간을 써도 된다.

그 어느 체위에 잔류하는 입자가 단일 입자가 아니고 응집체이며 기계적 건식체분급법을 써도 양호한 재현성을 기대할 수 없는 경우에는 다른 입자경측정법을 쓴다.

2) 기류중비산법, air jet법 및 sonic sifter법

기류를 사용하는 여러 가지 장치가 체 분급에 이용되고 있다. 한 번의 시간에 한 개의 체를 쓰는 시스템이 air jet법이다. 이 법은 건식체분급법에서 기술한 것과 같이 일반적인 체분급법을 쓰지만 전형적인 진탕메카니즘 대신에 표준화된 air jet를 쓴다. 이법으로 입자경분포를 얻기 위해서는 처음에 가장 작은 체 눈의 체를 시작으로 개개의 체마다 일련의 분석을 할 필요가 있다. Air jet법에서는 종종 보통의 건식분급법에 쓰이는 것보다 더 작은 체 눈의 시험용체를 쓴다. 이 법은 체위 잔류분 또는 체 이래 잔류분 만을 필요로 할 때에 보다 더 적절하다. Sonic sifter법에서는 한조의 체를 쓴다. 이 경우 검체는 소정의 펄스 수(회/분)로 검체를 들어 올린 다음 다시 체의 망목에 오도록 수직방향으로 진동하는 공기 칼럼내로 운반된다. Sonic sifter법을 쓸 때에는 검체 량을 5 g까지 줄일 필요가 있다.

Air jet법 및 sonic sifter법은 기계적 체분급법으로는 의미 있는 분석 결과를 얻을 수 없는 분체 및 과립에서 유용하다. 이들 방법은 기류 중에 분체를 적절하게 분산 할 수 있는지의 여부에 크게 의존한다. 입자의 부착경향이 보다 강할 때나 특히 대전경향이 있는 검체일 때에는 체분급 범위의 하한 부근 ( ＜75μm )에서 이 법은 양호한 분산성을 달성하기 어렵다. 위와 같은 이유로 종점의 결정은 특히 중대하다. 또한 체위의 검체가 단일 입자이며 응집체를 형성하지 않는 다는 것을 확인하는 것이 매우 중요하다.

결과의 해석

개개의 체위 및 받침접시에 잔류하는 검체의 질량에 더하여 시험기록에는 전체 검체질량, 전체 체분급시간, 정확한 체분급법 및 변수 파라미터에 관한 값을 기재한다. 시험결과는 누적질량기준분포로 변환하는 것이 편리하다. 또한 분포를 누적체하 질량기준으로 하는 것이 바람직할 때에는 사용한 체 범위에 전 검체가 통과하는 체를 포함시킨다. 그 어느 시험체에 있어서 체분급 중에 검체의 응집체가 체위에 잔류하고 있는 것이 확인된 경우에는 체분급법은 의미가 없다.

주1) : 입자경 측정, 검체량 및 데이터해석에 관한 정보는 ISO 9276을 이용할 수 있다.

주2) : International Organization for standardization (ISO) Specification ISO 3310-1 ; Test sieves - Technical requirements and testing

정제의 마손도시험법

정제의 마손도시험법은 제피를 하지 않은 압축성형정제의 마손도를 측정하는 방법으로, 정제의 경도 등 물리적 강도를 측정하는 시험법이다.

내면이 매끄럽고 투명한 안지름 283 ∼ 291nm, 높이 36 ∼ 40mm의 정전기가 거의 발생하지 않는 플라스틱제 드럼을 사용한다. 또한 드럼 한쪽 면은 떼어낼 수 있도록 되어 있으며, 정제는 드럼 중앙에서 외벽까지 곡선으로 연결된 내측 반지름 75.5 ∼ 85.5 mm의 칸막이판을 따라 드럼의 회전에 의해 굴러 떨어진다. 중심축 고리부분의 바깥지름은 24.5 ∼ 25.5 mm로 한다. 드럼은 24 ∼ 25 rpm로 회전하는 장치의 수평축에 연결한다. 따라서 정제는 회전할 때마다 구르거나 미끄러져 드럼벽이나 다른 정제 위에 떨어진다. (그림1. 플라스틱제 드럼 참조)

그림 1. 플라스틱제 드럼

1 정의 질량이 650 mg 이하인 경우는, 6.5 g에 근접한 양에 해당하는 정제를 취하고, 1 정의 질량이 650 mg을 넘는 경우에는 10 정을 취하여 시험한다. 시험을 시작하기 전에 정제에 붙어있는 가루를 주의하여 제거한 다음 정제의 질량을 정밀하게 달아 드럼에 넣는다. 드럼을 100 회전시킨 다음 정제를 꺼낸다. 시험 시작 전과 동일하게 정제에 붙어있는 가루를 제거하고 질량을 정밀하게 단다.

보통 시험은 1 회 실시한다. 시험이 끝나고 해당 정제를 관찰할 때 금이 가거나 깨지거나 손상된 경우 부적합으로 판정한다. 만약 결과를 판정하기 어려운 경우나 질량감소가 기준보다 큰 경우에는 추가로 시험을 2 회 반복 실시하여 총 3 회 시험결과의 평균값을 구한다. 대부분의 정제에서 3 회 시험의 평균질량감소가 1.0 %이하일 때 적합하다.

만일 정제의 크기나 모양에 따라 회전낙하가 불규칙한 경우에는 정제끼리 서로 근접하여 자유낙하가 어려워지지 않도록 수평면과 드럼장치 아랫면과의 각도가 약 10°가 되도록 장치를 조정한다.

발포정이나 저작정은 별도의 마손도 기준을 표시할 수 있으며, 흡습성이 있는 정제의 경우는 적절한 습도가 유지된 조건에서 시험을 실시하여야 한다.

여러 검체를 동시에 시험할 수 있도록 칸막이판이 2 개인 드럼이나 2 개 이상의 드럼을 갖춘 장치를 사용해도 무방하다.

최종 멸균법 및 멸균 지표체

멸균이란 물질 중에서 모든 미생물을 사멸시키든가 제거하는 것을 말한다. 여기에는 최종 멸균법과 여과법이 있다. 최종 멸균법이 적용 가능한 제품에 대해서는 가열법, 조사법 또는 기체법 중에서 각각의 장단점을 충분히 고려한 다음에 피멸균물의 성질 및 포장을 포함한 제품의 적합성에 따라 적절한 멸균법을 선택한다. 멸균장치의 설치 (멸균 공정의 설계와 개발을 포함)후 이 공정이 과학적 근거와 타당성을 갖고 설계대로 정확하게 가동되고 있음을 피멸균물의 적재시와 비적재의 조건에서 검증해야 한다. 멸균공정 확립한 다음 이 공정을 바르게 관리하고, 정기적으로 장치들의 적격성을 증명해야 한다.

최종 멸균법을 적용함에 있어서는 피멸균물의 생물 (미생물) 부하를 정기적으로 또는 일정 멸균단위 마다 측정하고 피멸균물 당 생물 (미생물) 부하를 파악해야 한다. 생물 (미생물) 부하의 측정법에 대해서는 ISO 기준 (ISO 11737-1)을 참조한다. 최종 멸균법을 적용할 수 있는 제품에 대해서는 보통 10-6 이하의 무균성 보증 수준을 얻을 수 있는 조건으로 멸균을 실시한다. 멸균의 적부는 적절한 멸균공정관리를 하고, 이어서 각각의 멸균법에 적합하고 적절한 멸균 지표체를 사용하며, 필요에 따라 무균 시험 결과로 판정한다. 최종 멸균법을 적용할 수 없는 액상 제품의 멸균에는 여과법을 이용한다. 의약품의 제조기기 및 제조환경과 의약품 각조에 규정된 미생물관련 시험법 등을 실시할 때 필요한 미생물의 사멸방법에 대해서는 [소독법 및 멸균법]을 참조한다.

1. 정의

여기에서 사용되는 용어의 정의는 다음과 같다.

최종 멸균법 : 피멸균물이 최종 용기 또는 포장된 상태에서 멸균되어 멸균 후의 미생물 사멸을 정량적으로 측정 또는 추측할 수 있는 멸균법을 말한다.

제품 : 제조의 중간 공정에서 만들어지는 것으로 이후의 제조 공정을 거쳐 최종 제품이 되는 것을 포함한 피멸균물을 말한다.

생물 (미생물) 부하 : 멸균 대상 물질에 생존하는 미생물의 수와 종류를 말한다.

무균성 보증 수준 : 적절한 멸균공정으로 처리한 멸균제품 중에 존재가 추정되는 오염 균의 최대 생존 확률을 말한다. 10-n으로 표현된다.

완전성 시험 : 세균 challenge시험에 의하여 측정되는 필터의 여과멸균성능을 비파괴적인 방법으로 예측하는 방법을 말한다.

D 값 : 미생물의 사멸률을 나타내는 수치로서 시험하는 미생물의 90 %를 사멸시켜 생존률을 1/10로 저하시키는데 필요한 시간 (Decimal Reduction Time)또는 1/10로 저하시키는데 필요한 선량 (Decimal Reduction Dose)을 말한다.

멸균지표체 : 멸균공정의 관리 또는 멸균의 지표로 사용되는 것으로 생물학적 지표체 (BI : Biological Indicator), 화학적 지표체 (CI : Chemical Indicator) 및 선량계 등이 있다.

2. 최종 멸균법

2.1 가열법

가열법은 열에 의해 미생물을 살멸하는 방법이다.

(i) 고압증기법

고압 포화 수증기 중에서 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 멸균에 영향을 줄 수 있는 요인으로는 온도, 수증기압 및 시간이 있다. 따라서 멸균 공정 관리에 있어서는 항상 온도, 수증기압 및 시간을 모니터링 해야 하며, 이는 멸균장치의 규격에 포함되어야 한다.

(ii) 건열법

가열 건조 기체로 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 보통 배치식 건열 멸균기 또는 연속식 건열 멸균기가 사용된다. 이 방법에서 멸균에 영향을 미치는 요인은 온도 및 시간이다. 따라서 통상적인 멸균 공정 관리에 있어서는 언제나 온도 및 시간을 모니터링 해야 하며, 이는 멸균장치의 규격에 포함되어야 한다.

2.2 조사법

전리방사선을 조사하여 미생물을 직접적으로 살멸하는 방사선법과 고주파를 조사하여 발생하는 열로 미생물을 살멸하는 고주파법이 있다.

(i) 방사선법

전리방사선에는 60Co 등의 방사성 동위원소로부터 방사되는 감마선과 전자가속기로부터 발생되는 전자선과 제동방사선 (X선)이 있다. 이 방법은 열에 불안정한 제품에도 적용될 수 있지만 품질 변화를 고려해야 한다. 멸균선량은 지금까지 25 kGy가 널리 사용되고 있으나, 다음과 같은 선량을 산출하는 몇 가지 방법들이 있다. 피멸균물의 생물 (미생물) 부하수를 측정하여, 평균 생물 (미생물) 부하수와 표준저항성분포를 근거로 멸균선량을 산출하는 ISO 기준 (ISO 11137)의 방법 1과 생물 (미생물) 부하수를 측정하지 않고, 누적선량조사마다의 무균시험결과로부터 생존하는 미생물의 저항성을 구하고 멸균선량을 산출하는 ISO 기준 (ISO 11137)의 방법 2 및 생물 (미생물) 부하수와 가장 저항성이 강한 균의 D 값을 근거로 멸균선량을 산출하는 Log 법 (5-3항 참조)등이 있다. 이 방법에서 멸균에 영향을 미치는 요인으로는 선량 (흡수선량)이 있다. 따라서 감마선 멸균의 공정 관리에 있어서는 적절한 빈도로 선량 (흡수선량)을 측정하는 외에 조작 인자인 조사시간 (컨베이어 속도, 싸이클 시간)을 언제나 모니터링 해야 한다. 멸균장치의 규격으로 선량제어기구가 포함되어야 한다. 전자선멸균 또는 제동방사선멸균의 경우에는 위에 언급된 것 외에도 가속전압, 빔 전류 및 빔 주사 폭의 모니터링이 필요하다.

(ii) 고주파법

고주파를 직접 조사하여 발생되는 열에 의해 미생물을 살멸하는 방법을 말한다. 보통 2450 ± 50 MHz의 고주파가 이용된다. 이 방법은 밀봉용기에 충전된 액상 또는 수분함량이 많은 제품에 적용된다. 유리제 또는 플라스틱 용기는 용기내의 내압상승에 의해 파손되거나 변형될 수 있으므로 열 및 내압을 견딜 수 있는 용기를 사용해야 한다. 고주파법에서 발생되는 전파 누설은 인체와 통신 등에 영향이 없는 수준이어야 한다. 이 방법에서 멸균에 영향을 미치는 요인으로는 피멸균물의 온도, 처리 시간 및 고주파출력이 있다. 따라서 통상적인 멸균 공정 관리에 있어서는 온도, 시간 및 고주파출력을 언제나 모니터링 해야 하며, 멸균장치의 규격에 포함되어야 한다.

2.3 기체법

에틸렌옥시드 (산화에틸렌) (EO)기체가 멸균 기체로서 널리 사용된다. EO 기체는 폭발성이 있기 때문에, 보통 이산화탄소로 10 ∼ 30 % 까지 희석하여 사용한다. EO 기체는 반응성이 강한 알킬화제이기 때문에 EO 기체와 반응하기 쉽거나 EO 기체를 흡수하기 쉬운 제품의 멸균에는 적용할 수 없다. 또한, EO 기체는 변이원성 등의 잔류독성이 있어서 EO 기체 멸균을 한 제품에 대해서는 출하까지 통기 (에어레이션) 등으로 잔류 EO 기체나 다른 2차적으로 생성된 유독 기체농도를 안전 수준 이하로 떨어뜨려야 한다. 이 방법에서 멸균에 영향을 미치는 요인으로는 온도, 습도, 기체 농도 (압력) 및 시간이 있다. 따라서 통상적인 멸균 공정 관리에 있어서는, 온도, 습도, 기체 농도 (압력) 및 시간을 언제나 모니터해야 하며, 멸균장치의 시방에 포함되어야 한다.

3. 여과법

적절한 재질의 멸균용 필터를 사용하여 미생물을 제거하는 방법을 말한다. 또한 세균보다 작은 미생물의 여과멸균은 이 방법의 대상이 되지 않는다. 일반적으로, 멸균을 목적으로 하는 멸균용 필터는 막의 유효 여과 면적 (cm2) 당 적절한 조건 하에서 배양된 지표균 Brevundimonas diminuta (ATCC 19146, NBRC 14213, JCM 2428) 또는 이것보다 작은 적당한 균을 107 개 이상을 투입하여 이차 측에서 무균 여액을 얻어야 한다. 이 방법은, 멸균에 영향을 미치는 요인으로 여과압력, 유량 및 필터장치의 특성 등이 있다. 따라서 통상적인 여과 공정 관리에서는, 사용한 다음(필요에 따라 사용 전에도)에 멸균필터의 완전성 시험을 실시해야한다.

4. 멸균지표체

4.1 생물학적 지표체 (BI)

BI는 특정멸균법에 대하여 강한 저항성을 나타내는 지표균을 이용하여 만들어진 것으로 해당 멸균법의 멸균조건의 결정 및 멸균공정관리에 사용된다. 건조형 BI는 담체 (carrier)에 따라 2 종류로 분류된다. 한 종류는, 여과지, 유리 또는 플라스틱 등을 담체로 하여 지표균의 포자를 도포 건조하여 포장한 것이고, 다른 종류는, 제품 또는 유사품을 담체로 하여 지표균의 포자를 도포 건조한 것이다. 포장재로는 건열법에서는 열전도성이 우수한 것, 기체법과 고압증기법에서는 기체 또는 포화 수증기의 투과성이 우수한 물질을 사용해야 한다. 어느 담체를 이용하는 경우에도 지표균 포자의 D 값에 영향이 없는 것을 확인해야 한다. 제품이 액상인 경우에는 제품과 동일한 용액 또는 지표균에 대한 멸균효과가 동등한 용액에 지표균의 포자를 현탁시켜도 된다. 단, 용액에 지표균의 포자를 현탁시키는 경우 포자가 발아하여 저항성에 영향을 미치지 않도록 해야 한다

대표적인 지표균의 예는 표 1과 같다.

표 1  대표적인 지표균의 종류

멸균법	지표균*	균주명
고압증기법	Geobacillus stearothermophilus	ATCC 7953, NBRC 13737, JCM 9488, KCTC 2107, ATCC 12980, NBRC 12550, JCM 2501, KCTC 1752
건열법	Bacillus atrophaeus	ATCC 9372, NBRC 13721, KCTC 1022
기체법	Bacillus atrophaeus	ATCC 9372, NBRC 13721, KCTC 1022

* 이들 이외에도 생물 (미생물) 부하 중에서 해당 멸균법에 대하여 가장 저항성이 강한 균을 지표균으로 사용할 수 있다.

4.1.1 BI의 D 값

D 값의 측정법에는 일반적으로 생존 곡선법 또는 분획음성법, Stumbo, Murphy & Cochran법과 Limited Spearman-Karber법 등이 있다. 판매되는 BI를 사용 할 때에는 라벨에 표시된 D 값이 ISO 기준 (ISO 11138-1)에 따라서 엄격히 규정된 조건하에서 표준화된 생물지표 평가 장치 (BIER : Biological indicator evaluation resistometer)를 이용하여 측정된 것이라면 통상 사용 시에는 D 값을 측정할 필요가 없다. 보통 라벨에 표시되어 있는 D 값은 ± 30 초 이내의 분산이 허용된다.

4.1.2 BI의 설치방법

(i) 피멸균물이 건조형인 경우

건조형 BI를 미리 정해진 제품 또는 제품과 동등한 멸균효과를 나타내는 적절한 유사제품내의 가장 멸균하기 어려운 부위에 설치한다. 보통 제품과 같은 모양으로 포장하고 이차포장이 되어 있는 경우에는 이것에 따른다.

(ii) 피멸균물이 습식형인 경우

제품과 동일한 용액 또는 적절한 유사 용액에 지표균의 포자를 BI로써 현탁시키고, 이것을 가장 멸균하기 어려운 부위에 설치한다.

4.1.3 지표균의 배양조건

보통 대두카제인소화액체배지를 이용한다. 일반적인 배양 조건은 G. stearothermophilus 의 경우에는 55 ∼ 60 ℃에서 7 일간, B. atrophaeus의 경우에는 30 ∼ 35 ℃에서 7 일간이다.

4.2 화학적 지표체 (CI)

CI는 열, 기체 또는 방사선조사 작용을 화학 또는 물리변화에 의하여 변색하는 물질을 종이 등에 도포 또는 인쇄한 것으로 용도별로 세 가지 종류가 있다. 첫 번째는 멸균처리의 유무를 구별하기 위해 이용되는 것, 두 번째는 BI의 사멸조건에 어느 정도의 안전시간을 더한 멸균조건으로 색이 변화하는 멸균공정관리에 이용하는 것, 세 번째는 진공형 멸균장치의 진공배기 능력시험을 실시하는 경우에 이용하는 Bowie & Dick type의 것이 있다.

4.3 선량계

방사 (감마) 선법에서의 멸균 효과는 피멸균물의 흡수선량에 의존하므로 멸균공정의 관리는 주로 흡수선량의 측정으로 한다. 선량계의 설치 위치는 조사용기의 최저선량부위 또는 최저선량부위에 대하여 양적 관계가 분명하게 되어 있어 관리가 용이한 부위이다. 측정은 조사 로트마다 하며, 동일 로트를 형성하는 조사 용기수가 많은 경우에는 조사실내의 유효조사구간 내에 항상 1 개 이상의 선량계를 사용한다. 선량계에 따라서는 조사 전후 및 조사 중의 환경조건 (온도, 습도, 자외선 및 결과해석까지의 시간 등)에 영향을 받는 경우도 있으므로 주의를 한다. 감마선 및 제동방사선멸균의 흡수선량을 측정하는 실용적인 선량계로는 착색 polymethylmethacrylate 선량계, 투명 polymethyl - methacrylate 선량계, ceric-cerous 선량계 및 alanine 선량계 등이 있다. 감마선멸균용 선량계는 보통 에너지 3 MeV 미만의 전자선을 이용하는 멸균의 공정 관리에는 적합하지 않다. 전자선멸균용 선량계는 cellulose acetate 선량계와 radiochromic film 선량계 등이 있다. 실용적인 선량계를 사용하는 경우에는 적절한 국가표준 또는 국제표준 선량계측시스템에 의하여 교정해야 한다.

5. 미생물을 지표로 하는 멸균 조건 설정법

피멸균물의 멸균법에 대한 특성, 생물 (미생물) 부하 등을 고려하여 다음 중에서 적절한 방법을 선택하고 멸균조건을 설정한다.

5.1 Half-cycle 법

피멸균물 위에 존재하는 생물 (미생물) 부하수나 검출균의 해당 멸균법에 대한 저항성과는 관계없이 BI에 포함된 106 개의 지표균 모두를 사멸시키는 처리시간의 두 배의 멸균 시간을 채용하는 방법을 말한다.

5.2 Overkill 법

피멸균물에 존재하는 생물 (미생물) 부하수나 검출균의 당해 멸균법에 대한 저항성에 관계없이 10-6 이하의 무균성 보증 수준을 얻을 수 있는 조건에서 멸균을 시행하는 것을 전제로 한다. 보통 D 값이 1.0 이상의 균수를 알고있는 BI를 이용하여 지표균을 10-12 (12 D) 감소시키는 것과 동등한 멸균조건을 적용하는 방법을 말한다.

5.3 BI와 생물 (미생물) 부하의 병용법

광범위한 생물 (미생물) 부하 조사로 얻어진 평균 생물 (미생물) 부하수에 3배의 표준편차를 더한 것을 보통 최대 생물 (미생물) 부하수로 보고 목표로 하는 무균보증수준을 근거로 BI를 이용하여 멸균시간 (또는 멸균선량)을 산출하는 방법을 말한다. 이 방법을 이용할 경우에는, 피멸균물의 생물 (미생물) 부하수를 빈번히 조사하고 검출균의 해당 멸균법에 대한 저항성 측정도 정기적으로 실시해야한다. 생물 (미생물) 부하조사에 있어서 BI의 지표균보다 저항성이 강한 균종이 검출된 경우에는 이것을 지표균으로 한다.

멸균 시간 (또는 멸균 선량)= D × log(N0/N)

D : BI의 D 값

N : 목적으로 하는 무균성 보증수준

N0 : 피멸균물의 최대 생물 (미생물) 부하

5.4 절대 생물 (미생물) 부하법

피멸균물이나 제조 환경으로부터 검출된 균에 대하여 해당 멸균법에 대한 저항성 조사를 하고, 그 가운데서 가장 저항성이 강한 균을 선택하고, 그 균의 D 값을 이용하여 피멸균물의 생물 (미생물) 부하수를 근거로 멸균조건을 설정하는 방법을 말한다. 생물 (미생물) 부하수는 보통 광범위한 생물 (미생물) 부하 조사로 얻어진 평균 생물 (미생물) 부하수에 3 배의 표준편차를 더한 것이 이용된다. 이 방법을 채택하는 경우에는 일상적인 생물 (미생물) 부하 관리에 있어서 균수 계측 및 검출균의 해당 멸균법에 대한 저항성 측정을 빈번하게 실시해야한다.

항생물질의 계와 류 분류

I. 글리코펩타이드계  Glycopeptide Antibiotics

1. 반코마이신류  Vancomycin Antibiotic Drugs

1) 반코마이신은 Streptomyces orientalis를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 반코마이신, 반코마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 반코마이신(C66H75Cl2N9O24)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 반코마이신염산염표준품(C66H75Cl2N9O24․HCl) 1.025 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 테이코플라닌류  Teicoplanin Antibiotic Drugs

1) 테이코플라닌은 Actinoplanes teichomyceticus를 배양하여 제조하는 테이코플라닌 A3, 테이코플라닌 A2-1, 테이코플라닌 A2-2, 테이코플라닌 A2-3, 테이코플라닌 A2-4, 테이코플라닌 A2-5 및 관련물질의 혼합물이다.

2) 이 종류 의약품은 테이코플라닌, 테이코플라닌의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 테이코플라닌 A3 (C72H68Cl2N8O28) 15 % 이하 , A2군 [테이코플라닌 A2-1 (C88H95Cl2N9O33), 테이코플라닌 A2-2 (C88H97Cl2N9O33), 테이코플라닌 A2-3 (C88H97Cl2N9O33), 테이코플라닌 A2-4 (C89H99Cl2N9O33), 테이코플라닌 A2-5 (C89 H99Cl2N9O33)] 80 % 이상 및 관련물질 5 % 이하의 혼합물의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 테이코플라닌표준품 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

II. 리파마이신계  Rifamycin Antibiotics

1. 리파마이신 SV류  Rifamycin SV Antibiotic Drugs

1) 리파마이신 SV는 Streptomyces mediterranei를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 리파마이신 SV, 리파마이신 SV의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 리파마이신 SV(C37H47NO12)으로서의 양을 단위로 표시한다.

4) 리파마이신 SV표준품(C37H47NO12) 1.127 μg는 1 단위(역가)에 해당한다.

2. 리파부틴류  Rifabutin Antibiotic Drugs

1) 리파부틴은 리파부틴 S로부터 합성하는 항생물질로 (1) 6, 9-디히드로-5,17,19,21-테트라히드록시-8,9-(2-스피로-(N-이소부틸-4-피페리딜)-2,5-디히드로-1H-이미다조]-23-메톡시-2,4,12,16,18,20,22-헵타메틸-6-옥소-2,7-(에폭시펜타데카-[1,11,13]-트리엔이미노)-나프토-[2,1-b]-푸란-1,11-(2H)-디온-21-아세테이트 (2) 4-데옥소-3,4-[2-스피로-(N-이소부틸-4-피페리딜)-2,5-디히드로-1H-이미다조]-리파마이신 S이다.

2) 이 종류 의약품은 리파부틴, 리파부틴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 리파부틴(C46H64N4O11)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시 한다.

4) 리파부틴표준품(C46H64N4O11) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 리팍시민류  Rifaximin Antibiotic Drugs

1) 리팍시민은 Streptomyces mediterranei를 배양하여 얻어지는 리파마이신 SV의 화학적 유도체로 4-데옥시-4-메틸피리도-(1＇,2＇-1,2)-이미다조-(5, 4 C)-리파마이신 SV이다.

2) 이 종류의 의약품은 리팍시민 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류의 의약품의 역가는 리팍시민(C43H51N3O11)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 리팍시민표준품(C43H51N3O11) 1.008 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 리팜피신류  Rifampicin Antibiotic Drugs

1) 리팜피신은 Streptomyces mediterranei을 배양하여 제조하는 리파마이신 SV의 화학적 유도체로 3-[(4-메틸-1-피페라지닐이미노)]메틸 리피마이신 SV이다.

2) 이 종류 의약품은 리팜피신, 리팜피신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 리팜피신(C43H58N4O12)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 리팜피신표준품(C43H58N4O12) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

III. 린코마이신계  Lincomycin Antibiotics

1. 린코마이신류  Lincomycin Antibiotic Drugs

1) 린코마이신은 Streptomyces lincolnensis var. lincolnensis를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 린코마이신, 린코마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 린코마이신(C18H34N2O6S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 린코마이신염산염표준품(C18H34N2O6S․HCl․H2O) 1.112 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 클린다마이신류  Clindamycin Antibiotic Drugs

1) 클린다마이신은 린코마이신의 화학적 유도체로서 (7S)-7-클로르-7-데옥시린코마이신이다.

2) 이 종류 의약품은 클린다마이신, 클린다마이신의 염 또는 에스테르유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 클린다마이신(C18H33ClN2O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 클린다마이신염산염표준품(C18H33ClN2O5S․HCl․H2O) 1.128 mg은 1 mg(역가)에 해당하며, 클린다마이신포스페이트표준품(C18H34ClN2O8PS) 1.252 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

IV. 마크로라이드계  Macrolide Antibiotics

1. 디리스로마이신류  Dirithromycin Antibiotic Drugs

1) 디리스로마이신은 14 개 원소로 구성된 락톤환을 가지고 있는 마크로라이드이며, 에리트로마이신의 9번 위치 케톤이 아민으로 변화된 에리트로마이실아민의 11위치의 수산기가 2-(2-메톡시에톡시)아세트알데히드와 축합하여 형성되는 에리트로마이실아민옥사진유도체로 9-(S)-9-데옥시-11-데옥시-9,11-[이미노[(1R)-2-(2-메톡시에톡시)에틸리덴]옥시]에리트로마이신이다.

2) 이 종류 의약품은 디리트로마이신, 그 이성체인 에피디리트로마이신 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 디리트로마이신(C42H78N2O14)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 디리트로마이신표준품(C42H78N2O14)의 무수물 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 로키타마이신류  Rokitamycin Antibiotic Drugs

1) 로키타마이신은 Streptomyces Kitasatoensis 변이주를 배양하여 제조하는 로이고마이신 A5의 3"위의 수산기를 프로피오닐화하여 제조하는 3＂-O-프로피오닐로이고마이신 A5이다.

2) 이 종류 의약품은 로키타마이신, 로키타마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 로키타마이신(C42H69NO15)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 로키타마이신표준품(C42H69NO15) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 록시트로마이신류  Roxithromycin Antibiotic Drugs

1) 록시트로마이신은 에리트로마이신 A의 9-[O-(2-메틸에톡시)메틸옥심]의 유도체이다

2) 이 종류 의약품은 록시트로마이신 및 록시트로마이신을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 록시트로마이신(C41H76N2O15)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4. 미데카마이신류  Midecamycin Antibiotic Drugs

1) 미데카마이신은 Streptomyces mycarofaciens를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 미데카마이신, 미데카마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 미데카마이신(C41H67NO15)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 미데카마이신표준품(C41H67NO15) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 스피라마이신류  Spiramycin Antibiotic Drugs

1) 스피라마이신은 Streptomyces ambofaciens를 배양하여 제조하는 스피라마이신Ⅰ, 스피라마이신Ⅱ, 스피라마이신Ⅲ의 혼합물 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 스피라마이신, 스피라마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 스피라마이신Ⅰ(C43H74N2O14)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 스피라마이신표준품(C43H74N2O14) 1 mg은 3200 단위(역가)에 해당한다.

6. 아세틸스피라마이신류  Acetylspiramycin Antibiotic Drugs

1) 아세틸스피라마이신은 스피라마이신의 아세틸 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 아세틸스피라마이신 및 아세틸스피라마이신을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아세틸스피라마이신Ⅱ(C47H78N2O16)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아세틸스피라마이신표준품(C47H78N2O16) 0.8122 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

7. 아지트로마이신류  Azithromycin Antibiotic Drugs

1) 아지트로마이신은 Streptomyces erythreus를 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 9-데옥소-9a-메틸-9a-aza-9a-호모에리트로마이신 A이다.

2) 이 종류 의약품은 아지트로마이신 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아지트로마이신(C38H72N2O12)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아지트로마이신표준품(C38H72N2O12․2H2O) 1.049 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

8. 에리트로마이신류  Erythromycin Antibiotic Drugs

1) 에리트로마이신은 Streptomyces erythreus를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 만드는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 에리트로마이신, 에리트로마이신의 염 또는 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 역가는 에리트로마이신(C37H67NO13)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 에리트로마이신표준품(C37H67NO13․2H2O) 1.053 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

9. 조사마이신류  Josamycin Antibiotic Drugs

1) 조사마이신은 Streptomyces narbonensis var. josamyceticus를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 조사마이신, 조사마이신의 염 또는 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 조사마이신(C42H69NO15)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 조사마이신표준품(C42H69NO15) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당하며, 조사마이신프로피오네이트표준품(C45H73NO16) 1.068 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

10. 미데카마이신아세테이트류  Midecamycin Acetate Antibiotic Drugs

1) 미데카마이신아세테이트은 미데카마이신의 아세트산에스테르이다.

2) 이 종류 의약품은 미데카마이신아세테이트 및 미데카마이신아세테이트를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 미데카마이신아세테이트(C45H71NO17)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 미데카마이신아세테이트표준품(C45H71NO17) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

11. 클래리트로마이신류  Clarithromycin Antibiotic Drugs

1) 클래리트로마이신은 에리트로마이신의 6위치의 수산기를 메틸화한 것으로서 6-O-메틸에리트로마이신이다.

2) 이 종류 의약품은 클래리트로마이신, 클래리트로마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 클래리트로마이신(C38H69NO13)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 클래리트로마이신표준품(C38H69NO13)의 무수물로서 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

12. 키타사마이신류  Kitasamycin Antibiotic Drugs

1) 키타사마이신은 Streptomyces kitasatoensis을 배양하여 제조하는 로이코마이신 A1, 로이코마이신 A3, 로이코마이신 A4, 로이코마이신 A5, 로이코마이신 A6, 및 로이코마이신 A7, 로이코마이신 A8, 로이코마이신 A9 및 로이코마이신 A13등의 혼합물이다.

2) 이 종류 의약품은 키타사마이신, 키타사마이신의 염 또는 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 로이코마이신 A5(C39H65NO14)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 키타사마이신표준품(C39H65NO14) 0.530 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

13. 텔리트로마이신류  Telithromycin Antibiotic Drugs

1) 텔리트로마이신은 에리트로마이신 A의 3 위치에 L-cladinose기 대신 ketone기를 가지고 있는 반합성 유도체로서 11,12-디데옥시-3-데[(2,6-디데옥시-3-C-메틸-3-O-메틸-알파-L-리보-헥소피라노실)옥시]-6-O-메틸-옥소-12,11-[옥시카보닐[[4-[4-(3-피리디닐)-1H-이미다졸-1-일]부틸]이미놀]-에리트로마이신이다.

2) 이 종류 의약품은 텔리트로마이신 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 텔리트로마이신(C43H65N5O10)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 텔리트로마이신표준품(C43H65N5O10) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

V. 모노박탐계  Monobactam Antibiotics

1. 아즈트레오남류  Aztreonam Antibiotic Drugs

1) 아즈트레오남은 합성하여 제조하는 항생물질로 [2S-[2α,3β(Z)]]-2-[[[1-(2-아미노-4-티아졸일)-2-[(2-메틸-4-옥소-1-설포-3-아제티디닐)아미노]-2-옥소에틸리딘]아미노]옥시]-2-메틸-프로피온산이다.

2) 이 종류 의약품은 아즈트레오남, 아즈트레오남의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아즈트레오남(C13H17N5O8S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아즈트레오남표준품(C13H17N5O8S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 카루모남류  Carumonam Antibiotic Drugs

1) 카루모남은 Pseudomonas acidophilla G-6302를 배양하여 제조하거나 항생물질의 유도체 또는 다른 방법으로 제조한 (+)-(Z)-[[[1-(2-아미노-4-티아졸일)-2-[[(2S,3S)-2-(카르바모일옥시메틸)-4-옥소-1-설포-3-아제티디닐]아미노]-2-옥소에틸리딘]아미노]옥시]아세트산이다.

2) 이 종류 의약품은 카루모남, 카루모남의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 카루모남(C12H14N6O10S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 카루모남나트륨표준품(C12H12N6Na2O10S2) 1.094 mg은 1 mg(역가)을 함유한다.

VI. 블레오마이신계  Bleomycin Antibiotics

1. 블레오마이신류  Bleomycin Antibiotic Drugs

1) 블레오마이신은 Streptomyces verticillus을 배양하여 제조하는 블레오마이신산, 블레오마이신 A1, 블레오마이신디메틸 A2, 블레오마이신 A2, 블레오마이신 A2'-a, 블레오마이신 A2'-b, 블레오마이신 A5, 블레오마이신 B1', 블레오마이신 B2 및 블레오마이신 B4 등의 혼합물이다.

2) 이 종류 의약품은 블레오마이신, 블레오마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 블레오마이신 A2(X- = C1-: C55H84ClN17O21S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 블레오마이신염산염표준품(C55H84ClN17O21S3․HCl) 1.03 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

VII. 세펨계  Cephem Antibiotics

1. 세파드록실류  Cefadroxil Antibiotic Drugs

1) 세파드록실은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[(R)-2-아미노-2-(p-히드록시페닐)아세틸아미노]-3-메틸-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-(D-α-아미노-p-히드록시페닐아세틸아미노)-3-메틸-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파드록실, 세파드록실의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파드록실(C16H17N3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파드록실표준품(C16H17N3O5S․H2O) 1.050 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 세파만돌류  Cefamandole Antibiotic Drugs

1) 세파만돌은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-D-만델아미도-3-[[(1-메틸-1-H테트라졸-5-일)티오]에틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-D-만델아미도-3[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파만돌, 세파만돌의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파만돌(C18H18N6O5S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파만돌표준품(C18H17LiN6O5S2) 1.013 mg은 1 mg(역가)에 해당하고 세파만돌나페이트표준품(C19H17N6NaO6S2) 1.108 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 세파세트릴류  Cefacetrile Antibiotic Drugs

1) 세파세트릴은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-아세톡시메틸-7-시아노아세틸아미노-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 3-아세톡시메틸-7-시아노아세틸아미노-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파세트릴, 세파세트릴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파세트릴(C13H13N3O6S)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파세트릴나트륨표준품(C13H12N3NaO6S) 1.065 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 세파제돈류  Cefazedone Antibiotic Drugs

1) 세파제돈의 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(3,5-디클로로-4-옥소-1(4H)-피리디닐)아세틸]아미노]-3-[[(5-메틸-1,3,4-티아디아졸-2-일)-티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 3-(5-메틸-1,3,4-티아디아졸일-2-메캅토메틸)-7-(3, 5-디클로로-4-피리돈-1-일아세트아미도)-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파제돈, 세파제돈의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파제돈(C18H15Cl2N5O5S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파제돈나트륨표준품(C18H14Cl2N5NaO5S3) 1.040 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 세파졸린류  Cefazolin Antibiotic Drugs

1) 세파졸린은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을  배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-[[(5-메틸-1,3,4-티아디아졸-2-일)티오]메틸]-8-옥소-7-[(1H-테트라졸-1-일아세틸)아미노]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-(1-(1H)-테트라졸일아세틸아미노)-3-[2-(5-메틸-1,3,4-티아디아졸일)티오메틸]-Δ3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파졸린, 세파졸린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파졸린(C14H14N8O4S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파졸린표준품(C14H14N8O4S3) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 세파클러류  Cefaclor Antibiotic Drugs

1) 세파클러는 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노페닐아세틸]아미노]-3-클로로-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 3-클로로-7-D-(2-페닐글리신아미도)-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파클러, 세파클러의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파클러(C15H14ClN3O4S)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파클러표준품(C15H14ClN3O4S․H2O) 1.049 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

7. 세파트리진류  Cefatrizine Antibiotic Drugs

1) 세파트리진은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노-(4-히드록시페닐)아세틸]아미노]-8-옥소-3-[(1H-1,2,3-트리아졸-4-일티오)메틸]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[D-α-아미노-α-(4-히드록시페닐)아세트아미도]-3-(1,2,3-트리아졸-4(5)-일티오메틸)-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파트리진, 세파트리진의 부가물 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파트리진(C18H18N6O5S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파트리진프로필렌글리콜표준품(C18H18N6O5S2․C3H8O2) 1.165 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

8. 세파피린류  Cefapirin Antibiotic Drugs

1) 세파피린은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-[(아세틸옥시)메틸]-8-옥소-7-[[(4-피리디닐티오)아세틸]아미노]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[α-(4-피리딜티오)아세타미도]세팔로스포란산이다.

2) 이 종류 의약품은 세파피린, 세파피린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세파피린(C17H17N3O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세파피린나트륨표준품(C17H16N3NaO6S2) 1.052 -mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

9. 세팔렉신류  Cefalexin Antibiotic Drugs

1) 세팔렉신은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노페닐아세틸]아미노]-3-메틸-8-옥소-5-티아-1-아자비사이클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-(D-2-아미노-2-페닐아세트아미도)-3-메틸-Δ3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세팔렉신, 세팔렉신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세팔렉신(C16H17N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세팔렉신표준품(C16H17N3O4S․H2O) 1.071 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

10. 세팔로틴류  Cefalotin Antibiotic Drugs

1) 세팔로틴은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-[(아세틸옥시)메틸]-8-옥소-7-[(2-티에닐아세틸)아미노]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-(2-티에닐아세트아미도)세팔로스포란산이다.

2) 이 종류 의약품은 세팔로틴, 세팔로틴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세팔로틴(C16H16N2O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세팔로틴나트륨표준품(C16H15N2NaO6S2)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1.055 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

11. 세페타메트피복실류  Cefetamet Pivoxil Antibiotic Drugs

1) 세페타메트피복실은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질 유도체(세페타메트)의 피바로일옥시메틸유도체로서, (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-3-메틸-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 피바로일옥시메틸에스테르, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-3-메틸-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 피바로일옥시메틸에스테르이다.

2) 이 종류 의약품은 세페타메트피복실, 세페타메트피복실의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세페타메트(C14H15N5O5S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세페타메트피복실염산염표준품(C20H25N5O7S2ㆍHCl) 1.379 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

12. 세페핌류  Cefepime Antibiotic Drugs

1) 세페핌은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) 1-[[(6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-2-카르복시-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-3-일]메틸]-1-메틸피롤리디늄, (2) 7-[(Z)-2-(2-아미노티아졸-4-일)-2-메톡시이미노아세트아미도]-3-(1-메틸피롤리디니오)메틸-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세페핌, 세페핌의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세페핌(C19H24N6O5S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 무수물로 환산한 세페핌염산염표준품(C19H24N6O5S2․2HCl․H2O) 1.152 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

13. 세포니시드류  Cefonicid Antibiotic Drugs

1) 세포니시드는 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-히드록시페닐아세틸]아미노]-8-옥소-3[[[1-(설포메틸)-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[(R)-만델아미도]-8-옥소-3[[[1-(설포메틸)-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포니시드, 세포니시드의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포니시드(C18H18N6O8S3)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포니시드나트륨표준품(C18H16N6Na2O8S3) 1.081 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

14. 세포디짐류  Cefodizime Antibiotic Drugs

1) 세포디짐은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-3-[[[5-(카르복시메틸)-4-메틸-2-티아졸일]티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-3-[[[5-(카르복시메틸)-4-메틸-2-티아졸일]티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72(Z)-(O-메틸옥심)이다.

2) 이 종류 의약품은 세포디짐, 세포디짐의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포디짐(C20H20N6O7S4)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포디짐나트륨표준품(C20H18N6Na2O7S4) 1.075 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

15. 세포라니드류  Ceforanide Antibiotic Drugs

1) 세포라니드는 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[[2-(아미노메틸)페닐]아세틸]아미노]-3-[[[1-(카르복시메틸)-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(α-아미노-O-톨일)아세트아미도]-3-[[[1-(카르복시메틸)-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포라니드, 세포라니드의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포라니드(C20H21N7O6S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포라니드표준품(C20H21N7O6S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

16. 세포탁심류  Cefotaxime Antibiotic Drugs

1) 세포탁심은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosymematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-[(아세틸옥시)메틸]-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)-아세틸]아미노]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-3-(히드록시메틸)-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72-(Z)-(O-메틸옥심) 아세트산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포탁심, 세포탁심의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포탁심(C16H17N5O7S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포탁심나트륨표준품(C16H16N5NaO7S2) 1.048 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

17. 세포테탄류  Cefotetan Antibiotic Drugs

1) 세포테탄은 Streptomyces oganonensis을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로  (1) (6R,7S)-7-[[[4-(2-아미노-1-카르복시-2-옥소에틸이디엔)-1,3-디티에탄-2-일]카르보닐]아미노]-7-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7S)-7-[4-(카르바모일카르복시메틸렌)-1,3-디티에탄-2-카르복스아미도]-7-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포테탄, 세포테탄의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포테탄(C17H17N7O8S4)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포테탄표준품(C17H17N7O8S4) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

18. 세포티암류  Cefotiam Antibiotic Drugs

1) 세포티암은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2-아미노-4-티아졸일)아세틸]아미노]-3-[[[1-[2-(디메틸아미노)에틸]-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[2-(아미노티아졸-4-일)아세트아미도]-3-[[[1-(2-디메틸아미노에틸)-1H-테트라졸-5-일]티오]메틸]세프-3-엠-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포티암, 세포티암의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포티암(C18H23N9O4S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포티암염산염표준품(C18H23N9O4S3․2HCl) 1.139mg은 1mg(역가)에, 세포티암헥세틸염산염표준품(C27H37N9O7S3․ 2HCl) 1.463 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

19. 세포페라존류  Cefoperazone Antibiotic Drugs

1) 세포페라존은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-[[(4-에틸-2,3-디옥소-1-피페라지닐)카르보닐]아미노](4-히드록시페닐)아세틸]아미노]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[D-(-)-α-(4-에틸-2,3-디옥소-1-피페라진카르복스아미도)-α-(4-히드록시페닐)아세트아미도]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세포페라존, 세포페라존의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세포페라존(C25H27N9O8S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세포페라존표준품(C25H27N9O8S2․2H2O) 1.056 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

20. 세폭시틴류  Cefoxitin Antibiotic Drugs

1) 세포시틴은 Streptomyces lactamdurans을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7S)-3-[[(아미노카르보닐)옥시]메틸]-7-메톡시-8-옥소-7-[(2-티에닐아세틸)아미노]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 3-카르바모일옥시메틸-7α-메톡시-7-[2-(2-티에닐)아세트아미도]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세폭시틴, 세폭시틴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세폭시틴(C16H17N3O7S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세폭시틴표준품(C16H17N3O7S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

21. 세푸록심류  Cefuroxime Antibiotic Drugs

1) 세푸록심은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-3-[[(아미노카르보닐)옥시]메틸]-7-[[(2Z)-2-푸라닐(메톡시이미노)아세틸]아미노]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 (2) (6R,7R)-3-카르바모일옥시메틸-7-[2-(2-푸릴)-2-(메톡시이미노)아세트아미도]세프-3-엠-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세푸록심, 세푸록심의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세푸록심(C16H16N4O8S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세푸록심나트륨표준품(C16H15N4NaO8S) 1.052 mg은 1 mg(역가)에 해당하고 세푸록심악세틸표준품(C20H22N4O10S) 1.203 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

22. 세프디니르류  Cefdinir Antibiotic Drugs

1) 세프디니르는 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(히드록시이미노)아세틸]아미노]-3-에테닐-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) syn-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)-2-히드록시이미노아세트아미도]-3-비닐-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프디니르, 세프디니르의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프디니르(C14H13N5O5S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프디니르표준품(C14H13N5O5S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

23. 세프디토렌피복실류  Cefditoren Pivoxil Antibiotic Drugs

1) 세프디토렌피복실은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체(세프디토렌)의 피바로일옥시메틸유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-3-[(1Z)-2-(4-메틸-5-티아졸일)에테닐]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 피바로일옥시메틸에스테르, (2) (+)-(6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-3-[(Z)-2-(4-메틸-5-티아졸일)비닐]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72-(Z)-(O-메틸옥심) 피바로일옥시메틸에스테르이다.

2) 이 종류 의약품은 세프디토렌피복실, 세프디토렌피복실의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프디토렌(C19H18N6O5S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프디토렌피복실표준품(C25H28N6O7S3) 1.225 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

24. 세프라딘류  Cefradine Antibiotic Drugs

1) 세프라딘은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노-1,4-시클로헥사디엔-1-일아세틸아미노]-3-메틸-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-(D-2-아미노-2-(1,4-시클로헥사디에닐)아세트아미도]-3-메틸-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프라딘, 세프라딘의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프라딘(C16H19N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프라딘표준품(C16H19N3O4S․2H2O) 1.111 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

25. 세프록사딘류  Cefroxadine Antibiotic Drugs

1) 세프록사딘은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노-(1,4-시클로헥사디엔-1-일아세틸]아미노]-3-메톡시-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[D-2-아미노-2-(1,4-시클로헥사디에닐)아세트아미드]-3-메톡시-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프록사딘, 세프록사딘의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프록사딘(C16H19N3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프록사딘표준품(C16H19N3O5S․2H2O) 1.099 mg은 1 mg (역가)에 해당한다.

26. 세프메녹심류  Cefmenoxime Antibiotic Drugs

1) 세프메녹심은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-아미노티아졸일)글리옥실아미도]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72-(Z)-(O-메틸옥심)이다.

2) 이 종류 의약품은 세프메녹심, 세프메녹심의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프메녹심(C16H17N9O5S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프메녹심염산염표준품(C16H17N9O5S3․1/2HC1) 1.036 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

27. 세프메타졸류  Cefmetazole Antibiotic Drugs

1) 세프메타졸은 Streptomyces jumonjinensis, Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosymematum을 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7S)-7-[[[(시아노메틸)티오]아세틸]아미노]-7-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[(시아노메틸티오)아세트아미도]-7α-메톡시-3-[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오메틸]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프메타졸, 세프메타졸의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프메타졸(C15H17N7O5S3)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프메타졸표준품(C15H17N7O5S3) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

28. 세프미녹스류  Cefminox Antibiotic Drugs

1) 세프미녹스는 Streptomyces chartseusis, Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7S)-7-[[[[(2S)-2-아미노-2-카르복시에틸]티오]아세틸]아미노]-7-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일-)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-(2-D-아미노-2-카르복시에틸티오아세트아미도)-7α-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프미녹스, 세프미녹스의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프미녹스(C16H21N7O7S3)로서의 양을 질량(역가)으로 표시 한다.

4) 세프미녹스나트륨표준품(C16H20N7NaO7S3․7H2O) 1.285 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

29. 세프부페라존류  Cefbuperazone Antibiotic Drugs

1) 세프부페라존은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7S)-7-[[(2R,3S)-2-[[(4-에틸-2,3-디옥소-1-피페라지닐)카르보닐]아미노]-3-히드록시-1-옥소부틸]아미노]-7-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[D-α-(4-에틸-2,3-디옥소-1-피페라진카르복스아미도)-β-(S)-히드록시부탄아미도]-7α-메톡시-3-[5-(1-메틸-1,2,3,4-테트라졸일)티오메틸]-Δ3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프부페라존, 세프부페라존의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프부페라존(C22H29N9O9S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프부페라존표준품(C22H29N9O9S2․2H2O) 1.057 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

30. 세프수로딘류  Cefsulodin Antibiotic Drugs

1) 세프수로딘은 Cephalosporium acremonium또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) 4-(아미노카르보닐)-1-[[(6R,7R)-2-카르복시-8-옥소-7-[[(2R)-페닐설포아세틸]아미노]-5-티아-1-아자비시를로[4.2.0]옥트-2-엔-3-일]메틸]피리디늄, (2) 7-(α-설포페닐아세트아미도)-3-(4'-카르바모일피리디늄)메틸-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프수로딘, 세프수로딘의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프수로딘(C22H20N4O8S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시 한다.

4) 세프수로딘나트륨표준품(C22H19N4NaO8S2) 1.041 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

31. 세프카펜피복실류  Cefcapene Pivoxil Antibiotic Drugs

1) 세프카펜피복실은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하는 항생물질 유도체(세프카펜)의 피바로일옥시메틸 유도체로서 (1) (6R,7R)-3-[[(아미노키르보닐)옥시]메틸]-7-[[(2Z)-2-(2-아미노-4-티아졸일)-1-옥소-2-펜테닐]아미노]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 (2,2-디메틸-1-옥소프로폭시)메틸 에스테르, (2) (6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-아미노티아졸-4-일)-2-펜테노일아미노]-3-(카바모일옥시메틸)-3-세펨-4-카르본산 피바로일옥시메틸 에스테르이다.

2) 이 종류 의약품은 세프카펜피복실, 세프카펜피복실의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프카펜(C17H19N5O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프카펜피복실염산염표준품(C23H29N5O8S2․HCl․H2O) 1.372 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

32. 세프타지딤류  Ceftazidime Antibiotic Drugs

1) 세프타지딤은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) 1-[[(6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)[(1-카르복시-1-메틸에톡시)이미노]아세틸]아미노]-2-카르복시-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-3-일]메틸]피리디늄, (2) 1-[[(6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-2-카르복시-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-3-일]메틸]피리디늄 히드록시드 72-(Z)-[O- (1-카르복시-1-메틸에틸)옥심]이다.

2) 이 종류 의약품은 세프타지딤, 세프타지딤의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프타지딤(C22H22N6O7S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프타지딤표준품(C22H22N6O7S2․5H2O) 1.165 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

33. 세프테람피복실류  Cefteram Pivoxil Antibiotic Drugs

1) 세프테람피복실은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질 유도체(세프테람)의 피바로일옥시메틸 유도체로 (1) (+)-(6R,7R)-7-[(Z)-2-(2-아미노-4-티아졸일)-2-(메톡시이미노)아세트아미도]-3-[(5-메틸-2H-테트라졸-2-일)메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 피바로일옥시메틸에스테르, (2) 7-[2-(2-아미노티아졸-4-일)-2-syn-메톡시이미노아세트아미도]-3-[2-(5-메틸-1,2,3,4-테트라졸일)메틸]-Δ3-세펨-4-카르본산 피바로일옥시메틸에스테르이다.

2) 이 종류 의약품은 세프테람피복실, 세프테람피복실의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프테람(C16H17N9O5S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프테람피복실표준품(C22H28N9O7S2․C9H11O3S) 1.656 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

34. 세프테졸류  Ceftezole Antibiotic Drugs

1) 세프테졸은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-8-옥소-7-[(1H-테트라졸-1-일아세틸)아미노]-3-[(1,3,4-티아디아졸-2-일티오)메틸]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-카르본산, (2) 7-(1H-테트라졸-1-일)아세트아미도-3-(1,3,4-티아디아졸-2-일티오)메틸세프-3-엠-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프테졸, 세프테졸의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프테졸(C13H12N8O4S3)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프테졸표준품(C13H12N8O4S3) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

35. 세프트리악손류  Ceftriaxone Antibiotic Drugs

1) 세프트리악손은 Cephalosporium acremonium을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-8-옥소-3-[[(1,2,5,6-테트라히드로-2-메틸-5,6-디옥소-12,2,4-트리아진-3-일)-티오]메틸]-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-3-[[(2,5-디히드로-6-히드록시-2-메틸-5-옥소-as-트리아진-3-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72-(Z)-(O-메틸옥심)이다.

2) 이 종류 의약품은 세프트리악손, 세프트리악손의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프트리악손(C18H18N8O7S3)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프트리악손나트륨표준품(C18H16N8Na2O7S3․7/2H2O) 1.193 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

36. 세프티부텐류  Ceftibuten Antibiotic Drugs

1) 세프티부텐은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[(2Z)-2-(2-아미노-4-티아졸일)-4-카르복시-1-옥소-2-부테닐]아미노]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[(Z)-2-(2-아미노티아졸-4-일)-4-카르복시-2-부테노일아미노]-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프티부텐, 세프티부텐의 염 및 이것을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프티부텐(C15H14N4O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프티부텐염산염표준품(C15H14N4O6S2․HCl․H2O) 1.133 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

37. 세프티족심류  Ceftizoxime Antibiotic Drugs

1) 세프티족심은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[(2Z)-2-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[2-(2-이미노-4-티아졸일)글리옥실아미도]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 72-(Z)-(O-메틸옥심)이다.

2) 이 종류 의약품은 세프티족심, 세프티족심의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프티족심(C13H13N5O5S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프티족심표준품(C13H13N5O5S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

38. 세프포독심프록세틸류  Cefpodoxime Proxetil Antibiotic Drugs

1) 세프포독심프록세틸은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질 유도체(세프포독심)의 이소프로폭시카르보닐옥시에틸 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)(메톡시이미노)아세틸]아미노]-3-(메톡시메틸)-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산 1-[[(1-메틸에톡시)카르보닐]옥시]에틸에스테르, (2) 1-(이소프로폭시카르보닐옥시)에틸 (6R,7R)-7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)-(Z)-2-(메톡시이미노)아세트아미도]-3-메톡시메틸-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프포독심프록세틸 및 세프포독심프록세틸을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프포독심(C15H17N5O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프포독심프록세틸표준품(C21H27N5O9S2) 1.304 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

39. 세프프로질류  Cefprozil Antibiotic Drugs

1) 세프프로질은 합성하여 제조하는 항생물질로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-아미노(4-히드록시페닐)-아세틸]아미노]-8-옥소-3-(1-프로페닐)-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) (6R,7R)-7-[(R)-2-아미노-2-(p-히드록시페닐)아세트아미도]-8-옥소-3-프로페닐-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프프로질 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프프로질(C18H19N3O5S)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프프로질(Z)이성체표준품(C18H19N3O5S․H2O) 1.046 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

40. 세프피라미드류  Cefpiramide Antibiotic Drugs

1) 세프피라미드는 Cephalosporium acremoniurn 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2R)-(4-히드록시-6-메틸-3-피리디닐)카르보닐]아미노](4-히드록시페닐)아세틸]아미노]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[(R)-2-(4-히드록시-6-메틸니코딘아미도)-2-(p-히드록시페닐)아세트아미도]-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]메틸]-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프피라미드, 세프피라미드의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프피라미드(C25H24N8O7S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프피라미드표준품(C25H24N8O7S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

41. 세프피롬류  Cefpirome Antibiotic Drugs

1) 세프피롬은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질 유도체로서 (1) (-)-1-[(6R, 7R)-7-[[(Z)-2-(2-아미노-4-티아졸릴)-2-메톡시이미노아세타미드]-2-카르복시-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로 [4.2.0] 옥트-2-엔-3-일]메틸]-6,7-디히드로-5H-1-피린디늄히드록시드, (2) (-)-(6R, 7R)-7-[(Z)-2-(2-아미노-4-티아졸릴)-2-메톡시이미노아세타미드]-3-(6, 7-디히드로 5H-1-피린디늄-1-일메틸)-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세프피롬, 세프피롬의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세프피롬(C22H22N6O5S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세프피롬황산염표준품(C22H22N6O5S2․H2SO4) 1.191 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

42. 세픽심류  Cefixime Antibiotic Drugs

1) 세픽심은 Cephalosporium acremonium 또는 Cephalosporium salmosynnematum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체로 (1) (6R,7R)-7-[[(2Z)-(2-아미노-4-티아졸일)[(카르복시메톡시)이미노]아세틸]아미노]-3-에티닐-8-옥소-5-티아-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7-[2-(2-아미노-4-티아졸일)-2-(카르복시메톡시이미노)아세트아미도]-3-비닐-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 세픽심, 세픽심의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 세픽심(C16H15N5O7S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 세픽심표준품(C16H15N5O7S2․3H2O) 1.119 mg은 mg(역가)에 해당한다.

VIII. 아미노글리코시드계  Aminoglycoside Antibiotics

1. 겐타마이신류  Gentamicin Antibiotic Drugs

1) 겐타마이신은 Micromonospora purpurea 또는 Micromonospora echinospora를 배양하여 제조하는 겐타마이신 C1, 겐타마이신C2 및 겐타마이신 C1a 등의 혼합물 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 겐타마이신, 겐타마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 겐타마이신 C1(C21H43N5O7)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 겐타마이신황산염표준품(C21H43N5O7․2H2SO4) 1.458 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 네오마이신류  Neomycin Antibiotic Drugs

1) 네오마이신은 Streptomyces fradiae을 배양하여 제조하는 네오마이신 B 및 네오마이신 C의 혼합물 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 네오마이신, 네오마이신의 염 또는 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 네오마이신(C23H46N6O13)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 네오마이신황산염표준품(C23H46N6O13․3H2SO4)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1.479 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 네틸마이신류  Netilmicin Antibiotic Drugs

1) 네틸마이신은 시소마이신의 유도체로 1-N-에틸시소마이신이다.

2) 이 종류 의약품은 네틸마이신, 네틸마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 네틸마이신(C21H41N5O7)으로서의 양을 질량(역가)으로 한다.

4) 네틸마이신황산염표준품(C21H41N5O7․5/2H2SO4)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 디베카신류  Dibekacin Antibiotic Drug

1) 디베카신은 베카나마이신의 3', 4'위치의 디데옥시유도체(3', 4'-디데옥시베카나마이신)이다.

2) 이 종류 의약품은 디베카신, 디베카신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 디베카신(C18H37N5O8)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 디베카신표준품(C18H37N5O8) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 리보스타마이신류  Ribostamycin Antibiotic Drugs

1) 리보스타마이신은 Streptomyces ribosidificus을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 리보스타마이신, 리보스타마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 리보스타마이신(C17H34N4O10)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 리보스타마이신표준품(C17H34N4O10) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 미크로노마이신류  Micronomicin Antibiotic Drugs

1) 미크로노마이신은 Micromonospora sagamiensis 또는 그 변이주을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 미크로노마이신, 미크로노마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 미크로노마이신(C20H41N5O7)으로서의 양을 질량(역가)으로   표시한다.

4) 미크로노마이신황산염표준품(C20H41N5O7․5/2H2SO4) 1.529mg은 1mg(역가)에 해당한다.

7. 스트렙토마이신류  Streptomycin Antibiotic Drugs

1) 스트렙토마이신은 Streptomyces griseus을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 스트렙토마이신, 스트렙토마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 스트렙토마이신(C21H39N7O12)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 스트렙토마이신황산염표준품(C21H39N7O12․3/2H2SO4)의 무수물 1.253 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

8. 시소마이신류  Sisomicin Antibiotic Drugs

1) 시소마이신은 Micromonospora inyoensis을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 시소마이신, 시소마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 시소마이신(C19H37N5O7)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 시소마이신황산염표준품(C19H37N5O7․5/2H2SO4)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 110 ℃에서 3 시간 건조한 것 1.548 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

9. 아르베카신류  Arbekacin Antibiotic Drugs

1) 아르베카신은 디베카신의 유도체로서 1-N-[(S)-4-아미노-2-히드록시부틸일]디베카신이다.

2) 이 종류 의약품은 아르베카신, 아르베카신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아르베카신으로서의 양을 질량(역가)으로 한다.

4) 아르베카신표준품(C22H44N6O10) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

10. 아미카신류  Amikacin Antibiotic Drugs

1) 아미카신은 Streptomyces kanamyceticus를 배양하여 제조하는 카나마이신의 화학적 유도체로서 (1) O-3-아미노-3-데옥시-α-D-글루코피라노실-(1→6)-O-[6-아미노-6-데옥시-α-D-글루코피라노실-(1→4)]-N1-[(2S)-4-아미노-2-히드록시-1-옥소부틸]-2-데옥시-D-스트렙타민, (2) 1-N-[L(-)-4-아미노-2-히드로옥시부티릴]카나마이신 A이다.

2) 이 종류 의약품은 아미카신, 아미카신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아미카신(C22H43N5O13)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아미카신표준품(C22H43N5O13․2H2SO4) 1.335 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

11. 아스트로마이신류  Astromicin Antibiotic Drugs

1) 아스트로마이신은 Micromonospora oliuasferospora를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 아스트로마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아스트로마이신(C17H35N5O6)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아스트로마이신황산염표준품(C17H35N3O6․2H2SO4) 1.484 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

12. 이세파마이신류  Isepamicin Antibiotic Drugs

1) 이세파마이신은 Micromonospora purpurea을 배양하여 제조하는 겐타마이신 B의 유도체로 1-N-[(S)-3-아미노-2-히드로옥시프로피오닐] 겐타마이신 B이다.

2) 이 종류 의약품은 이세파마이신, 이세파마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 이세파마이신(C22H43N5O12)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 이세파마이신황산염표준품(C22H43N5O12․2H2SO4) 1.344 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

13. 카나마이신류  Kanamycin Antibiotic Drugs

1) 카나마이신은 Streptomyces Kanamyceticus을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 카나마이신, 카나마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 카나마이신(C18H36N4O11)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 카나마이신황산염표준품(C18H36N4O11․H2SO4․H2O) 1.24 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

14. 토브라마이신류  Tobramycin Antibiotic Drugs

1) 토브라마이신은 Streptomyces tenebrarius을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 토브라마이신, 토브라마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 토브라마이신(C18H37N5O9)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시  한다.

4) 무수물로 환산한 토브라마이신표준품(C18H37N5O9) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

IX. 안트라사이클린계  Anthracycline Antibiotics

1. 다우노루비신류  Daunorubicin Antibiotic Drugs

1) 다우노루비신은 Streptomyces peucetius을 배양하여 제조하거나 또는 기타의 방법으로 제조하는 항생물질이다.

2) 이 종류 의약품은 다우노루비신, 다우노루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 다우노루비신염산염(C27H29NO10․HCl)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 다우노루비신염산염표준품(C27H29NO10․HCl) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 독소루비신류  Doxorubicin Antibiotic Drugs

1) 독소루비신은 Streptomyces peucetius var. caesius을 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 독소루비신, 독소루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 독소루비신염산염(C27H29NO11․HCl : 579.99)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 독소루비신염산염표준품(C27H29NO11․HCl) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 이다루비신류  Idarubicin Antibiotic Drugs

1) 이다루비신은 다우노루비신의 유도체로서 (1) 9-아세틸-7-[(3-아미노-2,3,6-트리데옥시-α-L-릭소-헥소피라노실)옥시]-7,8,9,10-테트라히드로-6,9,11-트리히드록시-5,12-나프타세네디온, (2) (1S, 3S)-3-아세틸-1,2,3,4,6,11-헥사히드로-3,5,12-트리히드록시-6,11-디옥소-1-나프타세닐-3-아미노-2,3,6-트리데옥시-α-L-릭소-헥소피라노사이드이다.

2) 이 종류 의약품은 이다루비신, 아이다루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 이다루비신염산염(C26H27NO9‧HCl)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 이다루비신염산염표준품(C26H27NO9‧HCl)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 아클라루비신류  Aclarubicin Antibiotic Drugs

1) 아클라루비신은 Streptomyces galilaeus를 배양하여 제조하거나 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 아클라루비신, 아클라루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아클라루비신(C42H53NO15)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아클라루비신표준품(C42H53NO15) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 에피루비신류  Epirubicin Antibiotic Drugs

1) 에피루비신은 독소루비신의 유도체로 4-에피루비신이다

2) 이 종류 의약품은 에피루비신, 에피루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 에피루비신염산염(C27H29NO11․HCl)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 에피루비신염산염표준품(C27H29NO11․HCl) 1 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 피라루비신류  Pirarubicin Antibiotic Drugs

1) 피라루비신은 독소루비신의 유도체로서(2＂R)-4'-O-테트라히드로피라닐독시루비신이다.

2) 이 종류 의약품은 피라루비신, 피라루비신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피라루비신(C32H37NO12)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피라루비신표준품(C32H37NO12) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

X. 옥사세펨계  Oxacephem Antibiotics

1. 라타목세프류  Latamoxef Antibiotic Drugs

1) 라타목세프는 6β-아미노페니실린산을 원료로 하는 반합성에 의하여 얻어지는 항생물질로 (1) (6R, 7R)-7-[2-카르복시-2-(P-히드록시페닐)아세타미도]-7-메톡시-3[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]-메틸]-8-옥소-5-옥시-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[2-카르복시-2-P-히드록시페닐)아세타미도]-7α-메톡시-3-[[(1-메틸-1H-테트라졸-5-일)티오]-메틸]-1-옥시-1-데티아-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 라타목세프, 라타목세프의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 라타목세프(C20H20N6O9S)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 라타목세프나트륨표준품(C20H19N6NaO9S) 1.085 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 플로목세프류  Flomoxef Antibiotic Drugs

1) 플로목세프는 6β-아미노페니실린산을 원료로 하는 반합성에서 얻어지는 항생물질로 (1) (-)-(6R,7R)-7-[2-(디플로오로메틸티오)아세타미도]-7-메톡시-3-[[1-(2-히드록시에틸)-1H-테트라졸-5-일]티오메틸]-8-옥소-5-옥사-1-아자비시크로[4.2.0]옥트-2-엔-2-카르본산, (2) 7β-[2-(디플로오로메틸티아)아세타미도]-7α-메톡시-3-[[1-(2-히드록시에틸)-1H-테트라졸-5-일]티오메틸]-1-옥사-1-디티아-3-세펨-4-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 플로목세프, 플로목세프의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 플로목세프(C15H18F2N6O7S2)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 플로목세프나트륨표준품(C15H17F2N6NaO7S2) 1.044 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XI. 카바세펨계  Cabacephem Antibiotics

1. 로라카베프류  Loracarbef Antibiotic Drugs

1) 로라카베프는 베타락탐계 항생물질의 유도체로 (6R,7S)-7-[(R)-2-아미노-2-페닐아세트아미도]-3-클로로-8-옥소-1-아자비시클로[4.2.0]옥트-2-엔-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 로라카베프, 로라카베프의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 로라카베프(C16H16ClN3O4)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 로라카베프표준품(C16H16ClN3O4) 1.051 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XII. 카바페넴계  Carbapenem Antibiotics

1. 메로페넴류  Meropenem Antibiotic Drugs

1) 메로페넴은 Streptomyces cattleya를 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체 또는 합성으로 제조하는 항생물질로 (-)-(4R,5S,6S)-3-[[(3S,5S)-5-(디메틸카르바모일)-3-피롤리디닐]티오]-6-[(1R)-1-히드록시에틸]-4-메틸-7-옥소-1-아자비시클로[3.2.0]헵트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 메로페넴, 메로페넴의 삼수화물, 메로페넴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메로페넴(C17H25N3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메로페넴표준품(C17H25N3O5S․3H2O) 1.141 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 에르타페넴류  Ertapenem Antibiotic Drugs

1) 에르타페넴은 Streptomyces cattleya를 배양하여 제조하는 항생물질의 유도체 또는 합성으로 제조하는 항생물질로서 [4R-[3(3S*,5S*),4α,5β,6β(R*)]]-3-[[5-[[(3-카르복시페닐)아미노]카르보닐]-3-피롤리디닐]티오]-6-(1-히드록시에틸)-4-메틸-7-옥소-1-아자비시클로[3.2.0]헵트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 에르타페넴, 에르타네펨의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 에르타페넴(C22H25N3O7S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 에르타페넴나트륨표준품(C22H24NaN3O7S) 1.046 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 이미페넴류  Imipenem Antibiotic Drug

1) 이미페넴은 Streptomyces catteya을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질의 유도체 또는 합성한 물질로 (+)-(5R,6S)-3-[[(2-포름이미도일아미노)에틸]티오]-6-[(R )-1-히드록시에틸]-7-옥소-1-아자비시클로[3.2.0]헵타-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 이미페넴, 이미페넴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 이미페넴(C12H17N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 이미페넴표준품(C12H17N3O4S․H2O) 1.066 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 파니페넴류  Panipenem Antibiotic Drugs

1) 파니페넴은 Streptomyces cattleya를 배양해서 제조하는 항생물질의 유도체 또는 합성으로 제조하는 항생물질로서 (+)-(5R,6S)-3-[(S)-1-(아세티미딜피롤리딘-3-일)티오]-6-[(R)-1-히드록시에틸]-7-옥소-1-아자비시크로[3.2.0]헵트-2-엔-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 파니페넴, 파니페넴의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 파니페넴(C15H21N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 파니페넴표준품(C15H21N3O4S․CH4N2S) 1.224 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XIII. 테트라사이클린계  Tetracycline Antibiotics

1. 독시사이클린류  Doxycycline Antibiotic Drugs

1) 독시사이클린은 옥시테트라사이클린의 6위치의 데옥시 유도체(α-6-데옥시-옥시테트라사이클린)이다.

2) 이 종류 의약품은 독시사이클린, 독시사이클린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 독시사이클린(C22H24N2O8)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 독시사이클린표준품(C22H24N2O8ㆍHCl․1/2C2H5OH․1/2H2O) 1.155 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 메클로사이클린류  Meclocyline Antibiotic Drugs

1) 메클로사이클린은 7-클로로-6-메틸렌-5-히드록시테트라사이클린이다.

2) 이 종류 의약품은 메클로사이클린, 메클로사이클린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메클로사이클린(C22H21ClN2O8)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메클로사이클린표준품(C22H21ClN2O8) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 메타사이클린류  Methacycline Antibiotic Drugs

1) 메타사이클린은 옥시테트라사이클린의 6위치의 메틸렌유도체(6-메틸렌옥시테트라사이클린)이다.

2) 이 종류 의약품은 메타사이클린, 메타사이클린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메타사이클린염산염(C22H22N2O8․HCl)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메타사이클린염산염표준품(C22H22N2O8․HCl)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 미노사이클린류  Minocycline Antibiotic Drugs

1) 미노사이클린은 테트라사이클린의 6위치의 데옥시 및 데메틸, 7위치의 디메틸아미노유도체(7-디메틸아미노-6-데옥시-6-데메틸테트라사이클린)이다.

2) 이 종류 의약품은 미노사이클린, 미노사이클린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 미노사이클린(C23H27N3O7)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 미노사이클린염산염표준품(C23H27N3O7․HCl․2H2O) 1.159 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 옥시테트라사이클린류  Oxytetracycline Antibiotic Drugs

1) 옥시테트라사이클린은 Streptomyces rimosus을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 옥시테트라사이클린, 옥시테트라사이클린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 옥시테트라사이클린(C22H24N2O9)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 옥시테트라사이클린표준품(C22H24N2O9․2H2O)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 3 시간 건조한 것 1.082 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XIV. 페니실린계  Penicillin Antibiotics

1. 나프실린류  Nafcillin Antibiotic Drugs

1) 나프실린은 6-아미노페니실란산의 에톡시나프틸 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 나프실린, 나프실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 나프실린(C21H22N2O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 나프실린나트륨표준품 1.089 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 디클록사실린류  Dicloxacillin Antibiotic Drugs

1) 디클록사실린은 6-아미노페니실란산의 메틸디클로르페닐이속사조릴 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 디클록사실린, 디클록사실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 디클록사실린(C19H17Cl2N3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 디클록사실린나트륨표준품 1.085 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 메실리남류  Mecillinam Antibiotic Drugs

1) 메실리남은 (1) 6-[(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)-메틸렌]아미노]-3,3-디메틸-7-옥소-4-티오]-아자비시클로-[3.2.0]헵탄-2-카르복실레이트, (2)6-[(헥사히드로-1H-아제핀-1-일)메틸렌아미노]페니실린산이다.

2) 이 종류 의약품은 메실리남 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메실리남(C15H23N3O3S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메실리남표준품(C15H23N3O3S) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 메즐로실린류  Mezlocillin Antibiotic Drugs

1) 메즐로실린은 6-아미노페니실란산의 메틸설포닐옥소이미다졸리딘카르보닐아미노벤질 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 메즐로실린, 메즐로실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메즐로실린(C21H25N5O8S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메즐로실린나트륨표준품(C21H24NaN5O8S2․H2O) 1.074 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 메티실린류  Methicillin Antibiotic Drugs

1) 메티실린은 6-아미노페니실란산의 디메톡시페닐 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 메티실린, 메티실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메티실린(C17H20N2O6S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메티실린나트륨표준품(C17H19N2NaO6S․H2O) 1.105 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 메탐피실린류  Metampicillin Antibiotic Drugs

1) 메탐피실린은 (1) 3,3-디메틸-6-[[(메틸렌아미노)페닐아세틸]아미노]-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]-헵탄-2-카르본산, (2) D-6-[α-(메틸렌아미노)페닐아세트미도]페니실란산이다.

2) 이 종류 의약품은 메탐피실린, 메탐피실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 메탐피실린(C17H19N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 메탐피실린나트륨표준품(C17H18N7NaO4S) 1.061 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

7. 설베니실린류  Sulbenicillin Antibiotic Drugs

1) 설베니실린은 6-아미노페니실란산의 설포벤질유도체로 (1) (2S,5R,6R)-3,3-디메틸-7-옥소-6-[[(2R)-페닐설포아세틸]아미노]-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르본산, (2) α-설포벤질페니실린이다.

2) 이 종류 의약품은 설베니실린, 설베니실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 설베니실린(C16H18N2O7S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 설베니실린나트륨표준품(C16H16N2Na2O7S2) 1.106 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

8. 설타미실린류  Sultamicillin antibiotic Drugs

1) 설타미실린은 6-아미노페니실란산의 유도체로 (1) 히드록시메틸(+)-(2S,5R,6R)-6-[(R)-(2-아미노-2-페닐아세타미도]-3,3-디메틸-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르복시라-드, (2) (2S,5R)-3,3-디메틸-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르복시라-드(에스테르) S,S-디옥시드이다.

2) 이 종류 의약품은 설타미실린, 설타미실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 설타미실린(C25H30N4O9S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 설타미실린표준품(C25H30N4O9S2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

9. 시클라실린류  Ciclacillin Antibiotic Drugs

1) 시클라실린은 6-아미노페니실란산의 아미노시클로헥실유도체로서 (1) (2S,5R,6R)-6-[[(1-아미노시클로헥실)카르보닐]아미노]-3,3-디메틸-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르본산, (2) (1-아미노시클로헥실)페니실린이다.

2) 이 종류 의약품은 시클라시리린, 시클라실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 시클라실린(C15H23N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시  한다.

4) 시클라실린표준품(C15H23N3O4S) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

10. 아목시실린류  Amoxicillin Antibiotic Drugs

1) 아목시실린은 6-아미노페니실란산의 아미노히드록시벤질유도체로서 (1) (2S,5R,6R)-6-[[(2R)-아미노(4-히드록시페닐)아세틸]아미노]-3,3-디메틸-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르본산, (2) p-히드록시암피실린이다.

2) 이 종류 의약품은 아목시실린, 아목시실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아목시실린(C16H19N3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시  한다.

4) 아목시실린표준품(C16H19N3O5S·3H2O) 1.148 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

11. 아스폭시실린류  Aspoxicillin Antibiotic Drugs

1) 아스폭시실린은 6-아미노페니실란산의 N4-메틸-D-아스파라기닐아미노히드록시벤질유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 아스폭시실린, 아스폭시실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아스폭시실린(C21H27N5O7S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 아스폭시실린표준품(C21H27N5O7S·3H2O) 1.110 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

12. 아즐로실린류  Azlocillin Antibiotic Drugs

1) 아즐로실린은 (1) (2S,5R,6R)-3,3-디메틸-7-옥소-6-[[(2R)-[[(2-옥소-1-이미다졸리디닐)카르보닐]아미노]페닐아세틸]아미노]-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]헵탄-2-카르본산, (2) D-α-[(이미다졸리딘-2온-1-일)카르보닐아미노]벤질페니실린이다.

2) 이 종류 의약품은 아즐로실린, 아즐로실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 아즐로실린(C20H23N5O6S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시  한다.

4) 아즐로실린나트륨표준품(C20H22N5NaO6S) 1.128 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

13. 암피실린류  Ampicillin Antibiotic Drugs

1) 암피실린은 6-아미노페니실란산의 아미노벤질유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 암피실린, 암피실린의 에톡시카르보닐옥시에틸유도체(바캄피실린), 암피실린의 프탈리딜유도체(탈암피실린) 및 암피실린의 메틸옥소디옥소레닐메틸유도체 (렌암피실린) 또는 이들의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 암피실린(C16H19N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 암피실린표준품(C16H19N3O4S·3H2O) 1.155 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

암피실린프탈리딜표준품(C24H23N3O6S·HCl) 1.482 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

14. 클록사실린류  Cloxacillin Antibiotic Drugs

1) 클록사실린은 6-아미노페니실란산의 메틸클로르페닐이속사조릴 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 클록사실린, 클록사실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 클록사실린(C19H18ClN3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 클록사실린나트륨표준품(C19H17ClN3NaO5S․H2O) 1.092 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

15. 티카실린류  Ticarcillin Antibiotic Drugs

1) 티카실린은 6-아미노페니실란산의 카르복시티에닐메틸 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 티카실린, 티카실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 티카실린(C15H16N2O6S2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 티카실린나트륨표준품(C15H14N2Na2O6S2) 1.114 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

16. 페네티실린류  Phenethicillin Antibiotic Drugs

1) 페네티실린은 6-아미노페니실란산의 펜옥시에틸유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 페네티실린, 페네티실린의 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 L-페네티실린칼륨(C17H19KN2O5S)으로서 양을 단위(역가)로 한다.

4) L-페네티실린칼륨표준품(C17H19KN2O5S) 0.68 μg은 1 단위(역가)에 해당한다.

17. 페니실린 G 류  Penicillin G Antibiotic Drugs

1) 페니실린 G(벤질페니실린)는 Penicillium속을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 페니실린, 페니실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 페니실린 G 나트륨(C16H17N2NaO4S)으로서의 양을 단위(역가)로 표시한다.

4) 페니실린나트륨 G 나트륨 표준품(C16H17N2NaO4S) 0.6 μg은 1 단위(역가)에 해당한다.

18. 펜옥시메틸페니실린류  Phenoxymethylpenicillin Antibiotic Drugs

1) 펜옥시메틸페니실린(페니실린V)은 Penicillium속을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 펜옥시메틸페니실린, 펜옥시메틸페니실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 펜옥시메틸페니실린(C16H18N2O5S)으로서의 양을 단위(역가)로 표시한다.

4) 펜옥시메틸페니실린표준품(C16H18N2O5S) 0.59 μg은 1 단위(역가)에 해당한다.

19. 플루클록사실린류  Flucloxacillin Antibiotic Drugs

1) 플루클록사실린은 6-아미노페니실란산의 메틸클로로플루오로페닐이속사조릴유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 플루클록사실린, 플루클록사실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 플루클록사실린(C19H17ClFN3O5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 플루클록사실린나트륨표준품(C19H16ClFN3NaO5S․H2O) 1.088 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

20. 피밤피실린류  Pivampicillin Antibiotic Drugs

1) 피밤피실린은 암피실린의 아실옥시메틸에스테르로서 피발로일옥시메틸 D-α-아미노벤질페니실리네이트이다.

2) 이 종류 의약품은 피밤피실린, 피밤피실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피밤피실린(C22H29N3O6S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피밤피실린표준품(C22H29N3O6S) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

21. 피브라실린류  Fibracillin Antibiotic Drugs

1) 피브라실린은 6-아미노페니실란산의 클로로페녹시-2-메틸프로피온아미도벤질유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 피브라실린, 피브라실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피브라실린(C26H28ClN3O6S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피브라실린표준품(C26H28ClN3O6S) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

22. 피브메실리남류  Pivmecillinam Antibiotic Drugs

1) 피브메실리남은 6-아미노페니실란산의 헥사히드로아제피닐메티리딘유도체(메실리남)의 피발로일옥시메틸유도체이다.

2) 이 종의 의약품은 피브메실리남, 피브메실리남의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품은 역가는 메실리남(C15H23N3O3S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피브메실리남염산염표준품(C21H35N3O5S․HCl) 1.463 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

23. 피페라실린류  Piperacillin Antibiotic Drugs

1) 피페라실린은 6-아미노페니실란산의 4-에틸-2,3-디옥소피페라딘카르복사미드벤질 유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 피페라실린, 피페라실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피페라실린(C23H27N5O7S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피페라실린표준품(C23H27N5O7S․H2O) 1.035 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

24. 헤타실린류  Hetacillin Antibiotic Drugs

1) 헤타실린은 6-아미노페니실란산의 N,N'-이소프로필리덴아미노벤질유도체이다.

2) 이 종류 의약품은 헤타실린, 헤타실린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 헤타실린(C19H23N3O4S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 헤타실린표준품(C19H23N3O4S) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XV. 펩타이드계  Peptide Antibiotics

1. 그라미시딘류  Gramicidin Antibiotic Drugs

1) 그라미시딘은 Bacillus brevis Dubos을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 그라미시딘, 그라미시딘의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 그라미시딘(분자식미상)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 그라미시딘표준품을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3시간 건조한 것 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 닥티노마이신류  Dactinomycin Antibiotic Drugs

1) 닥티노마이신은 Streptomyces parvullus를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 닥티노마이신 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 닥티노마이신(C63H86N12O16)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 닥티노마이신표준품을 0.67 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg은   1 mg(역가)에 해당한다.

3. 바시트라신류  Bacitracin Antibiotic Drugs

1) 바시트라신은 Bacillus subtilis var. Tracy를 배양하여 제조하는 바시트라신 A를 주성분으로 하는 것 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 바시트라신, 바시트라신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품 역가는 바시트라신 A(C66H103N17O16S)로서의 양을 단위로 표시한다.

4) 바시트라신표준품을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 23.8 μg은 1 단위에 해당한다.

4. 엔비오마이신류  Enviomycin Antibiotic Drugs

1) 엔비오마이신은 Streptomyces griseoverticillatus var. tuberacticus N6-130을 배양하여 제조하는 튜베락티노마이신 N 및 튜베락티노마이신 O 등의 혼합물 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 엔비오마이신, 엔비오마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 튜베락티노마이신 N(C25H43N13O10)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 엔비오마이신염산염표준품(C25H43N13O10․3HCl)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1.16 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

5. 카프레오마이신류  Capreomycin Antibiotic Drugs

1) 카프레오마이신은 Streptomyces capreolus을 배양하여 제조한 카프레오마이신 1A 및 카프레오마이신 1B 등의 혼합물이다.

2) 이 종류 의약품은 카프레오마이신, 카프레오마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 카프레오마이신(C25H44N44O7 ~ 8)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 카프레오마이신황산염표준품(C25H44N14O8․2H2SO4 및 C25H44N14O7․2H2SO4)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 100℃에서 4 시간 건조한 것 1.087 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 콜리스틴류  Colistin Antibiotic Drugs

1) 콜리스틴은 Bacillus polymyxa var. colistinus을 배양하여 제조한 것으로 그 주성분은 콜리스틴 A 및 콜리스틴 B이다.

2) 이 종류 의약품은 콜리스틴, 콜리스틴의 염 또는 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 콜리스틴 A(C53H100N16O13)로서의 양을 질량(역가) 또는 단위로 표시한다.

4) 콜리스틴표준품(C53H100N16O13․5/2H2SO4)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1.21 mg은 1 mg(역가)에 해당하고 1 mg(역가)은 30000 단위(역가)에 해당한다.

7. 티로트리신류  Tyrothricin Antibiotic Drugs

1) 티로트리신은 Tyrothrix군의 세균을 배양하여 제조하는 폴리펩타이드 항생물질의 혼합물이다.

8. 폴리믹신 B 류  Polymyxin B Antibiotic Drugs

1) 폴리믹신 B는 Bacillus polymyxa을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 폴리믹신 B1 및 폴리믹신 B2를 주성분으로 하는 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 폴리믹신 B, 폴리믹신 B의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 폴리믹신 B(C43H82N16O12)으로서의 양을 단위(역가)로 표시한다.

4) 폴리믹신 B 황산염표준품(C43H82N16O12․xH2SO4) 0.129 μg은 1 단위(역가)에 해당한다.

XVI. 폴리엔마크로라이드계  Polyene Macrolide Antibiotics

1. 니스타틴류  Nystatin Antibiotic Drugs

1) 니스타틴은 Streptomyces noursei을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 니스타틴 및 니스타틴을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 니스타틴(C47H75NO17)으로서의 양을 단위로 표시한다.

4) 니스타틴표준품을 0.7 kPa 이하의 감압으로 40 ℃에서 2 시간 건조한 것 0.27 μg는 1단위에 해당한다.

2. 암포테리신 B 류  Amphotericin B Antibiotic Drugs

1) 암포테리신 B는 Streptomyces nodosus을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 암포테리신 B, 암포테리신 B의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 암포테리신 B(C47H73NO17)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 암포테리신 B표준품(C47H73NO17)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 피마리신류  Pimaricin Antibiotic Drugs

1) 피마리신은 Streptomyces natalensis을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 피마리신 및 피마리신을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피마리신(C33H47NO13)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피마리신표준품(C33H47NO13) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

XVII. 기타 항생물질

1. 그리세오풀빈류  Griseofulvin Antibiotic Drugs

1) 그리세오풀빈은 Penicillium griseofulvum 또는 Penicillium janczewskii를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 그리세오풀빈 및 그리세오풀빈을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 그리세오풀빈(C17H17ClO6)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 그리세오풀빈표준품 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

2. 무피로신류  Mupirocin Antibiotic Drugs

1) 무피로신은 Pseudomonas fluorescens를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 무피로신, 무피로신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 무피로신(C26H44O9)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 무피로신표준품(C26H44O9) 1.075 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

3. 미토마이신 C류  Mitomycin C Antibiotic Drugs

1) 미토마이신C는 Streptomyces caespitosus를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 미토마이신 C, 미토마이신 C의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 미토마이신 C(C15H18N4O5)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 미토마이신 C표준품(C15H18N4O5)을 0.7 kPa 이하의 감압으로 60 ℃에서 3 시간 건조한 것 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

4. 설박탐류  Sulbactam Antibiotic Drugs

1) 설박탐은 6-아미노페니실란산의 유도체로 (2S, 5R)-3, 3-디메틸-7-옥소-4-티아-1-아자비시클로[3.2.0]-헵탄-2-카르본산-4, 4-디옥시드이다.

2) 이 종류 의약품은 설박탐, 설박탐의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 설박탐(C8H11NO5S)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 설박탐표준품(C8H11NO5S) 1 mg은 1 mg(역가)을 함유한다.

5. 스펙티노마이신류  Spectinomycin Antibiotic Drugs

1) 스펙티노마이신은 Streptomyces spectabilis을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 항생물질이다.

2) 이 종류 의약품은 스펙티노마이신, 스펙티노마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 스펙티노마이신(C14H24N2O7)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 스펙티노마이신염산염표준품(C14H24N2O7․2HCl․5H2O) 1.490 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

6. 시클로세린류  Cycloserine Antibiotic Drugs

1) 시클로세린은 Streptomyces orchidaceus, Streptomyces garyphalus 또는 Streptomyces  lavendulae을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질이다 .

2) 이 종류 의약품은 시클로세린, 시클로세린의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 시클로세린(C3H6N2O2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 시클로세린표준품(C3H6N2O2) 1 mg는 1 mg(역가)에 해당한다.

5) 테리지돈은 시클로세린 2 분자와 테레프탈알데히드를 축합시켜 얻어지는 [1,4-비스-D-(3-옥소-4-이속사졸리디닐-이미노메틸)-벤젠이다.

7. 티암페니콜류  Thiamphenicol Antibiotic Drugs

1) 티암페니콜은 2,2-디클로로-N-[(αR,βR)-β-히드록시-α-히드록시메틸-4-메틸설포닐-펜메틸]아세트아미드이다.

2) 이 종류 의약품은 티암페니콜, 티암페니콜의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품은 티암페니콜(C12H15Cl2NO5S)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

8. 클라불란산류  Clavulanic Acid Antibiotic Drugs

1) 클라불란산은 Streptomyces clavuligenus ATCC 27064를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 (Z)-(2R,5R)-3-(2-히드록시에틸리덴)-7-옥소-4-옥사-1-아자비시클로[3.2.0]펩탄-2-카르본산이다.

2) 이 종류 의약품은 클라불란산, 클라불란산의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품 역가는 클라불란산(C8H9NO5)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 클라불란산표준품(C8H8LiNO5) 1.030 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

9. 클로람페니콜류  Chloramphenicol Antibiotic Drugs

1) 클로람페니콜은 Streptomyces venezuelae 또는 Streptomyces omiyaensis를 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 이와 동일한 물질로 D(-)-트레오-1-파라니트로페닐-2-디클로로아세타미드-1,3-프로판디올이다.

2) 이 종류 의약품은 클로람페니콜, 클로람페니콜의 유도체 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 클로람페니콜(C11H12Cl2N2O5)로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 클로람페니콜표준품(C11H12Cl2N2O5) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

10. 포스포마이신류  Fosfomycin Antibiotic Drugs

1) 포스포마이신은 Streptomyces fradiae의 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 (-)-(1R,2S)-1,2-에폭시프로필포스폰산이다.

2) 이 종류 의약품은 포스포마이신, 포스포마이신의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 포스포마이신(C3H7O4P)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 포스포마이신표준품(C11H18NO4P․H2O) 2.008 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

11. 퓨시드산류  Fusidic Acid Antibiotic Drugs

1) 퓨시드산은 Fusidium coccineum을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 얻어지는 이와 동일한 물질이다.

2) 이 종류 의약품은 퓨시드산, 퓨시드산의 염 및 이를 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 퓨시드산(C31H48O6)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 퓨시드산표준품[C31H48O6․(HOCH2CH2)2NH] 1.203 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.

12. 피롤니트린류  Pyrrolnitrin Antibiotic Drugs

1) 피롤니트린은 Pseudomonas pyrrocinia 또는 Pseudomonas aeruginosa을 배양하여 제조하거나 또는 다른 방법으로 제조하는 3-클로로-4-(3-클로로-2-니트로페닐)피롤이다.

2) 이 종류 의약품은 피롤니트린, 피롤니트린을 함유하는 제제로 한다.

3) 이 종류 의약품의 역가는 피롤니트린(C10H6Cl2N2O2)으로서의 양을 질량(역가)으로 표시한다.

4) 피롤니트린표준품(C10H6Cl2N2O2) 1 mg은 1 mg(역가)에 해당한다.